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Questo articolo presenta un protocollo passo-passo per l'impianto diretto della cannula nella cisterna magna dei maiali.
Il sistema glinfatico è un sistema di rimozione dei rifiuti nel cervello che si basa sul flusso di liquido cerebrospinale (CSF) negli spazi perivascolari legati agli astrociti ed è stato implicato nella clearance di peptidi neurotossici come l'amiloide-beta. La compromissione della funzione glinfatica aggrava la patologia della malattia in modelli animali di malattie neurodegenerative, come l'Alzheimer, il che evidenzia l'importanza di comprendere questo sistema di clearance. Il sistema glinfatico è spesso studiato da cisterna magna cannulations (CMc), dove i traccianti vengono consegnati direttamente nel liquido cerebrospinale (CSF). La maggior parte degli studi, tuttavia, sono stati condotti su roditori. Qui, dimostriamo un adattamento della tecnica CMc nei suini. Utilizzando CMc nei suini, il sistema glinfatico può essere studiato ad alta risoluzione ottica nel cervello vorencefalico e così facendo colma il divario di conoscenza tra roditori e glinfatici umani.
Il liquido cerebrospinale (CSF) è un ultrafiltrato di sangue che si trova all'interno e intorno al sistema nervoso centrale (SNC)1,2. Oltre a dare galleggiabilità al cervello o assorbire forze meccaniche dannose, il liquido cerebrospinale svolge anche un ruolo fondamentale nella rimozione dei rifiuti metabolici dal SNC3. La rimozione dei rifiuti è facilitata dal sistema glinfatico recentemente caratterizzato che consente il flusso convettivo del liquido cerebrospinale attraverso il parenchima cerebrale attraverso gli spazi perivascolari (PVS), che circondano le arterie penetranti3,4,5.<....
Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con la direttiva europea 2010/63/UE e sono state approvate dal comitato etico per la ricerca animale di Malmö-Lund (Dnr 5.8.18-05527/2019) e condotte secondo le linee guida CODEX del Consiglio svedese della ricerca.
1. Preparazione
Una volta che il maiale è incosciente, viene palpato e la sua anatomia superficiale è segnata, a partire dalla cresta occipitale (OC) e lavorando verso le vertebre toraciche (TV) e ogni base auricolare (EB). È lungo queste linee che vengono fatte le incisioni dermiche (Figura 1A). I tre strati muscolari trapezio, semispinalis capitus biventer e semispinalis capitus complexus sono resecati e tenuti aperti da due serie di riavvolgitori auto-trattenibili per esporre la cisterna magna (CM) (<.......
Qui, è descritto, un protocollo dettagliato per eseguire la cannulazione diretta della cisterna magna nei suini, compresa la preparazione necessaria, la procedura chirurgica, l'infusione del tracciante e l'estrazione del cervello. Ciò richiede qualcuno con esperienza e certificazione per lavorare con animali di grandi dimensioni. Se eseguito correttamente, ciò consente la consegna delle molecole desiderate con certezza direttamente nel liquido cerebrospinale, dopo di che una serie di diverse modalità avanzate di imag.......
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Knut and Alice Wallenberg Foundations, Hjärnfonden, Wenner Gren Foundations e dalla Crafoord Foundations.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.01% azide in PBS | Sigmaaldrich | S2002 | |
18G needle | Mediq | ||
1ml Syringe | FischerSci | 15849152 | |
20G cannula | Mediq | NA | |
22G cannula | Mediq | NA | |
4% paraformaldehyde | Sigmaaldrich | P6148 | |
Anatomical forceps | NA | NA | |
Bovine serum albumin Alexa-Fluor 647 Conjugate | ThermoFischer | A34785 | 2 vials (10mg) |
CaCl2 | Sigmaaldrich | C1016 | |
Chisel | ClasOhlson | 40-8870 | |
Dental cement | Agnthos | 7508 | |
compact saw | ClasOhlson | 40-9517 | |
Glucose | Sigmaaldrich | G8270 | |
Hammer | ClasOhlson | 40-7694 | |
Insta-Set CA Accelerator | BSI-Inc | BSI-151 | |
IV line TAP, 3-WAYS with 10cm extension | Bbraun | NA | |
KCl | Sigmaaldrich | P9333 | |
Marker pen | NA | NA | |
MgCl2 | Sigmaaldrich | M8266 | |
MilliQ water | NA | NA | |
NaCL | Sigmaaldrich | S7653 | |
NaH2PO4 | Sigmaaldrich | S8282 | |
NaHCO3 | Sigmaaldrich | S5761 | |
No. 20 scalpel blade | Agnthos | BB520 | |
No. 21 Scalpel blade | Agnthos | BB521 | |
No. 4 Scalpel handle | Agnthos | 10004-13 | |
Saline | Mediq | NA | |
Salmon knife | Fiskers | NA | |
Self-retaining retractors | NA | NA | |
Superglue | NA | NA | |
Surgical curved scissors | NA | NA | |
Surgical forceps | NA | NA | |
Surgical towel clamps | NA | NA |
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