Method Article
同所性小児脳腫瘍モデルの開発には、がん細胞を正確に移植するための定位固定装置を使用するという、細心の注意を払った精度が必要です。ここで紹介する方法論は、脳腫瘍細胞の調製、頭蓋内注射の実施、および脳腫瘍の生着を評価するための術後モニタリングシステムの実装に関連するステップを概説しています。
中枢神経系(CNS)腫瘍の臨床的に関連性があり信頼性の高いモデルの開発は、神経腫瘍学の分野を前進させる上で極めて重要です。最も広く使用されている技術の1つは、同所性頭蓋内注射であり、制御された環境内で腫瘍の成長、浸潤、および播種を調査できる方法です。この技術では、特定の患者領域から腫瘍細胞を動物の対応する解剖学的部位に移植します。これにより、これらの同所性脳腫瘍モデルは、がんの生物学的挙動とヒト患者に見られる脳環境との相互作用をより正確に再現するため、独自の利点を提供します。そのため、臨床シナリオとの類似性が潜在的な治療法の評価に不可欠である前臨床治療試験に特に価値があります。このプロトコルは、びまん性正中神経膠腫 (DMG)、神経膠芽腫 (GBM)、髄芽腫、上衣腫などの小児脳腫瘍の患者由来異種移植片 (PDX) モデルの開発経験を共有しています。この方法は、マウスで頭蓋内定位固定装置注射を行う手順を説明し、脳内の注射部位の正しい標的化を確保します。さらに、腫瘍の生着が成功した兆候を検出するために採用された処置後モニタリングシステムについても説明します。腫瘍注射後、腫瘍進行の一般的な指標である神経障害、行動の変化、および/または体重減少の兆候がないか動物を観察するために、厳格なモニタリングシステムが実施されます。このシステムは、タイムリーな介入を可能にし、腫瘍の成長ダイナミクスに関する重要なデータを提供します。これらのモデルとプロトコルを改良することにより、前臨床試験の信頼性とトランスレーショナルポテンシャルを高め、小児CNS腫瘍のより効果的な治療法の開発に貢献することを目指しています。
小児中枢神経系(CNS)腫瘍は、小児に多くみられる固形腫瘍であり、小児原発腫瘍の約20%-25%を占め、治療に対する発生率および反応の点で成人腫瘍とは異なる特徴を有する1,2。膠芽腫(GBM)やびまん性内因性橋グリオーマ/びまん性正中神経膠腫(DIPG/DMG)などの高悪性度グリオーマ(HGG)は特に侵攻性が高く、予後が不良であり、治療法の進歩にもかかわらず、生存率は低いままです3,4,5。小児CNS腫瘍の約20%を占める髄芽腫は、標準治療で高い5年生存率を達成しているが、特定のサブタイプは、特に再発シナリオで課題を提起している6,7。上衣腫は、小児中枢神経系腫瘍の約10%を占め、分子特性および腫瘍の位置によってさまざまな予後を示し、再発は重大な臨床的課題をもたらす8,9。分子ランドスケープを理解し、同所性脳腫瘍(BT)モデルを開発することで、小児患者の転帰を改善する効果的な治療法の開発が期待できます。
臨床的に関連性のあるBTモデルの開発は、神経腫瘍学の研究と治療法の発見を進めるために不可欠です。定位固定装置を用いた同所性注射は、脳内の腫瘍細胞の正確な配置を可能にし、脳腫瘍の自然環境を密接に模倣するため、このアプローチにおいて極めて重要である10。この方法は、腫瘍モデルの信頼性と再現性を向上させ、腫瘍の生物学と浸潤や血管新生などの主要な特性のより正確な研究、および治療的介入の評価を容易にします11。細胞注入の正確な位置と深さを制御する定位固定装置の能力により、腫瘍細胞が意図した脳領域に一貫して配置されることが保証され、それによって実験結果の有効性が向上する10。皮下モデルは、治療薬の初期スクリーニングにおいて、よりアクセスしやすく、費用対効果の高い選択肢を提供します。これらのモデルでは、腫瘍細胞が皮下に埋め込まれるため、腫瘍の増殖と治療反応を容易にモニタリングできる12。彼らは脳の複雑な微小環境を再現する能力を欠いていますが、皮下モデルは、ハイスループットの薬物スクリーニングと予備的な有効性評価12,13にとって非常に価値があります。
