Gli autori desiderano ringraziare il Dott. Biagio Pietra per il suo precedente lavoro nel nostro laboratorio.

Tutti gli animali sono stati alloggiati in condizioni esenti da organismi patogeni presso l&#39;Università del Colorado Barbara Davis Animal Center Strutture in approvazione IACUC e curati secondo le linee guida NIH. Profondità di anestesia viene giudicato da un pizzico punta inizialmente e per il rispetto della frequenza respiratoria volta che la procedura è iniziata. 1. Donatore di cuore Harvest <ol><li> Anestetizzare il mouse donatore iniettando pentobarbital (60 mg / kg ip). </li><li> Immobilizzare il mouse vincoli a 4 vie e agganciare la pelliccia. Pulire la cute con alcool. </li><li> Dopo dissezione via la pelle, aprire la cavità addominale facendo una incisione trasversale appena inferiormente al diaframma. </li><li> Tagliare la parte posteriore del diaframma per l&#39;inserimento costale e sollevare la parete toracica anteriore anteriormente e superiormente esponendo il cuore. </li><li> Estendere a tutto spessore tagliare la parte posteriore laterale cavità toracica sui lati destro e sinistro del torace. </li><li> Isolare l&#39;vena cava inferiore (IVC) e posizionare un sciolto 5-0 sutura di seta intorno al IVC adiacente al suo inserimento nell&#39;atrio destro. </li><li> Iniettare 1,0 cc di soluzione fisiologica a 4 ° C eparina (200 u / cc) in IVC, poi legare il vaso con la sutura di seta 5-0 e si dividono. </li><li> Isolare il diritto vena cava superiore (RSVC) in modo simile e legare con 5-0 sutura di seta e dividere. </li><li> Rotolare delicatamente il cuore verso destra degli animali e isolare la vena cava superiore sinistra (lSVC), legare con una sutura di seta 5-0 e dividere esporre l&#39;arteria polmonare sinistra. </li><li> Fissare il cuore sotto una garza umida, mentre il timo è blunt sezionato dalla principale arteria polmonare (PA) e il diritto di rami PA e sinistro e ascendente dell&#39;arco aortico. </li><li> Blunt sezionare l&#39;arco aortico libera dei tessuti circostanti. Micro-forbici vengono utilizzati per dividere prossimale aorta a destra dell&#39;arteria brachiale-cefalico, cioè non ci dovrebbero essere i rami tra il cuore e la divisionepunto dell&#39;aorta. </li><li> Questa sezione dell&#39;arco aortico costituisce il bracciale arterioso per il processo di impianto. </li><li> Riflettere il bracciale aortico inferiormente per esporre il tronco PA ei rami destro e sinistro della PA. </li><li> Blunt sezionare i rami PA sinistro e destro lontano dai tessuti circostanti fino dal cuore come possibile. Questo permette una facile dissezione del tronco PA dai tessuti circostanti. </li><li> Dividere il tronco PA più distalmente possibile, appena prossimale alla sua biforcazione. Questa sezione dell&#39;arteria polmonare costituisce il bracciale venoso per il processo di impianto. </li><li> Collocare una sutura di seta 5-0 intorno alla base del cuore e cravatta. Il cuore viene quindi tagliato libera alla base, e posto in 4 ° C salina. Tempo di raccolta totale è di ca. 10-15 min. </li></ol> 2. Cuore tecnica di impianto <ol><li> Anestetizzare topi riceventi con pentobarbital (60 mg / kg IP dose iniziale, 25 mg / kg IP dose supplementare se necessario). </li><li> Agganciare la pelliccia eimmobilizzare il mouse da vincoli a 4 vie e preparare la pelle con povidone-iodio e drappeggio in modo sterile. </li><li> Fare un 2 centimetri linea mediana verticale incisione addominale e entrare nella cavità addominale. </li><li> Ritrarre l&#39;intestino superiormente ed esternato al petto. Conservare avvolto in una garza umida sterile (soluzione fisiologica sterile) in tutto il caso. </li><li> Isolare l&#39;aorta addominale e la vena cava inferiore (IVC) al di sotto dei vasi renali e posizionare 4-0 legami di cotone in tutto il aorta e vena cava inferiore superiore poi inferiore al sito anastomosi. </li><li> Identificare eventuali vasi lombari all&#39;interno del campo e legare con 10-0 nylon sutura. </li><li> Annodare i lacci di cotone, in primo luogo l&#39;inferiore seguita dal superiore. In questo modo alcuni sangue viene mantenuta in aorta rendendo il aortotomy facile. </li><li> Formare la aortotomy con un ago 30 G per entrare nel lume dell&#39;aorta. Estendere l&#39;incisione con sottili micro forbici per una lunghezza di circa 2 mm. Questa incisione viene effettuata in linea retta lungo l&#39;all&#39;asse longitudinale della nave. </li><li> Effettuare la fine anastomosi lato dell&#39;aorta donatore al destinatario aorta nel modo