Questo protocollo è il primo a descrivere come le terapie possono essere efficacemente somministrate a un intero allotrapianto cardiaco nel grande modello animale di trapianto cardiaco. Il vantaggio principale di questo protocollo è che consente ai ricercatori di testare gli effetti di una terapia su un intero allotrapianto cardiaco per lunghi periodi di tempo dopo il trapianto. Questa tecnica può essere utilizzata per studiare interventi che prevengono il rigetto dell'allotrapianto cardiaco, la disfunzione primaria dell'innesto, riducono al minimo la necessità di immunosoppressione postoperatoria o prolungano la durata di un allotrapianto cardiaco.
L'ottimizzazione dell'esposizione è la parte più impegnativa della procedura di trapianto e richiede il completamento di più membri del team. Allo stesso modo, sono necessari perfusionisti esperti per coordinare e monitorare la perfusione ex vivo. Per iniziare, fai un'incisione lunga da 20 a 30 centimetri usando la lama numero 10 dal manubrio fino allo xifoide, a seconda delle dimensioni del maiale.
Utilizzare l'elettrocauterizzazione per dividere il pettorale maggiore dallo sterno allo xifoide facendo attenzione a dividere lungo la linea mediana dello sterno. Una volta scesi allo sterno, segna la linea mediana e inizia la sternotomia dallo xifoide dividendolo con forbici pesanti. Quindi estendere la sternotomia cefalade dopo ogni taglio.
Separare senza mezzi termini il cuore dallo sterno usando le spazzate delle dita e completare la sternotomia attraverso il manubrio. Dopo aver ottimizzato l'esposizione al campo chirurgico utilizzando un divaricatore sternale, identificare e rimuovere il timo con elettrocauterizzazione inserendo longitudinalmente il pericardio dal diaframma all'aorta e creando una culla pericardica utilizzando suture di seta. Dividere completamente il tessuto tra l'aorta e l'arteria polmonare e visualizzare la posizione dell'arco aortico e del tronco brachicefalo per facilitare il corretto posizionamento del morsetto incrociato aortico.
Usando le forbici e la dissezione smussata, liberare circonferenzialmente la vena cava superiore e legare due suture di seta di taglia zero attorno alla vena cava superiore. Applicare la sutura in polipropilene taglia 4-0 all'aorta ascendente in modo A U e all'atrio destro in modo a cordone di borsa. Inserire una cannula della radice aortica pediatrica fissata dal punto U precedentemente posizionato.
E poi dopo aver de-airato la cannula, fissare in posizione con un laccio emostatico Rummel. Collegare la cannula della radice aortica al tubo cardioplegico dopo che il tubo è stato lavato con cardioplegia del Nido. Create un'atriotomia destra all'interno della stringa di borsa posizionata in precedenza.
Inserire una cannula venosa nell'atrio destro e fissarla con un laccio emostatico Rummel. Collegare la cannula venosa a una linea di aspirazione sterile collegata alla cardiotomia del risparmiatore cellulare e raccogliere circa 1-1,3 litri di sangue. Quindi applicare il morsetto a croce aortica, assicurandosi attentamente che il morsetto occluda completamente l'aorta ascendente.
Dopo aver posizionato la granita di ghiaccio sterile sul cuore, dividere la vena cava inferiore e superiore appena prossimale alla vena azygos. L'aorta a livello dell'arco appena distale all'arteria innominata e l'arteria polmonare principale alla biforcazione. Identificare e ligare le vene polmonari, quindi rimuovere il cuore dal torace e metterlo in un contenitore con ghiaccio sterile.
Per preparare l'aorta per il posizionamento del connettore aortico, posizionare quattro suture in polipropilene 4-0 di dimensioni impegnate in un semplice materasso orizzontale attorno all'interno dell'aorta distale a una profondità di cinque millimetri sotto il bordo tagliato, quindi legarle. Mentre si sollevano le suture aortiche impegnate, inserire il connettore aortico nell'aorta e legare un nastro ombelicale attorno all'aorta per fissare il connettore. Posizionare una stringa di borsa in polipropilene di dimensioni 4-0 attorno al bordo tagliato distale dell'arteria polmonare principale.
