Il carcinoma a cellule renali a cellule chiare o CCRCC è il sottotipo più comune di cancro ai reni. Localizzare CCRCC ha un esito favorevole con l'intervento chirurgico. Tuttavia, un terzo dei pazienti con CCRCC svilupperà metastasi distante al polmone.
Il che porta a un risultato molto scarso per i pazienti. Sfortunatamente, non è disponibile alcuna terapia per questa fase mortale. Poiché il meccanismo molecolare della metastasi rimane allusivo.
Lo scopo di questo protocollo è quello di introdurre e confrontare i due modelli animali recentemente stabiliti per il CCRCC metastatico. Il primo modello è il topo dell'impianto argomento. In questo modello di topo, CCRCC eterogeneo viene impiantato alla capsula renale del topo.
La crescita del tumore e la metastasi sono asset dopo 10 settimane. Il secondo modello è il modello a membrana corioallantoica del pollo o il modello CAM. In questo modello di pollo il CCRCC eterogeneo viene impiantato nell'uovo.
La crescita tumorale e le cellule tumorali circolanti sono asset dopo 10 giorni di impianto prima che l'embrione si schiuda. La metastasi polmonare è una risorsa dopo 24 giorni dall'impianto. Che è due settimane dopo la schiusa.
Questi due nuovi modelli saranno utili per studiare ulteriormente il meccanismo molecolare alla base della metastasi nel CCRCC. Si prega di notare che la procedura CAM non è presente in questo video. Il protocollo dettagliato per il modello CAM è descritto e girato in un altro articolo di Trove di Sharrow et al.
Dopo aver anestetizzato un topo, disinfettare la parte posteriore del mouse interamente con povidone-iodio per tre volte. Seguire con il 70% di etnolo una volta e asciugarlo con tamponi di cotone sterili. Quindi applicare tre medicazioni mediche sterili che coprano in sequenza l'intera schiena al fine di creare un campo chirurgico e immobilizzare il mouse.
Prima dell'operazione, gli operatori devono disinfettare le dita con povidone-iodio. Posizionare il mouse nella posizione prona. E, usa le dita per localizzare il rene sinistro appena sotto il fianco sinistro.
Utilizzare un paio di forcep smussate e forbici per aprire la pelle e lo strato muscolare nella posizione specificata. Utilizzare tamponi di cotone sterili e forcep per esternalizzare parzialmente il rene sinistro dall'addome. Caricare una siringa per insulina o una siringa Hamilton personalizzata con la sospensione della cellula tumorale preparata separatamente.
Iniettare 20 microlitri di sospensione cellulare sotto la capsula renale. Estrarre lentamente l'ago per solidificare la soluzione di matrice cellulare extra. Oltre a prevenire emorragie o perdite di cellule tumorali.
E poi, usa un batuffolo di cotone sterile per spingere di nuovo il rene nell'addome. Usa la sutura per cucire lo strato muscolare. Disinfettare la pelle con povidone-iodio.
E chiudi la pelle con le clip automatiche della ferita. La deposizione ortotopica ha piantato cellule tumorali cresciute con successo sui reni dei topi come confermato dalla BLI. Sebbene non ci fosse alcuna differenza nella crescita primaria, solo il tumore metastatico eterogeneo aveva una robusta metastasi al polmone.
La metastasi è stata confermata anche dall'immunoistochimica. Allo stesso modo, il numero di cellule tumorali circolanti era più elevato nei topi che portavano un tumore metastatico rispetto a quelli che portavano un tumore non metastatico. In concordanza con il modello del topo, il modello CAM non ha mostrato alcuna differenza di crescita tra tumori metastatici e non metastatici.
D'altra parte, il numero di cellule tumorali circolanti era significativamente più alto nelle uova con tumori metastatici. La metastasi istologicamente rilevabile è stata osservata nei polmoni del pollo tratteggiato. In conclusione, questo protocollo ha illustrato due nuovi modelli animali per CCRCC metastatico.
Sia il topo che i modelli di pollo hanno riassunto fedelmente la metastasi polmonare osservata in clinica. Questi due modelli preclinali saranno utili per espandere la comprensione del meccanismo molecolare alla base della metastasi. Oltre a scoprire nuovi trattamenti per CCRCC metastatico.
