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In questo articolo

  • Riepilogo
  • Abstract
  • Introduzione
  • Protocollo
  • Risultati
  • Discussione
  • Divulgazioni
  • Riconoscimenti
  • Materiali
  • Riferimenti
  • Ristampe e Autorizzazioni

Riepilogo

Questo studio ha studiato l'attività antivegetativa delle fibre cave del polmone artificiale rivestite dall'adescamento del dispositivo polmonare. Sebbene questo approccio alla modifica della superficie delle fibre sia pratico, l'efficacia del processo di rivestimento dipende dalla copertura dell'innesto attraverso gli strati di tappetino in fibra all'interno del fascio.

Abstract

Sebbene l'elevato rapporto superficie/volume del fascio di fibre polmonari artificiali migliori lo scambio di gas, l'ampia superficie, la disposizione densa e le sostanze chimiche superficiali delle fibre sono i principali fattori che contribuiscono alla trombosi. Per mitigare questo problema, è essenziale modificare uniformemente le sostanze chimiche di superficie per ridurre efficacemente l'incrostazione proteica aspecifica, che può aiutare a limitare la trombosi e ridurre il rischio di tromboembolia o sanguinamento causato dagli anticoagulanti sistemici.

In questo studio, abbiamo esplorato l'applicazione e le proprietà antivegetative degli innesti di polimeri zwitterionici su fasci di fibre di polipropilene. Il processo di innesto ha comportato l'innesco del dispositivo polmonare artificiale con molecole di polisulfobetaina zwitterionica e linker di polidopamina per il rivestimento in situ . Le prestazioni dell'antivegetativa sono state valutate utilizzando il saggio standard di immunoassorbimento enzimatico legato al fibrinogeno (ELISA) e i saggi di incrostazione piastrinica lattato deidrogenasi. La spettroscopia fotoelettronica a raggi X ha confermato il rivestimento superficiale e sono state osservate riduzioni significative delle incrostazioni sulle fibre rivestite rispetto a quelle non rivestite, dimostrando l'utilità del processo di innesto e la promessa dei suoi effetti antivegetativi.

Tuttavia, sono state notate differenze nell'aspetto del rivestimento sulle fibre all'interno del fascio con il processo di rivestimento mediante adescamento, che potrebbero influire sulle prestazioni complessive dell'antivegetativa. Affrontare questo problema potrebbe migliorare ulteriormente l'efficienza antivegetativa dei fasci di fibre polmonari modificati attraverso l'innesto in situ .

Introduzione

Le fibre polmonari artificiali, note anche come membrane a fibra cava, sono materiali essenziali per la fabbricazione di dispositivi di ossigenazione extracorporea a membrana (ECMO) che forniscono supporto respiratorio ai pazienti critici. Più strati di queste fibre costituiscono un fascio denso che funge da unità di scambio gassoso. La superficie della fibra polimerica, tuttavia, attiva la cascata della coagulazione del sangue, portando alla formazione di coaguli (trombosi). La trombosi su superfici artificiali è principalmente guidata dall'attivazione della cascata della coagulazione, una complessa serie di reazioni enzimatiche che portano alla formazione di un coagulo di sangue. Quando il sangue entra in contatto con materiali estranei, come quelli presenti nei dispositivi medici (ad es. polmoni artificiali, stent, cateteri), si innesca la cascata della coagulazione 1,2. Questo processo inizia con l'esposizione del sangue alle superfici del materiale artificiale, che attiva il percorso intrinseco della cascata. Questa attivazione porta alla generazione di trombina, un enzima chiave che converte il fibrinogeno in fibrina, formando la base strutturale di un coagulo. Contemporaneamente, le piastrine vengono attivate e aggregate nel sito, rafforzando ulteriormente il coagulo. Il risultato è la trombosi, che può ostruire il flusso sanguigno e portare a gravi complicazioni come ictus o infarto del miocardio.

