La cannulazione dell'arteria mesenterica superiore nel ratto è difficile e non viene spesso utilizzata come modello sperimentale. Questa tecnica consente di eseguire una cannulazione funzionale e apre un campo di sperimentazione con effetti di primo passaggio di farmaci intra-arteriosi. Questo metodo evita sanguinamento e trombosi mentre consente la cannulazione dell'arteria mesenterica superiore.
E consentendo l'infusione a lungo termine di farmaci in un animale relativamente libero che può mangiare e muoversi. La ricerca farmacologica sui farmaci attivi sull'intestino può trarre grande beneficio da questa tecnica. Non c'è alternativa per studiare l'effetto di un singolo passaggio diretto del farmaco.
Inizia tagliando la cannula più grande. Quindi tagliare la cannula più piccola e inserirla di un centimetro nella cannula più grande. Fissare le due cannule insieme alla colla cianoacrilata evitando l'occlusione del lume.
Successivamente, collegare l'estremità libera della cannula più grande a un adattatore luer stub montato su una siringa da un millilitro riempita con soluzione salina. Affilare la punta libera della cannula più piccola con le forbici per facilitare l'inserimento del catetere nel ramo dell'arteria mesenterica superiore. Controllare la pervietà della cannula lavando con soluzione salina.
Radere la pelliccia dalle regioni chirurgiche del ratto anestetizzato, compreso l'addome per il ramo dell'arteria mesenterica superiore o la cannulazione SMA e la parte posteriore del collo per l'uscita della cannula. Pulire le regioni chirurgiche in modo asettico. E metti l'animale in posizione supina immobilizzando i quattro arti.
Utilizzare una lama di bisturi per aprire la parete addominale con un'incisione diritta di tre centimetri sulla linea mediana della regione meso gastrica attraverso tutti i piani addominali nel peritoneo. Posizionare garze imbevute di soluzione salina attorno all'incisione della laparotomia, utilizzando punti di sutura per mantenere aperta l'incisione chirurgica. Utilizzare tamponi di cotone per identificare ed esporre l'intestino tenue, ed estrarre il mesentere dal taglio laparotomia e posarlo verso il basso sulle garze.
Identifica la SMA sentendo la pulsazione. Usando tamponi di cotone, separare il grasso mesenterico e scoprire la SMA e due o tre dei suoi rami prossimali. Scegli un ramo prossimale della SMA che sia sufficientemente grande da consentire le manovre chirurgiche di cannulazione.
Legare questo ramo da tre a quattro centimetri a valle della sua origine per consentirne l'espansione mantenendo le estremità della sutura abbastanza a lungo da essere manipolate in seguito. Posizionare un supporto rigido sotto il ramo della SMA e tenere l'estremità della cannula più piccola usando una pinza, quindi tirare le estremità della sutura con l'altra mano per sforzare il vaso e facilitare l'ingresso del catetere. Tenere la punta della cannula con un angolo di 20 gradi dal piano della nave nella direzione opposta al flusso sanguigno.
Quindi premere leggermente la punta per penetrare nella parete dell'arteria e inserire la cannula. Continuare l'inserimento della cannula per un centimetro nel ramo arterioso vicino all'origine dalla SMA. Fissare la cannula all'arteria con un nodo chirurgico e verificarne il corretto funzionamento lavando un millilitro di soluzione salina sterile o mediante prelievo di sangue.
Fai un'incisione di un centimetro nella regione posteriore del collo e ospita una valvola sferica. Quindi passare la cannula dalla laparotomia all'accesso alla valvola posta nel collo attraverso i tessuti sottocutanei e chiudere l'estremità distale della cannula con un tappo del catetere per evitare l'afflusso di aria. Sostituire la piccola valvola nella cavità addominale e chiudere la parete addominale.
Quindi fissare la valvola alla pelle successiva con punti di sutura. Vesti il topo con una giacca per proteggere la valvola a bottone. Proteggere la parte esposta della cannula con un'asta di acciaio durante l'infusione e fissarla alla valvola.
Collegare l'estremità distale della cannula a una pompa elastomerica riempita con 50 millilitri di soluzione salina sterile e procedere con l'infusione per 24 ore. Dopo l'infusione, smontare il sistema di infusione esterno dell'animale rimuovendo la pompa, la camicia, l'asta di acciaio e la valvola dal ratto. Chiudere e tagliare la cannula come fuori dal collo, lasciando l'estremità sotto la pelle del collo dopo la sutura della ferita.
In questo studio, 15 ratti sono stati sottoposti a questa procedura e l'assunzione media giornaliera di cibo e acqua è aumentata progressivamente fino alla normalità dopo tre giorni. Anche l'aumento di peso è stato regolare e gradualmente aumentato fino alla fine del periodo di osservazione. Dopo 24 ore, c'erano residui salini in sole due pompe a palloncino, mentre le altre 13 erano completamente vuote.
Inoltre, dopo il periodo di infusione, 12 cannule erano ancora funzionali sia per il prelievo di sangue che per l'infusione salina, mentre tre cannule non erano più brevettabili. All'autopsia, il 100% delle cannule si trovava nel ramo SMA. E nessun ratto aveva segni di ischemia intestinale o sanguinamento intraaddominale.
Un'angiografia è stata ottenuta in cinque ratti iniettando mezzo di contrasto iodonato nella cannula mesenterica. Il cerchio arterioso mesenterico, in particolare la SMA e i suoi rami principali sono stati osservati senza diffusione del mezzo di contrasto nell'addome, confermando che la cannula era ben posizionata e fissata al ramo della SMA. Brevetto, una meticolosa desolazione del ramo per cannulare la legatura del vaso a valle passando la sutura sotto il vaso e scegliendo la posizione più appropriata per forare e inserire la cannula sono gli aspetti più importanti di questo protocollo.
Gli errori non sono correggibili.
