PAL è stato finanziato da un Parkinson UK Research Fellowship (grant F1002). Questo lavoro è stato supportato da un MRC nuovo investigatore Research Grant (MR/L010933/1) e dal programma MRC concede MR/N026004/1 a PAL e da studentship BBSRC BB/M017222/1 a JET. Vi ringraziamo della coorte 2014-15 MPharm parte 1 studenti all'Università di Reading per aver preso parte nella prima iterazione di questo pratico e successive coorti per loro feedback e input.

Nota: Il protocollo qui sotto è stato sviluppato per essere tenuto nel corso di due ore (compreso il completamento di fogli di lavoro in classe) in un laboratorio didattico appositamente costruito. La procedura sperimentale sono stati deliberatamente messi insieme per escludere più dettagliata analisi della cinetica enzimatica (effettuato nel contesto di questo corso utilizzando i dati del modello); Tuttavia — come indicato nella discussione — il protocollo prevede un modello di analisi più avanzate, dipendendo dal livello di conseguimento di tempo, strutture e studente.
SICUREZZA: Questo pratico dovrebbe essere effettuato secondo le regole della buona chimica laboratorio pratica (GCLP) — dispositivi di protezione individuale, tra cui un camice da laboratorio fissato, guanti monouso e occhiali di sicurezza devono essere indossati tutte le volte in laboratorio .
1. Estrarre l'enzima
<ol><li>Schiacciare una compressa di lattasi, contenente 200 mg di enzima, una polvere anche utilizzando un mortaio e un pestello.</li>
	<li>Posizionare la polvere risultante in una provetta da 15 mL etichettati "sospensione" e risospendere in 10 mL di 100 mM tamponato fosfato salino (PBS).</li>
	<li>Vortex per 1 min massimizzare l'estrazione degli enzimi.</li>
	<li>Trasferire 1 mL dalla sospensione in una provetta da centrifuga da 1,5 mL e centrifugare per 1 min a 10.000 x g per particelle solide di sedimento.</li>
	<li>Trasferire 500 µ l del surnatante in una provetta pulita 1,5 mL etichettata "Estratto di lattasi".</li>
</ol>2. osservando la reazione colorimetrica
<ol><li>Posto 390 µ l di 100 mM PBS in una provetta da 1,5 mL etichettati "Quella A".</li>
	<li>Aggiungere 100 µ l di soluzione ONPG 5mm e mescolare bene su Vortex. Attenzione: Questo pratico utilizza orto-nitrofenolo -beta-D-galattopiranoside (ONPG) come un sostituto per il lattosio. ONPG, essendo un composto fenolico, esso deve essere maneggiato con cautela. In caso di contatto con la pelle con ONPG, lavare immediatamente la pelle esposta. Tutte le cadute devono essere pulite immediatamente con carta assorbente per essere smaltiti nel flusso dei rifiuti appropriato.</li>
	<li>Aggiungere 10 µ l di estratto in quella A tubo e mix bene su Vortex.</li>
	<li>Osservare la miscela di reazione per 5 minuti e prendere nota di eventuali modifiche colorimetrici per la soluzione.</li>
</ol>3. misurazione dell'attività enzimatica
<ol><li>Impostare due provette da 1,5 mL: uno etichettati "Reazione B", uno etichettati "controllo".</li>
	<li>µ L 390 di 100mm PBS alla reazione tubo B, 400 µ l di 100 mM PBS per il tubo di controllo e quindi aggiungere 100 µ l di 5mm ONPG in ogni provetta.</li>
	<li>Mescolare il contenuto nel Vortex.</li>
	<li>Aggiungere 10 µ l di Estratto di lattasi nella provetta di reazione B, mescolare nel vortex e lasciare che la reazione di procedere per 1 min a temperatura ambiente.</li>
	<li>Una volta trascorso 1 min, aggiungere 500 µ l di carbonato di sodio 1 M per entrambi i tubi per inibire l'enzima lattasi aumentando il pH, quindi terminare la reazione.</li>
	<li>Trasferire 500 µ l da ciascuna provetta in cuvette spettrofotometro pulito e misurare l'assorbanza a 420 nm utilizzando lo spettrofotometro.</li>
	<li>Nota la capacità di assorbimento per reazione B e campioni di controllo e quindi sottrarre il valore del controllo dal valore di reazione per derivare la variazione di assorbanza a causa di idrolisi di ONPG in presenza di enzima attivo.</li>
</ol>4. effetto della temperatura sull'attività dell'enzima