seguente. Collocare un 10-0 nylon soggiorno sutura punto nell&#39;aorta donatore e all&#39;angolo inferiore dell&#39;incisione nell&#39;aorta destinatario e cravatta. Posizionare un secondo 10-0 nylon opposto al primo nell&#39;aorta donatore e l&#39;angolo superiore dell&#39;incisione in aorta addominale e cravatta. </li><li> Effettuare una linea di sutura in esecuzione da superiore a inferiore nella parete laterale dell&#39;aorta e cravatta contro la permanenza del punto precedentemente posizionato. Assicuratevi di portare i intimas (superficie recipiente interno) insieme come si ricamate. Poi suturare lato mediale in modo consecutivo e cravatta. Il primo e ultimo punto su ogni lato deve essere collocato il più vicino possibile i punti di soggiorno possibile. Poi puntare ad avere 3 punti equidistanti tra questi due per un totale di 5 punti. </li><li> Effettuare la fine anastomosi lato dell&#39;arteria polmonare donatore al ricevente IVC nel modo seguente. Puncture la IVC con un ago G 30 ed estendere l&#39;incisione per ca. 2 mm con raffinati micro forbici. Questa incisione viene effettuata in linea retta lungo l&#39;asse longitudinale della nave. </li><li> Legare l&#39;arteria polmonare donatore verso l&#39;angolo inferiore della incisione nel IVC, con 10-0 nylon. Posizionare un secondo 10-0 nylon opposto al primo nell&#39;arteria donatore e l&#39;angolo superiore dell&#39;incisione nella IVC e cravatta. </li><li> Effettuare una linea di sutura che corre tra l&#39;arteria polmonare e l&#39;IVC e cravatta. Il primo e ultimo punto su ogni lato deve essere collocato il più vicino possibile i punti di soggiorno possibile. Poi puntare ad avere cinque punti equidistanti tra questi due per un totale di 7 punti. </li><li> Rilasciare il distale 4-0 cotone tie ripristina il flusso venoso. </li><li> Una volta che è stata osservata emostasi dell&#39;anastomosi venosa prossimale 4-0 cotone cravatta è gradualmente allentata e l&#39;anastomosi arteriosa osservata per emostasi. Quando entrambe le anastomosi sono considerati sicuri, rimuovere il cOtton lega dal mouse. </li><li> Ritorno l&#39;intestino all&#39;addome. La parete addominale è chiusa in due strati con sutura di seta 5-0 in un modo esecuzione. </li><li> Somministrare un bolo di 1,0 ml di sterile, caldo normale soluzione fisiologica nell&#39;addome come rianimazione fluido alla chiusura, e 0,8 ml di soluzione salina viene iniettata sottocute post-operatorio. Senza altre misure di supporto durante l&#39;intervento sono obbligatori. Recuperare l&#39;animale su una coperta di riscaldamento. Tempo totale dell&#39;impianto è di ca. 90-120 min per i principianti, 45-60 min con l&#39;esperienza. Amministrare buprenorfina analgesia, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml all&#39;inizio della procedura e ogni 6-12 ore per 72 ore post-op. </li></ol> 3. Valutazione Graft <ol><li> Valutare la funzione del trapianto quotidianamente dalla palpazione trans-addominale. </li><li> Tenere il mouse come se fosse da dare un&#39;iniezione intraperitoneale. </li><li> Premere delicatamente la punta di un dito contro la parete addominale e accertare la str pestaggiolength e la regolarità del trapianto. </li><li> Dare qualità palpazione un punteggio da 4 (ampiezza e frequenza normale) a 0 (non-pestaggio respinto innesto). </li></ol> NOTE IMPORTANTI: Tutti gli strumenti sono sterilizzati, guanti sterili sono indossati durante tutta la procedura e di un campo sterile viene mantenuta. Gli interventi chirurgici donatore e ricevente sono eseguite con l&#39;uso di un microscopio operatorio. Assicurarsi che le anastomosi sono &quot;puliti&quot;. Cioè, che le pareti posteriori non vengono catturati durante il posizionamento di punti. Ciò causerà un restringimento significativo flusso che sarà più che probabile risultato in un trapianto fallito e in casi estremi a posteriori paralisi degli arti. E &#39;anche estremamente importante che l&#39;intero spessore compreso passa avventizia vascolare e l&#39;intima dell&#39;ago di sutura vengono raggiunti. Evertion dei bordi assicura anche che non vi è intima-to-intima contatto, che aiuta nella tenuta e la guarigione delle anastomosi. Un altro fatto di vitale importanzao è garantire che la tensione delle linee di sutura anastomotica è anche ottimale. Troppo lenta e ci saranno perdite irreversibili, troppo stretto e stenosi di fluire si tradurrà. Se sul lato arterioso questo si tradurrà in scarsa perfusione dell&#39;innesto, se dal lato venoso comporterà un cuore congestionato.

