Questo metodo può aiutare a rispondere alle domande chiave relative al controllo biologico degli agenti patogeni delle piante trasportate dal suolo. Il gold standard per testare materiali come il compost è quello di avere un saggio biologico vegetale per testare se è tossico per le piante. Tuttavia, ci vogliono tre settimane.
Questo metodo può essere eseguito in circa due o tre giorni. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è semplice, conveniente ed efficace. Questo saggio è un rapido screening di compost specifico per sopprimere la crescita di Rhizoctonia solani.
Tuttavia, questo saggio può anche essere usato contro altri patogeni vegetali nati sul suolo, come Fusarium, Pythiums e Phytophthoras. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale perché si cura di isolare e mantenere una cultura pura di un fungo evitando la contaminazione. A dimostrare la procedura di isolamento sarà Taylor Readyhough, una studentessa laureata del mio laboratorio.
Emma Wright, una studentessa universitaria del mio laboratorio, dimostrerà il saggio del concorso. Per cominciare, seminare semi di ravanello rosso nel terreno noto per avere una storia di malattia causata da R.solani. Dopo tre o quattro settimane, rimuovere le piantine dal terreno e sciacquarle con acqua del rubinetto.
Usando una lama di rasoio, tagliare segmenti di un centimetro dell'ipocotile e della radice che hanno un colore marrone. Quindi, utilizzare le forcep sterilizzate a fiamma per immergere i segmenti in una soluzione di candeggina al 10% per un minuto. Dopo questo, sciacquare i segmenti in acqua sterile.
Quindi, utilizzare le forcep sterilizzate a fiamma per trasferire i segmenti su un tovagliolo di carta. Asciugare i segmenti e trasferirli in una piastra di Petri con agar d'acqua. Posizionare la piastra di Petri all'interno di un contenitore con un coperchio e incubare i segmenti a temperatura ambiente.
Per stabilire una cultura figlia, trasferisci uno dei segmenti al centro di un piatto fresco di agar destrosio di patate. Successivamente, autoclave provette da 25 millilitri contenenti 10 millilitri di acqua. Aggiungere due campioni da 0,5 grammi di ciascun campione di prova a un paio di provette autoclavate con 10 millilitri di acqua sterile e scuotere le provette durante la notte.
Dopo 24 ore, aggiungere 1,5 grammi di agar semplice e 90 millilitri di acqua distillata a un paio di fiasche coniche. Dopo aver autoclavato i contenitori, posizionarli in un bagno d'acqua Celsius di 45 gradi per 30 minuti. Quindi, versare il campione di riferimento autoclavato e il campione vivente nell'agar fuso.
Versare le miscele da ogni pallone in cinque piastre di Petri. Per proteggere i microbi indigeni, è importante non aggiungere il compost mentre l'agar è troppo caldo. Pertanto, lasciare raffreddare l'agar a 45 gradi Celsius prima di aggiungere il compost.
Usando la tecnica aseptica, trasferire pezzi di R.solani ad ogni coppia di piastre campione. Quindi, incubare le piastre a temperatura ambiente per uno o due giorni. Infine, utilizzare un righello chiaro e piatto e un microscopio stereo per misurare il raggio del micelio in ogni piastra al millimetro più vicino.
In questo protocollo, gli estratti di compost viventi hanno soppresso la crescita di R.solani significativamente più dei campioni autoclavati, dimostrando che l'effetto era microbico e non a base di nutrienti. La soppressività è misurata come una riduzione della crescita rispetto al controllo autoclavato. La crescita non è stata influenzata dalla durata di maturazione o polimerizzazione del compost.
La crescita è stata significativamente influenzata dal metodo del compost e dagli ingredienti delle ricette, in particolare con vermicompost, processi di windrow e ricette con corteccia di legno duro. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica può essere un candidato per la certificazione commerciale del compost per le proprietà soppressive della malattia.