<ol><li>Impostare controllo tre tubi e tre provette di reazione, come descritto nella sezione 3 ed etichettare questi "4 ° C", "Temperatura ambiente" e "37 ° C".</li>
	<li>Dopo aggiunta di enzima estratto, incubare un tubo sul ghiaccio, uno a temperatura ambiente e uno a 37 ° C (in un bagno di acqua pre-riscaldata).</li>
	<li>Consentire le reazioni di procedere per 1 min e quindi terminare la reazione aggiungendo 500 µ l di carbonato di sodio 1 M in ogni provetta.</li>
	<li>Misurare l'assorbanza a 420 nm per ogni tubo come descritto nella sezione 3. Registrare i valori, sottraendo il valore di controllo dal valore di reazione in ogni caso.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Berg, J. M., Tymoczko, J. L., Gatto, J. G., Stryer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biochemistry. , (2015).</li><li>Jittam, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+seaweed+enzyme-catalyzed+bromination+of+bromophenol+red:+An+inquiry-based+kinetics+laboratory+experiment+for+undergraduates.">Red seaweed enzyme-catalyzed bromination of bromophenol red: An inquiry-based kinetics laboratory experiment for undergraduates.</a> Biochemistry and Molecular Biology Education. 37, 99-105 (2009).</li><li>Troelsen, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult-type+hypolactasia+and+regulation+of+lactase+expression.">Adult-type hypolactasia and regulation of lactase expression.</a> Biochimica et biophysica acta. 1723, 19-32 (2005).</li><li>Juers, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+structural+view+of+the+action+of+Escherichia+coli+(lacZ)+beta-galactosidase.">A structural view of the action of Escherichia coli (lacZ) beta-galactosidase.</a> Biochemistry. 40, 14781-14794 (2001).</li><li>Plimmer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+presence+of+lactase+in+the+intestines+of+animals+and+on+the+adaptation+of+the+intestine+to+lactose.">On the presence of lactase in the intestines of animals and on the adaptation of the intestine to lactose.</a> Journal of Physiology. 35, 20-31 (1906).</li><li>Krebs, H. A., Salvin, E., Johnson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formation+of+citric+and+alpha-ketoglutaric+acids+in+the+mammalian+body.">The formation of citric and alpha-ketoglutaric acids in the mammalian body.</a> The Biochemical journal. 32, 113-117 (1938).</li><li>Vesa, T. H., Marteau, P., Korpela, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactose+intolerance.">Lactose intolerance.</a> Journal of the American College of Nutrition. 19, 165S-175S (2000).</li><li>Robayo-Torres, C. C., Nichols, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+differentiation+of+congenital+lactase+deficiency+from+adult-type+hypolactasia.">Molecular differentiation of congenital lactase deficiency from adult-type hypolactasia.</a> Nutrition Reviews. 65, 95-98 (2007).</li><li>Swallow, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+lactase+persistence+and+lactose+intolerance.">Genetics of lactase persistence and lactose intolerance.</a> Annual Review of Genetics. 37, 197-219 (2003).</li><li>Enattah, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+introduction+of+two+lactase-persistence+alleles+into+human+populations+reflects+different+history+of+adaptation+to+milk+culture.">Independent introduction of two lactase-persistence alleles into human populations reflects different history of adaptation to milk culture.</a> American Journal of Human Genetics. 82, 57-72 (2008).</li><li>Lowe, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rapid+detection+of+lactose+fermentation+in+paracolon+organisms+by+the+demonstration+of+beta-D-galactosidase.">The rapid detection of lactose fermentation in paracolon organisms by the demonstration of beta-D-galactosidase.</a> Journal of Medical Laboratory Technology. 19, 21-25 (1962).</li><li>Russo, S. F., Moothart, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+study+of+the+Enzyme+Lactase.">Kinetic study of the Enzyme Lactase.</a> Journal of Chemical Education. 63, 242 (1986).</li></ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse a divulgare.