<ol>
	<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343 (1973).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+experience+of+3,000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).</li><li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse.">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+suture+technique+in+a+mouse+heart+transplant+model.">Modified suture technique in a mouse heart transplant model.</a> Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).</li><li>Mao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+knotless+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice.">A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).</li><li>Csencsits, K. L., Bishop, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+alloreactive+CD4++and+CD8++T+cells:+there's+more+to+it+than+MHC+restriction.">Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there's more to it than MHC restriction.</a> Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).</li><li>Linfert, D., Chowdhry, T., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocytes+and+ischemia-reperfusion+injury.">Lymphocytes and ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Rev. 23 (1), (2009).</li><li>Grazia, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+cardiac+allograft+rejection+by+directly+cytotoxic+CD4+T+cells:+parallel+requirements+for+Fas+and+perforin.">Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin.</a> Transplantation. 89 (1), 33 (2010).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), (2007).</li><li>Plenter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questa tecnica chirurgica non è facile da padroneggiare, ma una volta imparato è un potente strumento di ricerca. Il ricercatore / chirurgo viene premiato dal coerenza della tecnica e attenzione al dettaglio. Pazienza durante la fase di apprendimento è fondamentale. Come pubblicato da Niimi 3, con l&#39;ausilio di uno strumento di apprendimento video basato ci vuole una media di 11 tentativi per ottenere la prima procedura di successo e 78 tentativi di raggiungere un tasso di successo del 90%. Video sono diventati un importante strumento didattico in chirurgia 11,12. Risoluzione dei problemi Sanguinamento dalle anastomosi può verificarsi, e questo è probabilmente dovuto a uno mancanza di una corretta tensione nelle suture, o troppo pochi punti di sutura. Mentre un agente che induce la coagulazione come Gelfoam può essere utile per ridurre le perdite, si raccomanda che il chirurgo deve fare affidamento su una buona tecnica. Congestionato cuore non battere è più comunemente causa di anastomosi che sono troppo stretti, in particolare sul lato venoso. Un non-beating, innesto non perfuso è generalmente causata da una bolla d&#39;aria che ha viaggiato in una delle arterie coronarie. È importante mantenere un campo umido a bagnato per evitare l&#39;ingresso di bolle nei vasi. Limitazioni della Tecnica Questa tecnica non è adatto se un ricercatore vuole studiare gli effetti su un cuore pienamente funzionante. Ciò richiederebbe una tecnica di trapianto ortotopico, che fino ad oggi si è dimostrato impossibile da eseguire. Significative in relazione a metodi esistenti Se si vuole studiare gli effetti su un completamente vascolarizzato, trapianto di organi solidi nel topo, allora il modello cuore è probabilmente il più semplice da padroneggiare. Esistono modelli murini di polmone, rene e trapianto di fegato, ma sono molto più difficili da imparare e perfetto. Fasi critiche all&#39;interno del protocollo E &#39;di vitale importanza che l&#39;intero spessore pculi compresi avventizia vascolare e l&#39;intima dell&#39;ago di sutura vengono raggiunti. Evertion dei bordi assicura anche che non vi è intima-to-intima contatto, che aiuta nella tenuta e la guarigione delle anastomosi. Un altro fattore estremamente importante è garantire che la tensione delle linee di sutura anastomotica è anche ottimale. Troppo lenta e ci saranno perdite irreversibili, troppo stretto e stenosi di fluire si tradurrà. Se sul lato arterioso questo si tradurrà in scarsa perfusione dell&#39;innesto, se dal lato venoso comporterà un cuore congestionato. Soprattutto, la ripetizione, la coerenza del procedimento e continua attenzione ai dettagli produrrà grandi risultati e dei dati finanziabili e pubblicabili.

