אני רוצה לפתח טיפול טוב יותר לילדים עם עצמות שבורות. באופן ספציפי, אני רוצה למנוע היווצרות עצם בצלחת צמיחת הסחוס השבור כי, אחרת. האיבר השבור לא יתארך כרגיל.
בשלב הראשון, היינו צריכים לפתח מודל עכבר מדויק יותר כדי לבחון טיפולים חדשים ולקבוע מנגנון פעולה. טיפולים קונבנציונליים כוללים כריתת הגשר הגרמי לאחר פציעה, והחדרת חומרים אינטרפוזיציוניים כמו רקמת שומן. שיטות אלה אינן מחדשות את הסחוס של לוחית הצמיחה, ולעתים קרובות דורשות ניתוחים נוספים.
עם זאת, גישות חדשות להנדסת רקמות שאנו בודקים כעת, כוללות מולקולות מקומיות כדי להגביר את התחדשות הסחוס תוך מניעת היווצרות גשר גרמי. מודלים של בעלי חיים חיוניים לבדיקת גישות להנדסת רקמות להתחדשות סחוס לוחית גדילה פגועה. יש פשרות בין דיוק לעלות.
חיות גדולות יותר כמו כבשים מציעות דיוק גבוה יותר, ועקביות במודלים של פציעות, אך הן יקרות בהרבה מחיות קטנות יותר כמו עכברים. מטרת המאמץ שלנו כאן היא להבין את הבסיס התאי לתגובת רקמה זו שהתרחשה לאחר הפגיעה בלוח הגדילה. באמצעות שלושת הצבעים שלנו עכברים פלואורסצנטיים, אנו מסוגלים למפות את התאים המפיצים צבעים אלה, יחד עם כתמים פלואורסצנטיים אחרים, ומינרלים סומטיים מנוגדנים, ולמפות אותם בחזרה לכתם כרומוגני מוכר.
זה מאפשר לנו להעריך את הדינמיות של התיקון, ולזהות את התאים האחראים לתגובת רקמות זו. הפלואורסצנטיות הטבעית של הכונדרוציטים ההיפרטרופיים בעכברים טרנסגניים צעירים אלה מאפשרת לחוקר תחת הדמיה חיה ליצור במדויק פגיעה רלוונטית קלינית בלוחיות גדילה המחקה פציעה של ילד. כמו כן, הסחוס המפרקי נותר ללא פגע, וניתן להשתמש בריאגנטים הנרחבים הזמינים למחקרים מכניסטיים בעכברים.
כדי להתחיל, מקם שלושה עכברים מורדמים בכל פעם במקביל על קיבתם בארון הרנטגן. שחקו את רגלי העכברים כך שעצמות הטיביאל לא יוסתרו תחתם. לצורך רישום אורך הגפיים הראשוני מקמו סולם רדיופאק ליד העכברים, ובצעו הדמיית רנטגן עם 26 קילו-וולט ו-800 מיליאמפר כדי ללכוד את התמונות הטיביאליות שלהם.
בחדר ניתוח בעלי החיים, הרכיבו את מערכת קידוח השיניים האלקטרונית המהירה. חבר את בקר כף הרגל האלקטרוני ואת הידית ליחידת הבקרה, וכסה את כבל הידית בגרביים של צינור מחסום משטח שעבר חיטוי. הגדר את הבקר ביחס כונן של אחד לאחד עם מקסימום של 30, 000 סיבובים לדקה.
לאחר מכן, הניחו את צינור מכונת האיזופלורן הגמיש מכוסה בגרבי צינור מחוטאים על במת המיקרוסקופ הסטריאופוני הפלואורסצנטי. כדי להתחיל, לקבוע את אורך הגפה הראשוני של העכבר עם הדמיית רנטגן. חברו את בור השיניים העגול הסטרילי בקוטר 0.5 מ"מ לידית ובחרו את שאר כלי הניתוח הדרושים.
לאחר הרדמה החיה, מיד לנהל מחצית המינון שנקבע של buprenorphine תת עורית. מרחו חומר סיכה עיני כדי להגן על עיני העכבר מפני ייבוש, והעבירו את העכבר במצב שכיבה על במת המיקרוסקופ הסטריאופוני. יש לחטא את הגפה האחורית הימנית, אזור האגן, האספקט הקדמי של הגפה האחורית השמאלית והזנב ברצף עם יוד פובידון, ולאחר מכן 70% אתנול.