Una dettagliata conoscenza e comprensione degli enzimi, le reazioni enzimatiche e cinetica degli enzimi è necessaria per una vasta gamma di argomenti che abbracciano la biologia, la biomedicina e la farmacologia. Il protocollo descritto sopra utilizza lattasi come un esempio di un enzima rilevante per la salute umana per aver manifestato reazioni enzimatiche, fornendo competenze chiave che possono essere utilizzate in esperimenti di laboratorio più avanzati.
Questo protocollo è stato volutamente progettato per essere affidabile quanto possibili, permettendo agli studenti con poca o nessuna esperienza di laboratorio bagnato di produrre risultati interpretabili in un breve lasso di tempo. Nell'anno accademico 2014/2015 presso la facoltà di farmacia dell'Università di Reading, un totale di 144 studenti, organizzati in gruppi di 3, ha svolto l'esperimento "misurazione della lattasi", con tutti i gruppi in grado di rilevare un certo livello di attività enzimatica dal tablet di lattasi estratti.
Ci sono un numero di punti critici in questo protocollo. In primo luogo, è essenziale che l'estrazione iniziale è efficiente, consentendo di solubilizzazione di abbastanza enzima attivo per analisi successive. Nella nostra esperienza, primo anno gli studenti universitari possono farlo seguendo il protocollo come indicato; Tuttavia alcune indicazioni da manifestanti di laboratorio è stato richiesto a questo punto. Anche se sembrerebbe un punto evidente, un fattore chiave per il successo di questo protocollo è la capacità di misurare volumi, correttamente Etichettare provette e seguire attentamente le istruzioni. Mentre un certo livello di competenza può essere presupposto per molti studenti, attento monitoraggio e una chiara richiesta per gli studenti a chiedere assistenza nel caso in cui non sono sicuri di cosa fare successivamente fornisce la probabilità più grande di un test di successo.
Valutazione degli studenti può essere effettuata dalla classe foglio di lavoro (disponibile come materiale supplementare), chiedendo agli studenti di notare dati dagli esperimenti, commento sui loro risultati e link a informazioni/letture da materiale lezione, o da più dettagliata, dalla valutazione di classe con i dati del modello forniti consentendo analisi cinetiche essere tentato e valutati.
Il protocollo presentato qui è un semplice esempio di un analisi di attività della lattasi sotto condizioni di laboratorio di insegnamento, e c'è ampia possibilità di aumentare la complessità dell'esperimento per consentire analisi più avanzate. In particolare, il protocollo presentato viene fornita un'introduzione al concetto di cinetica enzimatica ma non consente l'analisi cinetica dei dati sperimentali. Come tale, vi consigliamo di visualizzare il protocollo descritto come un modello iniziale per le classi, con dettagli precisi adattati per soddisfare gli obiettivi specifici e talenti della coorte studente impresa gli esperimenti. Esempi di esperimenti estesi possono includere: ripetute misure a temperature diverse, utilizzando concentrazioni di substrato differenti per consentire analisi statistica, analisi cinetica dei dati (adatti per gli studenti di biochimica/Major), iniziando con diversi tablet differenti e consentendo agli studenti di valutare diverse attività dell'enzima in ciascuna (con l'aggiunta di control compresse, adatti per gli studenti/specializzandi di scienze forensi), valutando l'impatto della denaturazione al calore o svolgimento concorso esperimenti di aggiunta di lattosio o inibitori della lattasi (tabella 1). Un protocollo dettagliato per l'analisi cinetica di lattasi precedentemente è stato pubblicato12.
Un importante punto di forza di questo protocollo è che esso combina un'introduzione di base alla cinetica di enzimologia ed enzima con un caso di studio reale di enzimologia in medicina. Questo rende questo laboratorio esperimento di particolare rilevanza per gli studenti di medicina, farmacia, scienze biomediche e argomenti correlati. Soprattutto, il fatto che c'è una grave condizione medica e un più diffuso problema dietetico associato con catabolismo del lattosio offre l'opportunità di raccogliere una vasta gamma di questioni mediche ed etiche con gli studenti. Questo potrebbe includere le questioni che circondano la prova genetica per condizioni mediche e associate discussioni relative alla terapia genica e counselling genetico, così come uso e vendita di medicinali integratori. Uno dei principali limiti è che il protocollo non consentono una stima precisa della concentrazione di enzimi, a causa del materiale di partenza utilizzato per l'estrazione. Una modifica per tenere conto di questo, tuttavia, sarebbe quella di utilizzare degli enzimi di grado reagente per il dosaggio. D'importanza, questo permetterebbe anche per un calcolo più preciso della cinetica per l'enzima lattasi.
In conclusione, analizzando l'attività della lattasi in un laboratorio di insegnamento ambiente fornisce una robusta, coinvolgente e interessante introduzione al campo della biologia di enzima per fase iniziale gli studenti universitari.