In un&#39;epoca in cui è possibile effettuare rene, polmone, fegato e pancreas trapianti nei topi, la pietra angolare di trapianto di organi ricerca di base e immunologia dal 1973 1-4 rimane il cuore del modello di trapianto eterotopico nel topo. Negli anni successivi sono stati pubblicati diversi articoli dettagliare miglioramenti / 5,6 filtri per questa procedura. Come modello di trapianto di organo solido principalmente vascolarizzato questa procedura è secondo a nessuno. Una volta imparato questo procedimento si presta alla ricerca sulle reazioni di rigetto allogenico 7, lo sviluppo delle vasculopatie croniche 8 e meccanismi di danno da ischemia riperfusione 9. Le chiavi per imparare correttamente questa procedura sono proprio come qualsiasi altro intervento chirurgico, pazienza da parte dell&#39;istruttore e il tirocinante e attenzione al dettaglio. All&#39;inizio del processo, il nuovo chirurgo troverà che they spenderà molte ore per ogni trapianto. Come l&#39;esperienza è maturata, i tempi chirurgici, e quindi ischemia, si ridurrà drasticamente. Prestare attenzione ai dettagli di ogni passo prima o poi porterà al successo. Mentre l&#39;istruttore può fare del loro meglio per trasmettere, e per anticipare, tutte le possibili cadute fossa che si possono incontrare nel corso di questi interventi chirurgici, il tirocinante &quot;creativo&quot; probabilmente trovare alcuni di loro! Le basi della procedura sono i seguenti. Il donatore crescente arco aortico è end-to-side anastomosi all&#39;aorta addominale destinatario e l&#39;arteria polmonare donatore è end-to-side anastomosi al destinatario addominale vena cava inferiore (IVC). Il sangue scorre dall&#39;aorta destinatario in via retrograda attraverso l&#39;aorta donatore alle arterie coronarie. Una volta che il sangue è fluita attraverso il sistema coronarico drena nell&#39;atrio destro attraverso il seno coronarico, viene pompato nel ventricolo destro epoi attraverso l&#39;arteria polmonare nel ricevente IVC. In questo modo il sistema coronarico è fornito sangue arterioso e ritmo sinusale ritorna al trapianto in 1-2 minuti di riperfusione. Poiché le camere sinistro del cuore sono essenzialmente pressione sotto-caricato parete libera ventricolare sinistra si atrofizza nel tempo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:608px;" width="607">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:247px;">Instrument</td>
			<td style="width:109px;">Roboz #</td>
			<td style="width:147px;">Fine Science Tools #</td>
			<td style="width:105px;">Arosurgical #</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight micro-dissecting forcep #5</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved micro-dissecting forcep #7</td>
			<td>RS-5047</td>
			<td>11297-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved serrated forcep</td>
			<td>RS-5137</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas micro-dissecting scissors, short</td>
			<td>RS-5610</td>
			<td></td>
			<td>09.140.08</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long</td>
			<td></td>
			<td>11.602.11</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro spring handle needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>11.549.15</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight mosquito forcep</td>
			<td></td>
			<td>91308-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, blunt</td>
			<td>RS-5962</td>
			<td>14078-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, curved, blunt</td>
			<td>RS-5981</td>
			<td>14079-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro retractor</td>
			<td>RS-6540</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Instrument tray, 10&#8221; x 6 &#189;&#8221; x &#190;&#8221;</td>
			<td>RT-1350S</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Silk suture, 5/0, 22.5m spool</td>
			<td></td>
			<td>18020-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">10/0 nylon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>T4A10Q07</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">5/0 silk</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>E19A05N</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Gloves</td>
			<td></td>
			<td>Drapes</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Biogel from Medex Supply</td>
			<td></td>
			<td>Precept, #64-9012-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Syringes</td>
			<td></td>
			<td>Cotton applicators</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">B-D 1cc insulin, #329424</td>
			<td></td>
			<td colspan="2">Fisher-brand, #23-400-100</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-Iodine swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PDI, #B40600</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">4/0 Cotton ties</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Domestic cotton autoclaved with instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine heterotopic heart transplant technique

E &#39;ormai più di 40 anni da quando questa tecnica è stata riportata da Corry, Wynn e Russell. Anche se ci sono voluti alcuni anni per altri laboratori per diventare esperti in e utilizzano questa tecnica, è ora ampiamente utilizzato da molti laboratori di tutto il mondo. Una raffinatezza significativo alla tecnica originale è stato sviluppato e riportato nel 2001 da Niimi. Qui descritte sono le tecniche che si sono evoluti per oltre un decennio nelle mani di tre chirurghi (Plenter, Grazia, Pietra) nel nostro centro. Queste tecniche sono ora passati a una nuova generazione di chirurghi e ricercatori. In gran parte basato sull&#39;esperienza Niimi, le procedure utilizzate sono evoluti nei minimi dettagli - particolari che cercheremo di raccontare qui, in modo che altri possano essere in grado di utilizzare questo modello molto utile. Come Niimi, abbiamo scoperto che un aiuto di video apprendimento è una risorsa inestimabile per il principiante.