Per prevenire la trombosi sulle superfici artificiali, gli anticoagulanti tradizionali, come l'eparina, il warfarin e i più recenti anticoagulanti orali diretti (DOAC), sono comunemente usati 3,4. Questi farmaci agiscono interferendo con varie fasi della cascata della coagulazione. Ad esempio, l'eparina migliora l'attività dell'antitrombina III, un inibitore naturale della trombina, mentre il warfarin inibisce la sintesi dei fattori della coagulazione dipendenti dalla vitamina K. Tuttavia, l'uso di anticoagulanti presenta diverse sfide. In primo luogo, aumentano il rischio di sanguinamento, che può essere pericoloso per la vita in determinate situazioni. In secondo luogo, l'efficacia degli anticoagulanti può essere variabile, richiedendo un monitoraggio regolare e aggiustamenti della dose, in particolare con il warfarin. Inoltre, l'uso a lungo termine di anticoagulanti è associato a effetti avversi come l'osteoporosi e la necrosi cutanea. La necessità di anticoagulanti sistemici limita anche l'uso di dispositivi medici nei pazienti ad alto rischio di sanguinamento.

Poiché la trombosi può impedire lo scambio di gas attraverso la membrana a fibra cava, i rivestimenti antivegetativi sono stati applicati alle fibre polmonari utilizzando vari metodi, come il rivestimento per immersione e l'elettrofilatura, per prevenire la bioincrostazione 5,6. I produttori di polmoni artificiali in genere elaborano fibre cave ottenute commercialmente dai produttori di fibre e le assemblano nei polmoni attraverso passaggi che includono il raggruppamento delle fibre attorno a un nucleo solido, l'incapsulamento (incollaggio) delle estremità dei fasci, l'incorporazione di fasci incapsulati in una capsula di alloggiamento con canali di flusso di gas e sangue e la pulizia post-assemblaggio. Mentre il rivestimento delle fibre che non sono state impiantate nel polmone può essere più flessibile, una modifica della superficie nella fase di pre-raggruppamento sarà soggetta a diverse fasi di produzione che richiedono interazioni meccaniche e chimiche tra il rivestimento superficiale e gli ambienti di processo a valle, che possono portare a fibre denudate in un dispositivo in cui un'elevata copertura del rivestimento è essenziale per limitare la trombosi. In alternativa, il rivestimento può essere applicato al fascio invasato. Un vantaggio della capacità di rivestire i polmoni finiti è che si tratta di un approccio pratico e facile alla modifica dell'ingegneria di superficie, del dispositivo polmonare artificiale e di molti altri dispositivi. Ma in generale, il metodo di applicazione dei rivestimenti, sia a spruzzo che a immersione, è meno critico per la prevenzione della trombosi rispetto all'efficacia del rivestimento stesso. Ad esempio, le fibre cave utilizzate nei dispositivi medici possono essere rivestite per immersione durante l'estrusione, quindi lavorate a maglia in stuoie, avvolte in fasci e incorporate in un dispositivo polmonare artificiale finito. In alternativa, i rivestimenti possono essere applicati dopo che il dispositivo è stato prodotto. I fattori chiave, tuttavia, sono l'applicazione efficace, la durata e l'efficacia del rivestimento antitrombotico5. Questo perché, in assenza di anticoagulazione sistemica, la funzione di questi rivestimenti è un tassello essenziale per prevenire la formazione di coaguli, rendendo necessaria la necessità di un'antivegetativa altamente efficiente e duratura per garantire un'efficace prevenzione della trombosi.

Nonostante l'applicazione di rivestimenti antitrombogenici e la contemporanea somministrazione di basse dosi di anticoagulanti fino ad oggi, il modulo polmonare artificiale deve essere sostituito solo dopo un periodo di utilizzo relativamente breve, che va da giorni a 3 settimane 7,8, a causa della trombosi. L'efficienza di scambio gassoso delle loro membrane di fibre si deteriora dopo un tempo relativamente breve a causa dell'incrostazione da parte di una struttura di coaguli di sangue membranosi (composta da fibrina, singole cellule e gruppi di cellule) che copre ampie aree delle fibre, aumentando la loro barriera di diffusione del gas9. In generale, il tipo di rivestimento e il metodo di applicazione 10,11,12,13,14,15,16,17,18 utilizzati dipendono dalle proprietà desiderate, come la biocompatibilità e la durata. Diversi esempi di rivestimenti antivegetativi sono stati utilizzati su fibre polmonari artificiali. Includono il silicone che è ampiamente utilizzato per la sua biocompatibilità19, durata e resistenza alla bioincrostazione; poliuretano (PU) per la sua biocompatibilità e resistenza alla bioincrostazione20; chitosano grazie alle sue proprietà biocompatibili e antimicrobiche21,22, eparina che inattiva la trombina 23,8 e rivestimenti idrofili a base di polimeri24 tra cui poli(glicole etilenico)25,26, poli (2-metossietilacrilato)27 e fosforilcolina28,29.

