Per iniziare, incubare le uova di gallina fecondate in un'incubatrice umidificata con l'estremità appuntita rivolta verso il basso a 37,5 gradi Celsius. Il sesto giorno di incubazione, o E5, sterilizzare il guscio d'uovo spruzzandolo con etanolo al 70%. Usando un candelabro per uova, traccia lungo il perimetro dello spazio aereo sopra l'embrione con una matita e copri l'area delineata con nastro trasparente.
Tagliare delicatamente intorno all'area tracciata con forbici curve senza tagliare le membrane embrionali o i vasi sanguigni. Scartare la parte superiore del guscio d'uovo. Aggiungere alcune gocce di terreno salino o di coltura cellulare sulla membrana dello spazio aereo per bagnarla in modo che si stacchi facilmente.
Usando una pinza sottile, perforare con cura la membrana dello spazio aereo sopra la parte superiore dell'embrione. Rimuoverlo. Afferrare la membrana amnionica trasparente che circonda immediatamente l'embrione per posizionare la testa e iniettare circa 50.000 cellule in cinque microlitri di terreno di coltura cellulare adatto nel tectum ottico con una micropipetta di vetro e una PicoPump pneumatica.
Aggiungere alcune gocce di 50 milligrammi per millilitro di ampicillina sopra l'embrione e coprire il foro nella parte superiore delle uova con nastro trasparente. Metterli in un'incubatrice umidificata fino a E15 per la dissezione. I tumori che si sono formati nel tectum ottico E5 in vivo dopo l'iniezione di glioblastoma, o cellule staminali GBM, o GSC che esprimono la proteina fluorescente verde a E15 sono mostrati in questa figura.
Le GSC si attaccano alla superficie ventricolare e formano tumori invasivi nella parete cerebrale. Quattro colori sono stati utilizzati per identificare cinque caratteristiche in questo esperimento, GSC verdi, nuclei bianchi, vasi sanguigni bianchi, integrina alfa-6 blu e SOX2 rosso o Nestin rosso. Queste cifre mostrano che le GSC risiedono nei vasi sanguigni e sembrano migrare lungo di esse.
Qui vengono mostrati filmati di rendering di volume 3D rotanti su fette fisse e immunocolorate di tumori GSC in vivo.