<html> L&#39;utilizzo di questa tecnica chirurgica apre la strada sia per studi di sopravvivenza dell&#39;innesto / rigetto semplici o protocolli sperimentali piuttosto complessi. Nello studio brevemente descritto in figura, si è cercato di definire il coinvolgimento eventuale di Fas e / o perforina come meccanismi di CD4 cellule T mediata rigetto cardiaco. Ciò è stato reso possibile dalla straordinaria varietà di ceppi di topi che sono oggi disponibili. I risultati dimostrano che il rifiuto diretto di allotrapianti cardiaci da parte delle cellule T effettrici CD4 richiede il contributo alternativo di innesto espressione Fas e di espressione perforina cellule T. A nostra conoscenza, questa è la prima dimostrazione che l&#39;attività citotossica da parte delle cellule T CD4 può svolgere un ruolo di obbligato principale per rigetto acuto in vivo. 1.jpg &quot;/&gt; . Figura 1 perforina e Fas Rappresenti Obbligatori e percorsi paralleli di CD4 T cellulo-mediata rigetto cardiaco B6, B6 PFPKO (perforina knock-out), e B6 GLD (carenti Fas-ligando) CD4 cellule T sono stati utilizzati per ricostituire B6 rag - / - destinatari di C3H tipo selvatico o C3H Fas-deficienti LPR alloinnesti cardiaci. La rimozione della sola Fas (♦, p = NS vs controllo Wt C3H + B6 cellule T CD4) dai cuori donatori o rimozione o solo perforina dalle cellule T CD4 (■, p = NS vs controllo Wt C3H + B6 CD4 T cellule) non abrogano rifiuto. È interessante notare che la rimozione di FasL da effettrici cellule T CD4 fatto rigetto ritardo significativo (●, p &lt;0,02 vs cellule Wt C3H B6 + CD4 T, p &lt;0,01 vs cellule Wt C3H + B6 PFPKO T CD4, e p &lt;0,01 vs . C3H lpr + B6 cellule T CD4). Tuttavia, la maggior parte dei documenti non autografo erano ancora respinte (4 su 5). Significativamente, la rimozione simultanea del donatore Fas e CD4 T perforina cellulerifiuto completamente abrogata (○, p &lt;0.002 vs controllo Wt C3H + B6 cellule T CD4, Wt C3H + B6 cellule PFPKO T CD4, e C3H lpr B6 cellule T CD4 +). Tale abrogazione è stata significativamente più robusto rispetto alla rimozione individuale di FasL cellule CD4 T (○, p &lt;0.003 vs controllo Wt C3H + B6 GLD cellule T CD4). Da Grazia et al 10. Ristampato con il permesso.

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Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Il manoscritto descrive i passaggi necessari per eseguire il trapianto di cuore eterotopico nel topo.

Murini eterotopica cuore Tecnica Trapianto

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

murine-heterotopic-heart-transplant-technique

Research

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16.8K Views.  University of Colorado Denver.  Il manoscritto descrive i passaggi necessari per eseguire il trapianto di cuore eterotopico nel topo. 

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A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

Un modificata eterotopica suina Hind Arto Trapianto Modello traslazionale vascolarizzato composito allotrapianto (VCA) La ricerca

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

Ricerca

Medicina

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Murino cervicale Cuore trapianto Modello utilizzando una tecnica Cuff Modificato