Gli enzimi sono un tipo specializzato di proteine che agiscono come catalizzatori biologici per reazioni chimiche nel vivere organismi1. L'azione degli enzimi è fondamentale per la vita, fornendo energia, smaltimento dei rifiuti e permettendo di organismi a funzionare. Enzimi di comprensione è, quindi, fondamentale per una piena comprensione della vita. Tale conoscenza è essenziale per un'ampia varietà di programmi di laurea universitari, che vanno dalle scienze mediche alla biologia. Mentre uno sfondo dettagliato dai principi di catalisi ai modelli teorici dell'attività enzimatica può essere fornito agli studenti mediante lezioni e materiale di lettura, le proprietà delle reazioni enzimatiche sono meglio compreso da mani su esperienza pratica di gli enzimi in azione come precedentemente dimostrato2. Questo protocollo fornisce una semplice seguire il paradigma sperimentale per misurare l'attività dell'enzima in condizioni di laboratorio, utilizzando lattasi come esempio di un enzima con un'attività rilevante per la salute e la nutrizione umana.
La lattasi glicosidici idrolasi (EC 3.2.1.23/26) è un enzima di centrale importanza nutrizionale per mammiferi3. L'attività della lattasi è una proteina altamente conservata attraverso l'evoluzione e deriva dalla famiglia degli enzimi beta-galattosidasi — una famiglia presente da Escherichia coli attraverso a Homo sapiens (Figura 1, PDB 1JZ8)4. L'importanza critica della lattasi in un ambiente nutrizionale umano deriva dal suo ruolo nel permettere la ripartizione di lattosio nei suoi componenti costitutivi monosaccaride, che possono quindi essere utilizzati per generare energia nel corpo. Lattasi catalizza l'idrolisi del legame glicosidico nel disaccaride lattosio, rilasciando galattosio e glucosio (Figura 2)5. Questi monosaccaridi vengono quindi utilizzati principalmente per la produzione di adenosina trifosfato (ATP) attraverso il ciclo dell'acido citrico e fosforilazione ossidativa6. Durante lo sviluppo infantile e neonato, lattasi è altamente espressa nell'apparato digerente umano, lattosio ricevuto dal latte materno che di cui lattosio è il componente primario del carboidrato e una delle principali fonti di nutrizione durante i primi anni 7. l'importanza medica di lattasi è evidenziata da deficit congenito di lattasi (CLD), uno stato recessivo autosomal raro causato dalle mutazioni nel gene della lattasi (LCT) che codifica per l' enzima lattasi8. Neonati con CLD esibiscono l'attività della lattasi molto poco, quindi non possono essere alimentati con il latte materno, qualsiasi altro tipo di latte, o una formula contenente lattosio.
Durante l'infanzia, l'espressione della lattasi è normalmente ridotta; Tuttavia, questa riduzione dopo lo svezzamento varia geograficamente, con circa il 35% di adulti in tutto il mondo continua ad esprimere l' enzima9. Sostenuta espressione della lattasi, nota come persistenza di lattasi, consente alle persone di continuare a digerire il latte e derivati da una gamma di fonti. Al contrario, la perdita di espressione di lattasi può comportare l'intolleranza al lattosio, noto anche come adulto-tipo hypolactasia (ATH), risultanti da un'incapacità di scomporre il lattosio nell'intestino. ATH è caratterizzata da una build up di lattosio nel colon dopo ingestione di lattosio contenenti prodotti alimentari. Nel colon, il lattosio accumulato viene fermentato da fauna microbica dell'intestino, rilasciando gas tra cui l'idrogeno, metano e anidride carbonica. Gonfiore addominale, flatulenza aumentata, dolore, nausea, borborigmi (brontolio di stomaco)7e promuovere la produzione di questi gas in individui con deficit di enzima lattasi. Aumento dei livelli di lattosio nell'apparato digerente può anche portare alla perdita di feci.
Il controllo dell'espressione genica LCT è modulato da polimorfismi localizzati in introni del gene MCM6 nelle vicinanze. Gli individui con sostenuta espressione della lattasi trasportano polimorfismi che fungono da rinforzatori distali forti per LCT espressione genica, compensando così la normale regolazione della trascrizione di LCT durante lo svezzamento e di conseguenza sostenere l'espressione della lattasi in età adulta3. Polimorfismi di Enhancer sono stati suggeriti per sono stati selezionati positivamente dopo l'addomesticamento dei bovini e dei cammelli in Medio Oriente oltre cinquemila anni fa9,10.
I sintomi che derivano da ATH possono essere gestiti riducendo l'assunzione di lattosio, ad esempio rimuovendo i latticini dalla dieta. Un approccio alternativo per ATH e l'approccio di scelta per CLD, è l'uso di integratori di lattasi, ampiamente disponibili in farmacia. Questi integratori forniscono lattasi isolata da una varietà di fonti, compresi i lieviti e batteri, in forma liquida o basati su pillola che può essere presa con o aggiunto al lattosio contenenti alimenti. Il supplemento sarà idrolizzare una percentuale del lattosio presente nel cibo ai prodotti glucosio e galattosio, così permettendo il loro assorbimento e accumulo di substrato di lattosio non digerito nell'intestino.
Basata sull'utilizzo di integratori di lattasi come aiuto dietetico, abbiamo sviluppato un esperimento di laboratorio di enzimologia semplice adatto per studenti primo anno biomedicali scienza o farmacia. Questo esperimento di laboratorio si avvale di integratori di lattasi commercialmente disponibili e usi orto-nitrofenolo -beta-D-galattopiranoside (ONPG) per fornire un punto di fine colorimetrico per la misurazione la scissione dei legami glicosidici di lattasi ( Figura 3)11. ONPG agisce un substrato artificiale per la lattasi, che quando sottoposto a idrolisi da questo enzima produce D-galattosio e orto-nitrofenolo. Quest'ultimo prodotto ha un colore giallo, assorbendo la luce ad una lunghezza d'onda di 420 nm. Di quantificare eventuali modifiche di assorbanza a seguito di 420 nm l'esposizione di ONPG per lattasi, è possibile valutare l'attività di questo enzima. Questo esperimento di laboratorio fornisce una dimostrazione dell'attività enzimatica idrolasi. Costruendo in ulteriori repliche e svolgimento di analisi in condizioni diverse, è possibile incorporare più sofisticate analisi di cinetica enzimatica, fornendo un prezioso esempio di vita reale degli enzimi in azioni rilevanti per la salute umana.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:796px;" width="797">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Lactase tablet</td>
			<td style="width:71px;">Lamberts</td>
			<td style="width:119px;">8511-60</td>
			<td style="width:392px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:215px;">Phosphate buffered saline (powdered)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P3813</td>
			<td style="width:392px;">Dissolved in deionized water to a final concentration of 100 mM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">ONPG</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">N1127</td>
			<td style="width:392px;">Dissolved in deionized water to a final concentration of 5 mM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium Carbonate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">451614</td>
			<td style="width:392px;">Dissolved in deionized water to a final concentration of 1 M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">De-ionized water</td>
			<td style="width:71px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td style="width:392px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:215px;">Pestle and mortar</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:215px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:71px;">Jenway 6315</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:215px;">Pipettes</td>
			<td style="width:71px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:215px;">15 mL tubes</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:215px;">1.5 mL tubes</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:215px;">Spectrophotometer cuvettes</td>
			<td style="width:71px;">Jenway</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:215px;">Vortex</td>
			<td style="width:71px;">Vortex genie 2</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:215px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Beckman</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:215px;">Ice bucket</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:215px;">Water bath</td>
			<td style="width:71px;">Thermo-Scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:215px;">Weighing scales</td>
			<td style="width:71px;">Thermo-Scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring lactase enzymatic activity in the teaching lab