I rivestimenti zwitterionici rappresentano una strategia promettente per ridurre la trombosi su superfici artificiali senza la necessità di anticoagulanti sistemici 5,6. Questi rivestimenti sono composti da molecole con cariche sia positive che negative, che si bilanciano a vicenda e danno luogo a una superficie altamente idrofila e non sporca. La natura zwitterionica di questi rivestimenti riduce l'adsorbimento delle proteine e l'adesione piastrinica, entrambi passaggi critici nell'inizio della cascata della coagulazione. Prevenendo l'interazione iniziale tra le proteine del sangue e la superficie artificiale, i rivestimenti zwitterionici inibiscono efficacemente l'attivazione della cascata della coagulazione e riducono il rischio di trombosi. Questo approccio non solo riduce al minimo la necessità di anticoagulanti sistemici, ma offre anche una soluzione più biocompatibile per l'uso a lungo termine dei dispositivi medici.

In questo studio, abbiamo valutato l'efficacia dell'adescamento del polmone artificiale con un rivestimento zwitterionico zwitterionico a bassissimo fouling (pSBMA) combinato con uno strato di polidopamina adesiva superficiale (pDOPA). Dopo l'adescamento del dispositivo, è stato posizionato da un lato all'altro ogni 10 minuti per 2 ore durante il processo di rivestimento. Per valutare le potenziali variazioni nel rivestimento attraverso il fascio di fibre, abbiamo misurato il fibrinogeno e l'incrostazione piastrinica sulle fibre situate sulla superficie e all'interno del fascio. Inoltre, abbiamo analizzato l'impatto del flusso sulle prestazioni dell'antivegetativa confrontando i dati sulle incrostazioni dei polmoni prima e dopo l'esposizione al flusso. Per le applicazioni antibiofouling a lungo termine che coinvolgono un flusso di fluidi complesso, i rivestimenti zwitterionici non solo devono inibire le incrostazioni dal sangue intero, un compito impegnativo, ma anche mantenere la loro efficacia sotto stress emodinamico per tutto il periodo di applicazione. Questi rivestimenti devono fornire una forte repulsione sterica contro l'adsorbimento proteico non specifico e raggiungere una densità di impacchettamento superficiale adeguata per formare una barriera del film di idratazione tra il substrato e il mezzo complesso. Inoltre, devono rimanere saldamente attaccati alla superficie senza il distacco dei linker che ancorano il rivestimento al substrato30. Il protocollo qui descritto è progettato per garantire l'applicazione di rivestimenti che soddisfano questi requisiti critici per una protezione efficace e duratura delle superfici.

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Protocollo

Il protocollo segue le linee guida del comitato etico per la ricerca umana dell'Università di New Haven.

1. Rivestimento del circuito polmonare artificiale

NOTA: Il circuito polmonare artificiale è stato rivestito seguendo un approccio di innesto ZWITTERIONICO DOPA-SBMA in due fasi. I dettagli del fascio di fibre/ossigenatore sono informazioni proprietarie. Negli esperimenti in cui gli effetti del flusso sull'attività antivegetativa del polmone rivestito erano al centro dell'attenzione, l'ossigenatore e il circuito dei tubi (tubi Tygon da 5/16" con connettori in policarbonato coniugabile) sono stati sottoposti a un flusso salino tamponato con fosfato (PBS; pH 7,34, temp. ~37 °C) di 24 ore limitato dalla portata massima della nostra pompa di 1,22 L/min. Per contestualizzare, le portate esatte negli ossigenatori dipendono dalle esigenze del paziente e dalla situazione clinica specifica, ma generalmente variano da 2 a 7 L/min nei pazienti adulti. In questo caso è stato utilizzato il PBS per consentire una facile quantificazione delle incrostazioni dei marcatori chiave della coagulazione del sangue sulle fibre rivestite dopo il flusso. Qualsiasi effetto confondente dell'incrostazione del sangue intero, se il flusso sanguigno intero fosse utilizzato per valutare gli effetti della velocità di taglio sull'attività antivegetativa delle fibre rivestite, verrebbe eliminato utilizzando il PBS. Per rivestire il polmone artificiale sono stati utilizzati i seguenti passaggi:

  1. Pulire il circuito polmonare facendo ricircolare il 30% di metanolo in acqua deionizzata (DI) per 20 minuti, seguito dal ricircolo del metanolo al 10% in acqua deionizzata e acqua deionizzata per 20 minuti.
  2. Asciugare il circuito con aria filtrata a bassa portata per 2 ore prima dell'esposizione al plasma con ozonolisi ultravioletta (UVO).
  3. Posizionare il circuito polmonare pulito in un generatore di plasma UVO (UVO-Cleaner), chiuderlo e accendere lo strumento generatore di plasma UVO per l'interazione del plasma con il dispositivo per 20 minuti.
  4. Dopo l'esposizione al plasma, il dispositivo deve procedere senza indugio alla fase di rivestimento per limitare il riarrangiamento della catena superficiale e l'occultamento dei siti reattivi generati dall'interazione con il plasma.
  5. Durante la modifica delle superfici del dispositivo, preparare una nuova soluzione di rivestimento. In 600 mL di tampone TRIS (pH 8,5), sciogliere 1,2 g di dopamina-HCl seguita dalla dissoluzione del monomero di solfobetaina metacrilato (SBMA) in rapporto DOPA:SMBA di 1:15.
  6. Aggiungere 5 mM di goccioline di periodato di sodio (20 μL) alla soluzione di rivestimento e mescolare. Utilizzare un bicchiere di vetro, un'ancoretta magnetica e una piastra di agitazione a 150 giri/min per facilitare la miscelazione.
    NOTA: Aggiungere la soluzione di rivestimento al dispositivo non più di 20 minuti dopo la preparazione. Pertanto, se più polmoni sono rivestiti, può essere utile un modo semplice per adescare i dispositivi, ad esempio l'uso di pompe per l'adescamento.
  7. Adescare il dispositivo polmonare con la soluzione di rivestimento utilizzando una siringa di grande volume (60 cc) per aspirare e riempire il circuito. Con un'estremità del circuito bloccata, adescarlo dall'altra, assicurandosi che le bolle d'aria possano essere guidate fuori dal circuito attraverso un connettore di accesso al circuito.
  8. Quando è completamente adescato, posizionare il dispositivo sotto una fonte di luce UV per 2 ore e agitare la soluzione riorientando le estremità del dispositivo innescato su e giù ogni 10 minuti.
  9. Dopo il trattamento con luce UV, svuotare il circuito e sciacquare delicatamente tutti i campioni con acqua deionizzata (DI) adescando con una siringa da 60 cc e drenando ripetutamente. Quando l'effluente del risciacquo DI è limpido, conservare il dispositivo innescato con acqua deionizzata in un frigorifero a 4 °C per l'autopsia e le analisi delle superfici.

2. Autopsia polmonare

  1. Circuito polmonare di scarico e asciugatura con flusso d'aria filtrato e delicato in una cappa chimica.
  2. Eseguire l'autopsia del dispositivo fissandolo in una morsa da banco con base girevole. Utilizzare una sega a nastro per sezionare i collegamenti di ingresso/uscita all'alloggiamento del dispositivo e alle piastre frontali anteriore e posteriore dell'alloggiamento, tagliando con cura lungo le loro periferie utilizzando un coltello X-acto di livello industriale e un martello.
  3. Dopo aver rimosso le piastre frontali, gli strati di tappetino in fibra sono accessibili. Sezionare con cura le fibre per accedere ai campioni di opaco in fibra in qualsiasi punto all'interno del fascio (ad esempio, la superficie e all'interno). Maneggiare i campioni con una pinzetta ai bordi e trasferirli in provette da 60 ml riempite con acqua deionizzata per limitare la contaminazione del campione.

