פרוטוקול זה מתמקד בנושא אספקת איברים השתלה מוגבלת על ידי הקלת הערכה של אסטרטגיות מיזוג cardioprotective שונים כדי לאפשר את השימוש בלבבות שנתרמו לאחר המוות במחזור הדם. מניחים את החיה על משטח חימום מוגדר בינוני. לאחר אישור חוסר תגובה קמצוץ בוהן בחולדה בוגרת הרדמה, להכניס בדיקה טמפרטורה רקטלי.
חבר חיישן אוקסימטר דופק transdermal לכפות רגליים אחוריות, ולכסות את החולדה עם כרית סופגת כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. הפוך חתך עור קו אמצע שלושה עד ארבעה סנטימטרים בצוואר, ולהשתמש מספריים מעוגלים קצה קהה כדי לנתח קהה את הרקמה התת עורית, כדי לחשוף את שריר sternohyoid הימני. באמצעות ממטרים לא טראומטיים, להזיז את השריר באופן כללי עד העורק הראשי הנכון, וריד הצוואר, ועצב vagus מזוהים.
השתמש במספריים כדי להפריד בזהירות את עצב הוואגוס מהערק הראשי. להזריק 2, 000 יחידות בינלאומיות לכל קילוגרם של הפרין לתוך וריד הצוואר הימני, הפעלת לחץ על אתר ההזרקה לאחר נסיגת מחט כדי למנוע דליפת דם. השתמש מלקעות מעוגל לעבור שני תפרים משי 5-0 סביב העורק הראשי.
חבר בחוזקה את התפר הדיסטלי כדי לבודד את העורק הראשי בהיבט המעולה של העורק החשוף, לשמור על התפר הפרוקסימלי לא קשור, ולמקום את החולדה תחת מיקרוסקופ סטריאו. לאחר מכן השתמש במספריים מיקרו-כירורגיים כדי לבצע בזהירות חתך של מילימטר אחד מעל הקיר האחורי של העורק הראשי, והכנס קטטר תוך ורידי סגור בגודל 22 אינץ' לכיוון קשת העורק העורק. השימוש בכלי הגדלה ומיקרו-דיסקציה מומלץ מאוד עבור שלבים אלה.
שדה נקי יכול להיות מושגת על ידי מתח התפר הפרוקסימלי כדי למנוע דימום. תרומת לב יש צורך להרכיב את המנגנון לשעבר vivo cardioplegia. כדי ליזום את פרוטוקול DCD, תחילה לה extubate החיה, ולאחר מכן להשתמש מלקחיים יתושים כדי להדק את קנה הנשימה, החל השלב הגיחוני.
התחל לספור את WIT תפקודי כאשר לחץ הדם סיסטולי שיא יורד מתחת 30 מילימטרים של כספית או פרפור אסטולה או חדרית מופיע, מה שבא קודם. בסוף WIT, לבצע sternotomy המדיאל, שמירה על בית החזה פתוח עם מפשק אלם במידת הצורך. הפרד את הלב מורידי הריאה ומבני בית החזה האחרים כדי להשלים את כריתת הלב.
מיד להטביע את הלב בתסכול קרבס קר כקרח להובלה מהירה למערכת vivo לשעבר. השתמש בתפר משי 2-0 כדי לתקן היטב את בית המשפט למנגנוני Langendorff, ולאחר מכן לפתוח את stopcock. עכשיו לפתוח באופן מלא את הזרימה אל cannula, ולהתחיל את ההשלכות הראשוניות ואת זמן הייצוב.
סובב את הלב כך האטריה פונה חיישן הלחץ, ול לנתח את ורידים ריאתי כדי להרחיב את פתח פרוזדורה חדרית השמאלית במידת הצורך. לאחר מכן, הכנס בלון לטקס המחובר לחיישן לחץ, וודא שהבלון ממוקם במלואו בתוך החדר. ממלאים לאט את הבלון במלח עד שהלחץ הדיאסטאלי מגיע ל-15 מילימטרים של כספית.
הכנס את האלקטרודה הפומפה לפנים הפנימיות של הלב מבלי לנקב את כלי הדם הכליליים. לאחר פעימות ספונטניות הוא ציין, להגדיר את ההליכה ל 300 פעימות לדקה. לאחר 10 דקות של ייצוב, ליזום את הקלטת מדידת לחץ תוך חדרי מתמשך כדי להתחיל את שלב ההתמזגות וההערכה.
לאחר שעה, להסיר את הלב מן המנגנון Langendorff ולהשתמש להב פלדה גבוהה פחמן ישר כדי להסיר את האטריה. כשהמשדר הימני פונה כלפי מטה, חותכים פרוסות חדר רוחביות בעובי 1-2 מ"מ. הוצא את החדר הימני מהפרוסה השלישית של הרקמה, והצמד להקפיא את החדר השמאלי לניתוחים ביוכימיים במורד הזרם.
הטביעו את החלקים הנותרים בתסרון 5%TTC שהוכן טרי ב-PBS למשך 10 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, לשטוף את הדגימות פעמיים PBS טרי להטביע את הדגימות PBS טרי להדמיה. רקמות קיימא יופיע לבנים אדום בצבע.
לאחר ההתרגשות, לחץ הדם יורד במהירות בדפוס צפוי והזמן הצפוי למוות הוא פחות מחמש דקות. כאן, לחץ ממוצע לעומת עקומות זמן בתחילת ההתמזגות לאחר אפס, 10 ו - 15 דקות של WIT מוצגים. פונקציית ההתכווצות תשתפר עם הזמן, השימוש בתקופות קצרות של WIT יאפשר להתכווצות לחזור לשגרה, ונזק מורפולוגי לא יהיה ניתן לגילוי.
השימוש בסוכן מיזוג הוסיף עם cardioplegia בשלב הייצוב הראה כי הנזק שנוצר על ידי 15 דקות של WIT במודל זה הם נוחים אפנון על ידי סוכנים cardioprotective. טכניקה זו מאפשרת שליטה מלאה על כל המשתנים הרלוונטיים ובדיקות התערבות תרופתית ולא פרמקולוגית ו ניתן לשכפל אותה במודלים גדולים יותר, ומאפשרת תרגום קליני.