Comprensione del funzionano di enzimi e concernenti questo esempi di vita reale, è fondamentale per una vasta gamma di corsi di laurea in scienze biologiche e biomediche. Questo facile da seguire protocollo è stato sviluppato per studenti del primo anno dello studente non laureato farmacia e fornisce un'introduzione entry-level di reazioni enzimatiche e procedure analitiche per l'analisi dell'enzima. L'enzima di scelta è la lattasi, come questo rappresenta un esempio di un enzima disponibile commercialmente rilevante per la pratica umana di malattia/farmaceutico. Lattasi è estratta da compresse integratore alimentare e valutata utilizzando un saggio colorimetrico basato su idrolisi di un substrato artificiale per la lattasi (orto-nitrofenolo -beta-D-galattopiranoside, ONPG). Rilascio di orto-nitrofenolo seguendo la scissione idrolitica di ONPG di lattasi è misurata da una variazione di assorbanza a 420 nm e l'effetto della temperatura sulla reazione enzimatica viene valutata effettuando la reazione sul ghiaccio, a temperatura ambiente e a 37 ° C. Analisi più avanzate può essere implementata usando questo protocollo valutando l'attività dell'enzima in condizioni diverse e utilizzando reagenti diversi.

Risultati rappresentativi per la sezione 2 del protocollo sono mostrati in Figura 4A. La reazione di controllo, in assenza dell'enzima lattasi, rimane chiara, mentre la soluzione di reazione, contenente Estratto da the tablet di lattasi, diventa gialla come ONPG è idrolizzato rilasciando orto- nitrofenolo. Figura 4B Mostra quantificazione usando unità arbitrarie da sezione 4 del protocollo, seguente l'analisi dei campioni utilizzando lo spettrofotometro. Produzione di orto-nitrofenolo è minima quando la reazione viene incubata sul ghiaccio e massima quando la reazione è condotta a 37 ° C.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54377/54377fig1.jpg"> Figura 1 : Escherichia coli beta-galattosidasi. (A) struttura di cristallo di beta-galattosidasi da Escherichia coli, mostrando la struttura tetramerica del principio attivo complesso. (B) Allolactose (mostrato in rosso) associato al sito attivo della beta-galattosidasi. Immagini generate da PDB 1JZ84. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54377/54377fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54377/54377fig2.jpg"> Figura 2 : Azione enzimatica della lattasi. Idrolisi del lattosio di lattasi per la produzione di beta-D-glucosio e beta-D-galattosio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54377/54377fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54377/54377fig3.jpg"> Figura 3 : Idrolisi di orto-nitrofenolo - beta -D-galattopiranoside. Idrolisi ONPG di lattasi per la produzione di beta-D-galattosio e orto-nitrofenolo (che è di colore giallo), che permette la stima dell'attività lattasica di misurazione dell'assorbanza a 420 nm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54377/54377fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a> 
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54377/54377fig4.jpg"> Figura 4 : Idrolisi ONPG. Risultati rappresentativi di idrolisi ONPG, mostrando controllo e le provette (A) e dati rappresentativi dal punto 4 del protocollo registrato su fogli di lavoro in classe, risultati grezzo assorbanza in unità arbitrarie a 420 nm, rettificato per sfondo e a tre diverse temperature (B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54377/54377fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Condizione sperimentale</td>
			<td>Variabili sperimentali</td>
		</tr>
<tr>
<td>Temperatura</td>
			<td>0 ° C, 10 ° C, 20 ° C, 30 ° C, 50 ° C</td>
		</tr>
<tr>
<td>Concentrazione del substrato</td>
			<td>0 mM, 1 mM, 5 mM, 10 mM ONPG</td>
		</tr>
<tr>
<td>Inibizione competitiva</td>
			<td>lattosio ONPG plus 0 mM, 1 mM, 5 mM o 10 mM 5 mM</td>
		</tr>
<tr>
<td>Dipendenza dal tempo</td>
			<td>0 s, 15 s, 30 s, 1 min, 5 min, 10 min, 20 min</td>
		</tr>
<tr>
<td>Denaturazione al calore</td>
			<td>Estratto di lattasi riscaldata a 100 ° C per 10 minuti prima del test</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 1: potenziale estesa condizione sperimentale. Ha suggerito gli esperimenti estesi, da effettuarsi in triplice copia, indagando su aspetti specifici della lattasi Biologia.

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Measuring Lactase Enzymatic Activity in the Teaching Lab

L'attività enzimatica della lattasi è essenziale per la lavorazione catabolica del disaccaride lattosio. Qui, l'attività della lattasi trovata negli integratori alimentari è analizzata utilizzando un saggio colorimetrico. Questo fornisce agli studenti una piattaforma sperimentale per comprendere l'attività della lattasi ed enzima cinetica.

Misurazione dell'attività enzimatica della lattasi in laboratorio

Understanding how enzymes work, and relating this to real life examples, is critical to a wide range of undergraduate degrees in the biological and ...

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112.7K Views.  University of Reading. L'attività enzimatica della lattasi è essenziale per la lavorazione catabolica del disaccaride lattosio. Qui, l'attività della lattasi trovata negli integratori alimentari è analizzata utilizzando un saggio colorimetrico. Questo fornisce agli studenti una piattaforma sperimentale per comprendere l'attività della lattasi ed enzima cinetica.