3. Valutazione dell'incrostazione proteica su materiali rivestiti per circuiti polmonari

  1. Test di adsorbimento del fibrinogeno.
    1. Incubare campioni standardizzati di fibre opache di dimensioni (~1 cm x 1 cm) in 1 mL di fibrinogeno da 3 mg/mL in piastre a pozzetti per oltre 90 minuti a 37 °C con agitazione a 60 giri/min.
    2. Lavare (3 volte) i campioni con tampone PBS, trasferirli in nuovi pozzetti e aggiungere 1 mL di 1 mg/mL di albumina sierica bovina (BSA) a ciascun pozzetto. Incubare per altri 90 minuti, quindi lavare nuovamente con tampone PBS (3x) e trasferire i campioni in nuovi pozzetti.
    3. Nei nuovi pozzetti, aggiungere 1 mL di diluizione 1:1000 di anticorpo fibrinogeno coniugato perossidasi di rafano (HRP) in PBS a ciascun pozzetto e incubare per 30 minuti. Quindi, lavare (3 volte) i campioni con tampone PBS e trasferirli in nuovi pozzetti.
    4. Nei nuovi pozzetti, aggiungere 500 μL di 1 mg/mL di o-fenilendiammina (OPD) in tampone citrato-fosfato 0,1 M con perossido di idrogeno allo 0,03%, pH di 5,0 a intervalli di 30 s e incubare al riparo dalla luce per 30 minuti.
    5. Arrestare la reazione della perossidasi e dell'OPD aggiungendo 500 μL di HCL 1 N a ciascun pozzetto.
    6. Rimuovere e trasferire il surnatante da ogni pozzetto in una cuvetta. Misurare l'assorbanza del surnatante utilizzando uno spettrofotometro UV-visibile a 492 nm.
  2. Test di adesione piastrinica.
    1. Scongelare il kit del dosaggio della lattato deidrogenasi (LDH) per 20 minuti.
    2. Mentre lo scongelamento è in corso, preparare il plasma umano adulto aggregato per ottenere il plasma ricco di platlete (PRP).
    3. Per preparare il PRP, la centrifuga ha scongelato le provette del campione di plasma umano a una rotazione dura a 483 x g per separare il plasma in due regioni, in cui il terzo inferiore è PRP e i due terzi superiori della provetta conterranno il plasma povero di piastrine (PPP).
    4. Rimuovere i pellet di piastrine formati sul fondo della provetta e i due terzi superiori del plasma sanguigno centrifugato e disperdere il pellet nei due terzi superiori del plasma agitando delicatamente le provette.
    5. Aggiungere cloruro di calcio (0,2 M) al PRP (1:1 v/v) per invertire gli effetti dei citrati prima del test.
    6. Incubare i campioni (~1 cm x 1 cm) in 500 μL di PRP per 90 minuti a 37 °C, quindi risciacquare tre volte con tampone PBS e trasferirli in nuovi pozzetti.
    7. Aggiungere 300 μL di PBS e 10 μL di tampone di lisi 10x e incubare per 45 minuti.
    8. Aggiungere 50 μl della miscela di reazione e incubare per 30 minuti al riparo dalla luce.
    9. Aggiungere 50 μl di HCL per arrestare le reazioni del pozzo.
    10. Per rilevare l'attività LDH dei lisati dalle piastrine adsorbite, misurare l'assorbanza della luce con le soluzioni a pozzetto sviluppate a lunghezze d'onda di 490 nm e 680 nm e sottrarre la lettura di 680 nm da quella di 490 nm per analizzare l'adesione piastrinica.

4. Effetti del flusso sull'attività antivegetativa

  1. Adescare il circuito polmonare artificiale con PBS e garantire l'assenza di perdite. Quindi, fissare il circuito alla pompa a rulli e rimettere in circolo il PBS per 24 ore.
    NOTA: Una portata di 1,22 L/min era la massima raggiungibile.
  2. Per simulare la temperatura normotermica del sangue che fluirebbe attraverso il dispositivo polmonare, incubare il polmone artificiale in un bagno d'acqua a 37 °C durante il ricircolo.
  3. Quindi, eseguire l'autopsia polmonare e gli studi di provocazione con incrostazioni proteiche come descritto sopra.
    NOTA: L'analisi unidirezionale della varianza è stata utilizzata per determinare se c'erano differenze statisticamente significative tra le medie dei gruppi indipendenti e l'HSD di Tukey è stata utilizzata per determinare quali gruppi specifici differivano.

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Risultati

Viene presentato un protocollo per l'innesto di polimeri zwitterionici del circuito polmonare artificiale mediante adescamento, smontaggio del dispositivo per la raccolta del campione di fibre rivestite e valutazione dell'antivegetativa delle fibre sezionate. Nella Figura 1 è illustrata la modifica della superficie dell'approccio del circuito polmonare artificiale. I polmoni sono stati esposti al plasma UVO per l'interazione del singoletto radicale di ossig...