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents available. A difficulty is presented due to the small size of the animal and the considerable technical challenges of the microsurgery involved in heart transplantation. In particular, a high rate of technical failure early after transplantation may result from recipient death and post-operative complications such as hind limb paralysis or a non-beating heart. Here, the complete technique for heterotopic mouse heart transplantation is demonstrated, involving harvesting the donor heart and its subsequent implantation into a recipient mouse. The donor heart is harvested immediately following in situ perfusion with cold heparinized saline and transection of the ascending aorta and pulmonary artery. The recipient operation involves preparation of the abdominal aorta and inferior vena cava (IVC), followed by end-to-side anastomosis of the donor aorta with the recipient aorta using a single running 10-0 microsuture and a similar anastomosis of the donor pulmonary artery with the recipient IVC. Following the operation the animal is injected with 0.6 ml normal saline subcutaneously and allowed to recover on a 37&#160;&#176;C heating pad. The results from 227 mouse heart transplants are summarized with a success rate at 48 hr of 86.8%. Of the 13.2% failures within 48 hr, 5 (2.2%) experienced hind limb paralysis, 10 (4.4%) had a non-beating heart due to graft ischemic injury and/or thrombosis, while 15 (6.6%) died within 48 hr.

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

Un metodo modificato per eterotopica mouse Cuore Trapianto

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft involves anastomosis of donor inferior vena cava (IVC) to recipient IVC, and donor ascending aorta (Ao) to recipient abdominal Ao. The right upper and middle lung lobes are preserved and function as conduits for blood flow from right heart to left heart.
There are several advantages to using this technique, and it lends itself to a broad range of applications. Because the graft is transplanted in a configuration that allows for dyamic volume-loading, cardiac function may be directly assessed in vivo. The use of pressure-volume conductance catheters permits characterization of load-dependent and load-independent hemodynamic parameters. The graft may be converted to a loaded configuration by applying a clamp to the recipient&#8217;s infra-hepatic IVC. We describe modified surgical techniques for both donor and recipient operations, and an ideal myocardial protection strategy. Depending on the experimental aim, this model may be adapted for use in both acute and chronic studies of graft function, immunologic status, and variable ventricular loading conditions. The conducting airways to the transplanted lung are preserved, and allow for acute lung re-ventilation. This facilitates analysis of the effects of the mixed venous and arterial blood providing coronary perfusion to the graft.
A limitation of this model is its technical complexity. There is a significant learning curve for new operators, who should ideally be mentored in the technique. A surgical training background is advantageous for those wishing to apply this model. Despite its complexity, we aim to present the model in a clear and easily applicable format. Because of the physiologic similarity of this model to orthotopic transplantation, and its broad range of study applications, the effort invested in learning the technique is likely to be worthwhile.

We describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The transplant configuration results in a partially loaded graft circulation, allowing direct functional assessment. This model may be employed for acute or chronic studies of function and immunologic status of the transplanted graft.

Rat eterotopico addominale Cuore / Trapianti Single-polmone in una configurazione del volume-caricato

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

Rene Murine Tecnica trapianto

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Eterotopico cervicale trapianto cardiaco nei topi

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Vena interposizione Modello: un modello adatto per studiare Bypass Graft pervietà

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

Basato su palloncino ferita per indurre iperplasia Myointimal nell'Aorta addominale di Mouse

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone splenectomy regardless of precipitating causes are prone to develop an overwhelming post-splenectomy infection and experience increased risks of deep venous thrombosis and malignancies. Recently, epidemiological studies indicated that splenectomy might be associated with the occurrence of cardiovascular diseases, suggesting that physiological functions of the spleen have not yet been fully recognized. Here, we introduce a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, which not only can be utilized to study the function and behavioral activity of splenic immune cell subsets in different biologic processes, but also can be a powerful tool to test the therapeutic potential of spleen transplantation in certain diseases. The main surgical steps of this model include donor spleen harvest, the removal of recipient native spleen, and spleen graft revascularization. Using congenic mouse strains (e.g., mice with CD45.1/CD45.2 backgrounds), we observed that after syngeneic transplantation, both donor-derived splenic lymphocytes and myeloid cells migrated out of the graft as early as post-operative day 1, concomitant with the influx of multiple types of recipient cells, thus generating a unique chimera. &#160;Despite relatively challenging techniques, this procedure can be performed with &#62;90% success rate. This model allows tracking the fate, longevity, and function of splenocytes during steady state and in a disease setting following a spleen transplantation, thereby offering a great opportunity to discover the distinct role for spleen-derived immune cells in different disease processes.

This protocol details the surgical steps of a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, a technically challenging model that can serve as a powerful tool in studying the fate and longevity of spleen cells, the mechanisms of distinct spleen cell populations in disease progression, and transplant immunity.

Un modello murino del trapianto di milza eterotopica vascolarizzata per studiare la biologia delle cellule della milza e l'immunità ai trapianti

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

Modello di trapianto aortico cervicale murine utilizzando una tecnica di manette non sutura modificata

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...