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Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development can be addressed. The zebrafish is useful for genetic studies due to several advantageous characteristics, including small size, high fecundity, short lifecycle, and ease of care. Lens development occurs rapidly in zebrafish. By 72 hpf, the zebrafish lens is functionally mature [3]. Abundant genetic and molecular resources are available to support research in zebrafish. In addition, the similarity of the zebrafish eye to those of other vertebrates provides basis for its use as an excellent animal model of human defects[4-7]. Several zebrafish mutants exhibit lens abnormalities, including high levels of cell death, which in some cases leads to a complete degeneration of lens tissues [8]. To determine whether lens abnormalities are due to intrinsic causes or to defective interactions with the surrounding tissues, transplantation of a mutant lens into a wild-type eye is performed. Using fire-polished metal needles, mutant or wild-type lenses are carefully dissected from the donor animal, and transferred into the host. To distinguish wild-type and mutant tissues, a transgenic line is used as the donor. This line expresses membrane-bound GFP in all tissues, including the lens. This transplantation technique is an essential tool in the studies of zebrafish lens mutants.

Lens development involves interactions with other tissues. Several zebrafish eye mutants are characterized by an abnormally small lens size. Here we demonstrate a lens transplantation experiment to determine whether this phenotype is due to intrinsic causes or defective interactions with tissues that surround the lens.

Lens trapianto in Zebrafish e la sua applicazione nell&#39;analisi dei Mutanti Eye

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

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Biologia

An Assay for Measuring the Activity of Escherichia coli Inducible Lysine Decarboxyase

Escherichia coli is an enteric bacterium that is capable of growing over a wide range of pH values (pH 5 - 9)1 and, incredibly, is able to survive extreme acid stresses including passage through the mammalian stomach where the pH can fall to as low as pH 1 - 22. To enable such a broad range of acidic pH survival, E. coli possesses four different inducible amino acid decarboxylases that decarboxylate their substrate amino acids in a proton-dependent manner thus raising the internal pH. The decarboxylases include the glutamic acid decarboxylases GadA and GadB3, the arginine decarboxylase AdiA4, the lysine decarboxylase LdcI5, 6 and the ornithine decarboxylase SpeF7. All of these enzymes utilize pyridoxal-5'-phospate as a co-factor8 and function together with inner-membrane substrate-product antiporters that remove decarboxylation products to the external medium in exchange for fresh substrate2. In the case of LdcI, the lysine-cadaverine antiporter is called CadB. Recently, we determined the X-ray crystal structure of LdcI to 2.0 &#197;, and we discovered a novel small-molecule bound to LdcI the stringent response regulator guanosine 5'-diphosphate,3'-diphosphate (ppGpp) 14. The stringent response occurs when exponentially growing cells experience nutrient deprivation or one of a number of other stresses9. As a result, cells produce ppGpp which leads to a signaling cascade culminating in the shift from exponential growth to stationary phase growth10. We have demonstrated that ppGpp is a specific inhibitor of LdcI 14. Here we describe the lysine decarboxylase assay, modified from the assay developed by Phan et al.11, that we have used to determine the activity of LdcI and the effect of pppGpp/ppGpp on that activity. The LdcI decarboxylation reaction removes the &alpha;-carboxy group of L-lysine and produces carbon dioxide and the polyamine cadaverine (1,5-diaminopentane)5. L-lysine and cadaverine can be reacted with 2,4,6-trinitrobenzensulfonic acid (TNBS) at high pH to generate N,N'-bistrinitrophenylcadaverine (TNP-cadaverine) and N,N&#8242;-bistrinitrophenyllysine (TNP-lysine), respectively11. The TNP-cadaverine can be separated from the TNP-lysine as the former is soluble in organic solvents such as toluene while the latter is not (See Figure 1). The linear range of the assay was determined empirically using purified cadaverine.

An Assay for Measuring the Activity of Escherichia coli Inducible Lysine Decarboxyase

The activity of the inducible lysine decarboxylase is monitored by reacting the substrate L-lysine and the product cadaverine with 2,4,6-trinitrobenzensulfonic acid to form adducts that have differential solubility in toluene.

Un test per misurare l&#39;attività di Escherichia coli Inducibile Lisina Decarboxyase

Escherichia coli is an enteric bacterium that is capable of growing over a wide range of pH values (pH 5 - 9)1 and, incredibly, is able to survive extreme ...

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor mutations in components of age-regulatory pathways. If these mutations perturb the function of the age-regulatory pathway and therefore alter the lifespan of the entire organism, they provide important mechanistic insights1-3.
Another strategy to investigate the regulation of lifespan is to use small molecules to perturb age-regulatory pathways. To date, a number of molecules are known to extend lifespan in various model organisms and are used as tools to study the biology of aging4-16. The number of molecules identified thus far is small compared to the genetic "toolset" that is available to study the biology of aging.
Caenorhabditis elegans is one of the principle models used to study aging because of its excellent genetics and short lifespan of three weeks. More recently, C.elegans has emerged as a model organism for phenotype based drug screens5,7,16-20 because of its small size and its ability to grow in microtiter plates.
Here we present an assay to measure C.elegans lifespan in 96 well microtiter plates. The assay was developed and successfully used to screen large libraries for molecules that extend C.elegans lifespan7. The reliability of the assay was evaluated in multiple tests: first, by measuring the lifespan of wild type animals grown at different temperatures; second, by measuring the lifespan of mutants with altered lifespans; third, by measuring changes in lifespan in response to different concentrations of the antidepressant Mirtazepine. Mirtazepine has previously been shown to extend lifespan in C.elegans7. The results of these tests show that the assay is able to replicate previous findings from other assays and is quantitative. The microtiter format also makes this lifespan assay compatible with automated liquid handling systems and allows integration into automated platforms.

