Assemblaggio e funzionamento di uno stadio di raffreddamento per immobilizzare C. elegans sulle loro piastre di coltura

Stiamo sviluppando un approccio semplice che può immobilizzare l'intera popolazione di Caenorhabditis elegans direttamente sui piatti di coltivazione. Questa strategia accelera significativamente gli esperimenti relativi all'imaging. L'immobilizzazione dell'azoturo di sodio tipicamente utilizzata per l'imaging ad alta risoluzione della popolazione di C.elegans è estremamente laboriosa e richiede il montaggio e la manipolazione dei singoli animali.

Questo metodo può anche ridurre la durata della vita e la vitalità degli animali, che possono confondere i dati. Il metodo di raffreddamento tradizionale utilizzava temperature relativamente basse da due a quattro gradi Celsius del microfluido impiegato, che richiede un'ampia formazione dell'utente. Abbiamo scoperto che con la fase di raffreddamento, le temperature calde come sei gradi Celsius, immobilizzano più fortemente gli animali per l'imaging ad alta rivoluzione.

L'immobilizzazione di raffreddamento di C.elegans non è ampiamente utilizzata, ma quando viene utilizzata, di solito è combinata con microfluidica complessa che richiede una formazione significativa dell'utente. A causa della carenza della tipica metodologia di immobilizzazione, il nostro miglioramento della mobilizzazione e dell'accessibilità del raffreddamento consente ai ricercatori un throughput elevato e immagini ad alta risoluzione. Rispetto al montaggio e all'anestesia laboriosi dei singoli animali, il nostro approccio di raffreddamento può immobilizzare in modo reversibile grandi popolazioni di C.elegans, eliminando il 98% del tempo di elaborazione.

La mancanza di anestetici chimici riduce inoltre al minimo l'esposizione dannosa agli animali e ai ricercatori. Uno stadio di raffreddamento consente un'elevata produttività e immagini ad alta risoluzione direttamente sulle piastre di coltivazione. La semplicità di questo design consente ad altri ricercatori di costruire facilmente i propri dispositivi e integrarli nelle loro configurazioni esistenti, per rivoluzionare la portata e il ritmo dei loro studi biologici.

Il nostro laboratorio adatterà la fase di raffreddamento per varie configurazioni di microscopi. Diversi design funzioneranno con microscopi invertiti, microscopi verticali composti e diverse piattaforme di imaging.