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Discussione

Le fibre di polipropilene (PP) rivestite di PDMS nel polmone artificiale hanno dimostrato una relazione tra l'esposizione all'ozono e la struttura delle fibre, stabilendo un limite di sensibilizzazione per il plasma di ozono ultravioletto. Questo limite guida i tempi di esposizione necessari per generare radicali superficiali per l'innesto di materiali di rivestimento, in particolare polidopamina e polisulfobetaina metacrilato. Quando le fibre sono state esposte al plasma di ozono ultrav...

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Divulgazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti. Il Dr. Keith Cook e il Dr. David Skoog detengono la partecipazione azionaria di ART LLC.

Riconoscimenti

Questo lavoro è stato finanziato in parte attraverso un accordo di servizi nell'ambito di NIH 1R01HL140231-01A1.

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Materiali

NameCompanyCatalog NumberComments
BeakersThermo Fisher Scientifichttps://www.thermofisher.com/search/browse/category/us/en/90094065Used in experiments
Beckman Coulter Allegra X-30R centrifugeBeckman Coulterhttps://www.mybeckman.in/centrifuges/general-purpose/allegra-x-30For centrifugations
Biochemguard BSL2 safety hoodBiochemguardhttps://bakerco.com/images/uploads/assets/BiochemGARD_220v_Web_0.pdfUsed for UV light source in graft coating
Bovine albumin serum (BSA)Sigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/substance/bovineserumalbumin123459048468Fibrinogen assay materials
Citrated pooled male blood plasmaZenBiohttps://www.zen-bio.com/products/serum/human-blood-products.phpUsed for experiments
Citrate-phosphate bufferSigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/search/citrate-phosphate-buffer?focus=products&page=1&perpage=30&sort=relevance&term=citrate-phosphate%20buffer&type=productFibrinogen assay materials
Dopamine-hydrochlorideSigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/h60255For coating
Dopamine-hydrochlorideSigma-AldrichN/AFibrinogen assay materials
Fluorescein conjugated Goat Immunoglobulin G (IGG)Sigma Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/mm/aq303fFor Fluorescence Light Intensity measurements
Horseradish peroxidase-conjugated anti-fibrinogen antibodySigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/search/horseradish-peroxidase-conjugated-anti-fibrinogen?focus=products&page=1&perpage=30&sort=relevance&term=horseradish%20peroxidase%20conjugated%20anti-fibrinogen&type=productFibrinogen assay materials
Hot PlateThermo Fisher Scientifichttps://www.thermofisher.com/in/en/home/life-science/lab-equipment/hot-plates-stirrers/lab-hot-plates.htmlUsed in experiments
Human fibrinogen powderSigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/search/human-fibrinogen?focus=products&page=1&perpage=30&sort=relevance&term=human%20fibrinogen&type=productFibrinogen assay materials
Jelight UVO-Cleaner model 144AXJelighthttps://www.jelight.com/uvo-cleaner/Used for plasma treatment of medical device materials
LDH assay kitABCAMhttps://www.abcam.com/en-us/products/assay-kits/ldh-assay-kit-lactate-dehydrogenase-assay-kit-colorimetric-ab102526For LDH assay
O-phenylenediamine (OPD)Sigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/p9029Fibrinogen assay materials
PDMS coated polypropylene fibersART LLCN/APart of artificial lung materials
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/p4417Fibrinogen assay materials
Plate Reader (BioTek)BioTekhttps://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/plate-reader-metabolic-assaysFor reading Fluorescence Light Intensity
Polydimethylsiloxane (PDMS)ART LLCN/APart of artificial lung materials
Sodium periodate (NaIO4)Sigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/substance/sodiummetaperiodate213897790285For coating
Stockert Shiley multiflow roller pumpSorin BiomedicalN/AFor flow experiments
Sulfobetaine methacrylate (SBMA)Sigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/search/sulfobetaine-methacrylate-(sbma)For coating
TRIS-buffered saline (pH 8.5)Sigma-Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/t8793Prepared in the lab from TRIS sachets
Tygon tubingART LLCN/APart of artificial lung materials

Riferimenti

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