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

In this protocol we present a method to measure Caenorhabditis elegans lifespan in 96 well microtiter plates.

Misura Caenorhabditis elegans Life Span in 96 piastre per microtitolazione Bene

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Whole mount in situ hybridization (WISH) is a common technique in molecular biology laboratories used to study gene expression through the localization of specific mRNA transcripts within whole mount specimen. This technique (adapted from Albertson and Yelick, 2005) was used in an upper level undergraduate Comparative Vertebrate Biology laboratory classroom at Syracuse University. The first two thirds of the Comparative Vertebrate Biology lab course gave students the opportunity to study the embryology and gross anatomy of several organisms representing various chordate taxa primarily via traditional dissections and the use of models. The final portion of the course involved an innovative approach to teaching anatomy through observation of vertebrate development employing molecular techniques in which WISH was performed on zebrafish embryos. A heterozygous fibroblast growth factor 8 a (fgf8a) mutant line, ace, was used. Due to Mendelian inheritance, ace intercrosses produced wild type, heterozygous, and homozygous ace/fgf8a mutants in a 1:2:1 ratio. RNA probes with known expression patterns in the midline and in developing anatomical structures such as the heart, somites, tailbud, myotome, and brain were used. WISH was performed using zebrafish at the 13 somite and prim-6 stages, with students performing the staining reaction in class. The study of zebrafish embryos at different stages of development gave students the ability to observe how these anatomical structures changed over ontogeny. In addition, some ace/fgf8a mutants displayed improper heart looping, and defects in somite and brain development. The students in this lab observed the normal development of various organ systems using both external anatomy as well as gene expression patterns. They also identified and described embryos displaying improper anatomical development and gene expression (i.e., putative mutants).
For instructors at institutions that do not already own the necessary equipment or where funds for lab and curricular innovation are limited, the financial cost of the reagents and apparatus may be a factor to consider, as will the time and effort required on the part of the instructor regardless of the setting. Nevertheless, we contend that the use of WISH in this type of classroom laboratory setting can provide an important link between developmental genetics and anatomy. As technology advances and the ability to study organismal development at the molecular level becomes easier, cheaper, and increasingly popular, many evolutionary biologists, ecologists, and physiologists are turning to research strategies in the field of molecular biology. Using WISH in a Comparative Vertebrate Biology laboratory classroom is one example of how molecules and anatomy can converge within a single course. This gives upper level college students the opportunity to practice modern biological research techniques, leading to a more diversified education and the promotion of future interdisciplinary scientific research.

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Whole mount in situ hybridization (WISH) was used in an upper level undergraduate Comparative Vertebrate Biology course in addition to vertebrate dissections. This gave students the opportunity to study gene expression patterns as well as gross anatomy, linking the study of molecular and organismal biology within one course.

Utilizzando il monte intero In situ Ibridazione a Link Biologia Molecolare e organismal

Whole mount in situ hybridization (WISH) is a common technique in molecular biology laboratories used to study gene expression through the localization of ...

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient (Pf) of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

Studying AQP regulation mechanisms is crucial for the understanding of water relations at both the cellular and the whole plant levels. Presented here is a simple and very efficient method for the determination of the osmotic water permeability coefficient (Pf) in plant protoplasts, applicable in principle also to other spherical cells such as frog oocytes. The first step of the assay is the isolation of protoplasts from the plant tissue of interest by enzymatic digestion into a chamber with an appropriate isotonic solution. The second step consists of an osmotic challenge assay: protoplasts immobilized on the bottom of the chamber are submitted to a constant perfusion starting with an isotonic solution and followed by a hypotonic solution. The cell swelling is video recorded. In the third step, the images are processed offline to yield volume changes, and the time course of the volume changes is correlated with the time course of the change in osmolarity of the chamber perfusion medium, using a curve fitting procedure written in Matlab (the &#8216;PfFit&#8217;), to yield Pf.

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient Pf of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

Measuring the osmotic water permeability coefficient (Pf) of cells can help understand the regulatory mechanisms of aquaporins (AQPs). Pf determination in spherical plant cell protoplasts presented here involves protoplasts isolation and numerical analysis of their initial rate of volume change as a result of an osmotic challenge during constant bath perfusion.

Misurare il osmotica dell&#39;acqua Permeabilità Coefficiente (P<sub&gt; F</sub&gt;) Di celle sferiche: protoplasti impianto isolato come un esempio

Studying AQP regulation mechanisms is crucial for the understanding of water relations at both the cellular and the whole plant levels. Presented here is ...

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, most notably developmental arrest and reduced metabolism. Global gene expression profiling via RNA-Seq can provide important insights into the transcriptional mechanisms of photoperiodic diapause. The Asian tiger mosquito, Aedes albopictus, is an outstanding organism for studying the transcriptional bases of diapause due to its ease of rearing, easily induced diapause, and the genomic resources available. This manuscript presents a general experimental workflow for identifying diapause-induced transcriptional differences in A. albopictus. Rearing techniques, conditions necessary to induce diapause and non-diapause development, methods to estimate percent diapause in a population, and RNA extraction and integrity assessment for mosquitoes are documented. A workflow to process RNA-Seq data from Illumina sequencers culminates in a list of differentially expressed genes. The representative results demonstrate that this protocol can be used to effectively identify genes differentially regulated at the transcriptional level in A. albopictus due to photoperiodic differences. With modest adjustments, this workflow can be readily adapted to study the transcriptional bases of diapause or other important life history traits in other mosquitoes.

