הערכת ציטוטוקסיות תלויה בנוגדנים, בתיווך תאים בתאי סרטן באמצעות מבחן ביולוגי של מדווח ציטוטוקסיות בתיווך תאים תלויי נוגדנים

ידוע היטב כי ציטוטוקסיות תלויה בנוגדנים, בתיווך תאים היא מנגנון חשוב שבאמצעותו נוגדנים מפעילים השפעות מסוימות בתיווך חיסוני. לכן אנו רוצים למצוא שיטה טובה יותר לבדיקת היעילות של תרופת נוגדנים בטיפול בסרטן, באמצעות ADCCSA. הפרוטוקול מהיר ופשוט.

על ידי שימוש בפרוטוקול ערבוב וקריאה פשוט, אנו יכולים להשיג את התוצאה תוך יום אחד, ובכך לזרז את המחקר. על ידי שימוש בבדיקה ביולוגית של ADCC, אנו יכולים לבצע סינון המוני של תרופת נוגדנים טיפולית בצורה מדויקת יותר. יחס האות לרעש של הבדיקה גבוה, מה שיכול לסייע בהערכה מדויקת של הנוגדן הטיפולי.

כדי להתחיל, תרבית, תאי המטרה תאי T BHT 101 ו- SW 1736 עד שהם מגיעים למפגש של 80% בצלוחיות T75. לאחר הסרת המדיה, שטפו את התאים פעם אחת עם PBS ודגרו אותם עם מיליליטר אחד של מאגר דיסוציאציה של תאים לא אנזימטיים למשך חמש דקות. הוסף PBS כדי לעצור את התגובה.

סובב את התאים ב-135G למשך חמש דקות, ולאחר מכן הוסף חמישה מיליליטר PBS. קבע את ספירת התאים וזרע את התאים ב-15,000 תאים לבאר ב-96 בארות, מיקרו-לוחות פוליסטירן לבנים עם תחתית ברורה ושטוחה. כדי להתחיל, הכן את תאי ה-T היעד BHT 101 ו-SW 1736 לבדיקה.

לאחר מכן הכינו את Cetuximab להיקשר לקולטן גורם הגדילה האפידרמלי, ואת Bevacizumab כבקרה שלילית. להכנת מאגר הבדיקה הביולוגית של ADCC, הוסף 1.4 מיליליטר של סרום אימונוגלובולין G נמוך ל-33.6 מיליליטר של RPMI 1640, כפי שסופק בערכה. בעזרת המאגר יש לדלל את הנוגדנים להכנת 400 מיקרוליטר מכל נוגדן בשלושה ריכוזים שונים.

מחממים מראש את מאגר הבדיקה הביולוגית של ADCC באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות. הסר את תאי אפקטור הבדיקה הביולוגית של ADCC מאחסון קר של מינוס 80 מעלות צלזיוס, והנח אותם באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך כשתיים עד שלוש דקות. נדנד בעדינות ובדוק חזותית את הבקבוקון מבלי להפוך אותו במהלך תהליך ההפשרה.

לאחר מכן העבירו 630 מיקרוליטר של תאי אפקטור לצינור של 15 מיליליטר, המכיל 3.6 מיליליטר של מאגר ADCCSA. הפוך בעדינות את הצינור פעמיים כדי לערבב את התאים עם המאגר. כדי להתחיל, הכינו את תאי המטרה, תאי האפקטור והנוגדנים הרצויים לבדיקת ה-ADCC.

לאחר דגירה של לילה, הסר את המדיה מתאי המטרה והוסף 25 מיקרוליטר של חומצה ביולוגית ADCC ואחריה 25 מיקרוליטר של אנטגוניסטים לבארות מתאימות. לאחר מכן הוסף 75,000 תאים עריקים ב-25 מיקרוליטר של מאגר בדיקה ביולוגית ADCC לכל באר לתוך 96 המיקרו-צלחת המכילה תאי מטרה, ודגירה על הצלחת למשך שש שעות ב-37 מעלות צלזיוס. כדי להכין את מגיב בדיקת הלוציפראז, הוסף מאגר בדיקת לוציפראז למצע בדיקת הלוציפראז הליופילי.

לאחר מכן הוסף 75 מיקרוליטר של מגיב בדיקת לוציפראז לכל באר של הצלחת המכילה תאי מטרה, נוגדנים ותאי אפקטור ודגר את הצלחת למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. בעזרת לומינומטר, מדוד את אות הזוהר בכל באר כדי לספק קריאה כמותית של פעילות ADCC. לניתוח נתונים, חשב את אינדוקציית הקיפול באמצעות הנוסחה.

צטוקסימאב גרם לפעילות ADCC גבוהה יותר בכל הריכוזים שנבדקו, אך לא זוהתה פעילות ADCC עם Bevacizumab בשורות התאים BHT 101 ו-SW 11736, מה שמדגים את השפעת ה-ADCC של התמקדות באנטיגנים חוץ-תאיים של ממברנה EGFR עבור שני קווי התאים.