Inserire la cannula dell'arteria polmonare e legare le estremità del cordoncino per fissare la cannula. Quindi collegare alla cannula dell'arteria polmonare al connettore dell'arteria polmonare sul dispositivo e fissarlo con la cravatta. Portare l'innesto preparato dal tavolo posteriore al dispositivo di perfusione ex vivo e collegare il connettore aortico al posto del dispositivo.
Lo sfiato del ventricolo sinistro drena attraverso la vena polmonare slegata nell'atrio sinistro e attraverso la valvola mitrale nel ventricolo sinistro. Usando la lama numero 10, fai un'incisione cutanea lunga da 20 a 30 centimetri e poi continua la dissezione fino alla fascia usando l'elettrocauterizzazione. Dopo aver sollevato la fascia e il peritoneo con due morsetti Kocher, fare con attenzione una piccola incisione nella cavità peritoneale usando le forbici Metzenbaum.
Estendere l'apertura peritoneale per l'intera lunghezza dell'incisione utilizzando l'elettrocauterizzazione. Posizionare un dito sotto per proteggere i visceri sottostanti. Posizionare un divaricatore Balfour per ottimizzare l'esposizione e ritrarre l'intestino tenue cranicamente usando un asciugamano bagnato.
Portare la dissezione fino all'aorta addominale nella vena cava inferiore, quindi ligare i linfatici con clip medie e grandi. Sul tavolo posteriore, quando l'atriotomia sinistra della vena polmonare in cui era stata inserita la bocca del ventricolo ventricolo sinistro è sovraspesata, tagliare l'aspetto distale dell'aorta e dell'arteria polmonare in cui l'attaccamento alle cannule potrebbe aver schiacciato il tessuto. Posizionare un morsetto Satinsky sulla vena cava inferiore e creare una venotomia longitudinale di circa 1,5 centimetri utilizzando la lama numero 11 e le forbici di Pott.
Anastomosi l'innesto dell'arteria polmonare alla vena cava inferiore infrarenale del ricevente in modo end-to-side utilizzando una sutura in polipropilene di dimensioni correnti 4-0. Quindi anastomosizzare l'innesto di aorta nell'aorta infrarenale del ricevente in modo end-to-side utilizzando una sutura in polipropilene di dimensioni correnti 4-0. Posizionare con attenzione il cuore nello spazio retroperitoneale destro, prevenendo la tensione sull'anastomosi e l'attorcigliamento dei vasi.
Quindi sostituire l'intestino tenue. Chiudere la fascia con loop dimensione zero sutura Maxon in modo lineare partendo da entrambe le estremità dell'incisione e legando nel mezzo, evitando qualsiasi lesione all'intestino. Chiudere lo strato dermico profondo con la taglia 2-0 Vicryl in modo lineare e la pelle con la taglia 4-0 Monocryl in modo da corsa.
Sono stati acquisiti diversi parametri di perfusione. Le portate circolatorie sono state misurate dall'arteria polmonare, dall'aorta e dalle arterie coronarie. Sono state misurate anche la pressione aortica, compresa la pressione media, la pressione sistolica, la pressione diastolica.
Durante la perfusione ex vivo, sono state misurate anche la frequenza cardiaca e la temperatura dell'allotrapianto cardiaco. Durante il periodo di perfusione, la saturazione mista di ossigeno venoso e i valori di ematocrito sono stati misurati dal perfusato. La vitalità del cuore eterotopico intrabdominale in situ 35 giorni indica il successo del trapianto utilizzando questo protocollo.
La cosa più importante da ricordare è selezionare un sito per l'allotrapianto che riduca al minimo il potenziale di tensione e attorcigliamento delle anastomosi. Seguendo questa procedura, lo sperimentatore sarà in grado di testare diversi tipi di terapie per determinare i loro effetti sulle risposte immunologiche contro l'allotrapianto, nonché determinare la longevità di un effetto terapeutico sull'alloinnesto. Dopo aver sviluppato questo protocollo, il nostro gruppo è stato in grado di testare diversi veicoli vettoriali virali per la consegna genica, nonché un modello per il rigetto acuto dell'allografo per acquisire una comprensione della fisiopatologia del rigetto e dell'efficacia della consegna genica utilizzando vettori virali.