תחת תאורת אור בהירה באמצעות אזמל מספר 15, צור חתך עור של חמישה מילימטר ממש מתחת למפרק הברך כדי לחשוף את הקצה הפרוקסימלי של השוקה הימנית. שמור על השוקה הנגדית השמאלית ללא פגע כך שתשמש כבקרה פנימית ללא פגיעה. לאחר מכן, באמצעות החלק האחורי של להב אזמל מספר 15, לבצע דיסקציה קהה אנכית דרך השריר העליון בטיביה הפרוקסימלית, הסרת הרקמה הרכה לחשיפה ברורה של הראש הטיביאלי.
לאחר כיבוי אורות חדר הניתוח, בחר את תעלת הפלואורסצנטיות הנכונה כדי להאיר את האזור הרצוי של צלחת הגידול. לאחר מכן, כוונן את פתח העור של העכבר מעט יותר פרוקסימלי, ולאחר מכן דיסטלי, כדי להבטיח שאזור לוחית הצמיחה ההיפרטרופית של לוחית הגידול הטיביאלית נמצא בתצוגה, ולא צלחת צמיחת עצם הירך. כדי ליצור נגע דמוי Salter-Harris Type II, מקם את בור מקדח השיניים בקוטר 0.5 מ"מ באמצע אזור לוחית הגידול ההיפרטרופית.
שמור את הבור והגפה מקבילים למשטח העבודה, כך שמסלול הכניסה לבור לא יעבור בזווית לתוך האפיפיזה ולא יעבור דרך כל צלחת הצמיחה הרכה. הפעילו לחץ על דוושת המקדחה כדי להתחיל סיבוב בור, ולחצו בעדינות על הבור לתוך לוחית הצמיחה, ועצרו לפני שהפגם נכנס עמוק יותר מקוטר הבור. השקו את אתר הנגע בטיפת PBS סטרילית כדי להסיר לכלוך.
באמצעות בדיקה חניכיים, לאשר כי עומק הפגמים הוא 0.5 מ"מ. לאחר מכן, יישרו בזהירות מחדש את קצוות העור. לאחר מכן, השתמש בטכניקת תפירה קטועה עם 5-0 תפרים של חומצה פוליגליקולית כדי לאטום את חתך העור.
לדיסקציה של רקמות, בודדו את שתי הגפיים האחוריות השלמות מהחיה שעברה המתת חסד, והוציאו את העור והשריר מאזור הקופסית של העצם והברך. לאחר מכן, באמצעות מספריים לנתח מיקרו, הבלו את הפטלה בזהירות. השתמש מזרק אינסולין 29 מד כדי להפיץ ביסודיות פורמלין קר 10% חוצץ בכל האזורים של חלל הברך.
לבסוף, נתק את האזור הדיאפיזיאלי של עצם הירך והטיביה כדי לשפר את הגישה המקובעת לחלל המח. לקשור את רקמת המפרק עם גזה למגבת דקה. הכניסו את הגפיים האחוריות לקיבוע, והניחו את הרקמה בארבע מעלות צלזיוס כדי לשמור עליה במצב מורחב לחלוטין למשך 24 עד 36 שעות.
טיביאס פצוע הראה צמיחה מופחתת באורכו בהשוואה לקבוצת ביקורת שלא נפגעה שלושה שבועות לאחר הניתוח בחתכים דו-ממדיים של העצם. לוחיות גדילה פגועות הראו הפרעה באזור ההיפרטרופי, ושכבה מסוידת זמנית עם הפרעה קלה בלבד באזור השגשוג. היווצרות גשר גרמי בתוך לוחיות הגדילה הפגועות נצפתה באופן עקבי בכל ששת העכברים, והרוב נוצר בסמוך לאמצע לוחית הגדילה, למרות הגישה הצידית.
הגישה הפלואורסצנטית הרב-צבעונית אפשרה בחינה מפורטת של התמיינות כונדרוציטים באזור הגשר הגרמי.
