Questo protocollo di un modello di malattia si vede l'infezione da virus dengue nel cervello diventare una piattaforma in vivo per lo screening di vettori virali e ospiti associati alla neuropatogenesi. A differenza dei modelli precedenti, i nostri modelli utilizzano strumenti dell'infezione con un basso titer virale, per infettare i topi che allattano immunocompetente Institute of Cancer Research per l'induzione della procreazione della malattia encefalitica. A dimostrare la procedura sarà Ting-Jing Shen, dottorando del mio laboratorio.
Prima di iniziare la procedura di infezione, diluire il virus dengue non adattato due stock, a una per 10 alla quinta unità di formatura della placca per 40 microlitri di concentrazione media RPMI 1640. Successivamente, caricare una siringa da 0,3 millilitri dotata di un ago calibro 30 con 10 microlitri di virus diluito. E una siringa da 0,3 millilitri dotata di un ago calibro 30, con 30 microlitri di virus per animale.
Per l'erogazione intercerebrale del virus, premere l'oracolo tra il pollice e l'indice per trattenere delicatamente un topo dell'Istituto di ricerca sul cancro di sette giorni in una posizione incline e iniettare il volume di 10 microliter del virus diluito nell'area lambda, all'intersezione della sutura sagittale e lambdoide. Dopo l'iniezione intercerebrale, utilizzare il pollice e l'indice per tenere il mouse in posizione supina e, delicatamente intraperitonealmente, iniettare il volume di 30 microliter del virus diluito, nell'addome murino. Per il punteggio della progressione della malattia, assegnare un punteggio da zero a cinque a ogni topo inoculato ogni giorno, in base al grado di malattie virali acute simili all'encefalite, e tracciare i punteggi per ogni giorno come una figura basata sulla curva, utilizzando il più e meno medio la deviazione standard dei punteggi giornalieri dei test in ogni gruppo.
Rispetto ai cambiamenti di peso corporeo misurati in topi finti e solo inoculati, gli animali inoculati del virus dengue mostrano una diminuzione del peso corporeo in ogni momento durante lo studio. Inoltre, gli animali infetti da dengue virus dimostrano un aumento significativo delle posture della schiena dell'intuizione, convulsioni limbiche, debolezza limbica, paralisi e morte rispetto ai sintomi mostrati da finti animali inoculati. Infatti, i topi infetti da dengue mostrano una riduzione dipendente dal tempo dei tassi di sopravvivenza che non si osserva nei finti animali inoculati, confermando la creazione di un modello infettivo di virus dengue all'interno del sistema nervoso centrale che dimostra la progressione di malattie virali acute simili all'encefalite nei topi.
La puntura del sito sbagliato può causare il blocco dell'ago da parte del punteggio e l'overflow della soluzione virale al di fuori della testa, con conseguente iniezione fallita e un'infezione fallita. Seguendo la procedura, i campioni cerebrali possono essere raccolti per danni patologici, infiltrazioni di cellule immunitarie e analisi di replicazione virale rispettivamente mediante citometria del flusso di colorazione ematossilina ed eosina e test di formazione della placca. Il nostro modello murino immunocompetente, fornisce una piattaforma per esplorare i meccanismi patogeni dell'infezione da virus dengue, per lo sviluppo di vaccini contro il virus dengue o farmaci anti-dengue virus.
Il virus Dengue è un agente patogeno di livello due di biosicurezza e, in quanto tale, tutti gli esperimenti con questo virus dovrebbero essere completati in un laboratorio qualificato di biosicurezza animale di secondo livello.