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

RNA-Seq analyses are becoming increasingly important for identifying the molecular underpinnings of adaptive traits in non-model organisms. Here, a protocol to identify differentially expressed genes between diapause and non-diapause Aedes albopictus mosquitoes is described, from mosquito rearing, to RNA sequencing and bioinformatics analyses of RNA-Seq data.

Un Sperimentale e Bioinformatica Protocollo per analisi di RNA-Seq di photoperiodic diapausa nella zanzara tigre,<em&gt; Aedes albopictus</em

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. The movement of prey organisms causes mechanosensory discharge of the stinging cells called nematocysts from hydra, which are inserted into the prey. The feeding response in hydra, which includes curling of the tentacles to bring the prey towards the mouth, opening of the mouth and consequent engulfing of the prey, is triggered by GSH present in the fluid released from the injured prey. To be able to identify the molecular mechanism of the feeding response in hydra which is unknown to date, it is necessary to establish an assay to measure the feeding response. Here, we describe a simple method for the quantitation of the feeding response in which the distance between the apical end of the tentacle and mouth of hydra is measured and the ratio of such distance before and after the addition of GSH is determined. The ratio, called the relative tentacle spread, was found to give a measure of the feeding response. This assay was validated using a starvation model in which starved hydra show an enhanced feeding response in comparison with daily fed hydra.

Here we describe a simple assay for the quantification of the feeding response in hydra induced by the reduced form of glutathione. This assay relies on measuring the distance between the apical end of the tentacle and mouth of hydra.

Misurazione glutatione indotta risposta alimentazione a Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Measurement of Larval Activity in the Drosophila Activity Monitor

Drosophila larvae are used in many behavioral studies, yet a simple device for measuring basic parameters of larval activity has not been available. This protocol repurposes an instrument often used to measure adult activity, the TriKinetics Drosophila activity monitor (MB5 Multi-Beam Activity Monitor) to study larval activity. The instrument can monitor the movements of animals in 16 individual 8 cm glass assay tubes, using 17 infrared detection beams per tube. Logging software automatically saves data to a computer, recording parameters such as number of moves, times sensors were triggered, and animals&#8217; positions within the tubes. The data can then be analyzed to represent overall locomotion and/or position preference as well as other measurements. All data are easily accessible and compatible with basic graphing and data manipulation software. This protocol will discuss how to use the apparatus, how to operate the software and how to run a larval activity assay from start to finish.

Measurement of Larval Activity in the Drosophila Activity Monitor

This report describes a method for measuring Drosophila larval activity using the TriKinetics Drosophila Activity Monitor. The device employs infrared beams to detect movements of up to 16 individual animals. Data can be analyzed to represent motion parameters including rates and the positions of the animals within the assay chambers.

Misura della larvali attività nel<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Drosophila larvae are used in many behavioral studies, yet a simple device for measuring basic parameters of larval activity has not been available. This ...

Method for Measuring the Activity of Deubiquitinating Enzymes in Cell Lines and Tissue Samples

The ubiquitin-proteasome system has recently been implicated in various pathologies including neurodegenerative diseases and cancer. In light of this, techniques for studying the regulatory mechanism of this system are essential to elucidating the cellular and molecular processes of the aforementioned diseases. The use of hemagglutinin derived ubiquitin probes outlined in this paper serves as a valuable tool for the study of this system. This paper details a method that enables the user to perform assays that give a direct visualization of deubiquitinating enzyme activity. Deubiquitinating enzymes control proteasomal degradation and share functional homology at their active sites, which allows the user to investigate the activity of multiple enzymes in one assay. Lysates are obtained through gentle mechanical cell disruption and incubated with active site directed probes. Functional enzymes are tagged with the probes while inactive enzymes remain unbound. By running this assay, the user obtains information on both the activity and potential expression of multiple deubiquitinating enzymes in a fast and easy manner. The current method is significantly more efficient than using individual antibodies for the predicted one hundred deubiquitinating enzymes in the human cell.

The current protocol details a method for measuring the activity of functionally homologous deubiquitinating enzymes. Specialized probes covalently modify the enzyme and allow for detection. This method holds the potential to identify new therapeutic targets.

Metodo per la misurazione dell&#39;attività di Deubiquitinating enzimi in linee di cellule e tessuti Campioni

The ubiquitin-proteasome system has recently been implicated in various pathologies including neurodegenerative diseases and cancer. In light of this, ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the mouse provides great potential to explore cardiac function at the molecular level. The mouse&#39;s small size does present some challenges in regards to performing detailed cardiac phenotyping. Miniaturization and other advancements in technology have made many methods of cardiac assessment possible in the mouse. Of these, the simultaneous collection of pressure and volume data provides a detailed picture of cardiac function that is not available through any other modality. Here a detailed procedure for the collection of pressure-volume loop data is described. Included is a discussion of the principles underlying the measurements and the potential sources of error. Anesthetic management and surgical approaches are discussed in great detail as they are both critical to obtaining high quality hemodynamic measurements. The principles of hemodynamic protocol development and relevant aspects of data analysis are also addressed.

This manuscript describes a detailed protocol for the collection of pressure-volume data from the mouse.

Misurazione Loops Volume Pressione nel mouse

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...