טומוגרפיה טורית של שני פוטונים של כל המוח המרמוסטי לניתוחים נוירואנטומיים

המחקר שלנו בוחן את הבסיס המבני של תפקודי המוח, כולל אלה של בני אדם. באמצעות שימוש במרמוסט משותף כמודל, אנו שואפים להבין טוב יותר את מוח הפרימטים על-ידי זיהוי קשרים עצביים המשותפים למינים שונים ולאלה שהם ייחודיים מחוץ לסוג הפרימטים. ביצענו מיפוי מקיף של ההקרנות הקדם-מצחיות של מוח המרמוסט.

באמצעות שימוש בטכניקת טומוגרפיה טורית של שני פוטונים, הצלחנו לשחזר תלת-ממד מדויק ביותר של המוח כולו, שחשף הקרנות עמודות חזקות בין אזורי האסוציאציה. טומוגרפיה טורית של שני פוטונים מספקת מערך נתונים להבנת קישוריות עצבית בכל קנה מידה מוחי. הפרוטוקול שלנו לא רק עוזר לשפר את העיבוד של מוחות מרמוסט, אלא גם מציע תובנות לגבי טיפול בדגימות אחרות.

כדי להתחיל, לקחת את המוח מבודד קבוע marmoset ולדגור אותו עם collagenase ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת. בעזרת צמר גפן, שפשפו בזהירות את משטח המוח כדי לקלף את הפייה מאטר ושאר קרומי המוח. השתמש במלקחיים עדינים כדי להסיר את כל קרומי המוח המנותקים שנותרו.

כדי להכין את מאגר הנתרן בורוהידריד, ממיסים 0.2 גרם של נתרן בורוהידריד ב -100 מיליליטר של 50 מילימולים בוראטים חוצץ, שחומם מראש ל -40 מעלות צלזיוס. הכינו אגרוז מחומצן על ידי ערבוב של 2.25 גרם אגרוז ו-0.21 גרם נתרן פריודט ב-100 מיליליטר של חיץ פוספט למשך שעתיים-שלוש. סנן את התמיסה באמצעות שאיבת ואקום ושטוף אותה עם שלושה שינויים של חיץ פוספט.

לאחר מכן, להשעות מחדש את agarose ב 50 מיליליטר של חיץ פוספט. לאחר מכן, לחלוטין להמיס את agarose בתנור מיקרוגל ולאפשר לו להתקרר ל 60 עד 65 מעלות צלזיוס. הכניסו את המוח לחדר מותאם אישית והטמיעו את המוח באגרוז, כדי להבטיח שהאגרוז ימלא את החלל שמתחת לכפיס המוח.

לאחר התמצקות ג'ל האגרוז, יש לפרק את התא ולטבול את גוש האגרוז במאגר הנתרן בורוהידריד למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. כעת, באמצעות תערובת מיידית של אפוקסי, בנו שלב זכוכית שקופיות על ידי חיבור ארבעה מגנטים ניאודימיום. הרכיבו את בלוק האגרוז על הבמה באמצעות דבק חזק.

הפעל את כל מערכת הדמיית הרקמה בהתאם להוראות היצרן. לעבד את כל המוח המרמוסטי באופן קורונלי מהקצה הקדמי לקצה האחורי. לאחר מכן, כוונן את זוויות הלהב כדי להבטיח שעומק פני השטח בשני הקצוות יהיה בטווח של 10 מיקרומטר.

לשם כך, חפש את המשטח העליון על ידי שינוי מיקום המטרה, באמצעות בקר piezo. הגדר את מישור ההדמיה למרחק של כ- 25 עד 35 מיקרומטר מפני השטח כדי לפצות על מיאלינציה צפופה ולהבטיח חדירת לייזר אחידה. בעזרת להב קרמי חותכים את המוח כולו למרווחים של 50 מיקרומטר, ומניבים כ-650 פרוסות.