複数の研究により、剖検または生検サンプルからの直接組織移植および原発性脳腫瘍培養を含む、脳腫瘍サンプルからの同所性患者由来異種移植モデル(PDX)の開発が成功したことが実証されています11,14,15。ただし、腫瘍解離組織または腫瘍細胞の頭蓋内注射は必ずしも生着を保証するとは限らず、失敗の理由は完全には理解されていないことを認識することが重要です15。興味深いことに、HGG生検サンプルは、他の脳腫瘍サブタイプと比較して高い成功率を示す傾向があります。例えば、HeらはHGG同所性モデルで56%の成功率を示しましたが、Brabetzらの研究では、上衣腫や髄芽腫などの他の小児脳腫瘍サンプルでは、生着率がそれぞれ43%と30%と低いと報告されています11,14,16。特に、脳腫瘍のPDXモデルは、1カ月から11カ月までの幅広い潜伏期間を示し、その後の生着では前臨床の有用性が低下します。分子レベルで疾患を再現する能力があるにもかかわらず、生検と確立されたモデルとの間にはゲノムの差異が認められている14,16。
PDXモデルは、小児BTに対する新しい治療戦略を探求する上で不可欠なツールとして機能します。これらのモデルは、血液脳関門(BBB)の存在による腫瘍の成長、症状、薬物動態の観点からヒトの疾患を忠実に再現するため、薬効研究を実施するためのゴールドスタンダードと考えられています。研究は、小児脳幹神経膠腫の分野で、維持されたBBBの完全性と薬物浸透の欠如が、これらの腫瘍の治療効果の低下につながる特徴であることを示しました17,18,19。しかし、有効性は、エピジェネティックおよび代謝阻害剤17,20のような適切な薬物浸透を示す選択された治療において観察することができる。
この研究は、免疫不全動物の脳腫瘍細胞の頭蓋内注射を行う方法を提示し、PDX開発のための生着の評価および/または治療薬の有効性の評価を目的としています。倫理的な実験エンドポイントに到達するまで腫瘍の進行を監視するための包括的なツールも提供されています。
以下に概説するプロトコルは、ニューサウスウェールズ大学によって概説された動物の世話と使用に関する倫理ガイドラインに従っており、すべての手順は施設の動物管理および使用委員会によって承認されています。動物福祉が優先され、頭蓋内注射手順で使用される動物の苦痛を最小限に抑えるためにあらゆる努力が払われました。
1. ニューロスフェア形成脳腫瘍培養の拡大に向けた培養
注:特定の要件は、使用する脳の培養によって異なる場合があります。次の手順では、ニューロスフェアとしての初代脳腫瘍細胞の一般的な培養プロトコルの概要を示します。脳腫瘍培養物は、商業業者から入手することも、患者の脳腫瘍生検または剖検から初代培養物として確立することもできます。患者の生検または剖検サンプルから初代培養を確立する手順は、公開された文献15,21に概説されています。
2. 頭蓋内注射用脳腫瘍細胞の作製
注:以下のプロトコルは、頭蓋内注射のための確立されたまたは短期の培養物からの培養細胞の調製を概説しているが、それはまた、ヒト脳腫瘍22,23からの新たに解離した組織を含む他の細胞型にも適応することができる。
3. 脳定位固定装置および麻酔器具のセットアップ
注意: 以下にリストされている手順は、脳定位固定装置の製造元と推奨される麻酔の種類によって若干異なる場合があります。
4.頭蓋内注射
注:頭蓋内注射は、雄と雌の両方のマウスで行うことができますが、雄の攻撃性によって引き起こされる創傷合併症を起こしにくいため、一般的に雌マウスが好まれます。この手順は通常、7〜10週齢のマウスで行われ、腫瘍の発生に十分な時間を確保します。通常、動物はケージごとに4〜6頭のグループにランダム化されます。BALB/c Nude、NOD-SCID、NSGなどの免疫不全株は、その免疫不全状態が腫瘍の生着と成長をサポートするため、患者由来異種移植片(PDX)の開発に一般的に使用されています24。このプロトコルは、麻酔導入のためのイソフルランの使用を指定していますが、ケタミンやキシラジンなどの代替麻酔薬も使用できます25。イソフルランを使用しない場合、麻酔室および関連機器を含む手順は手順から省略できます。
5. 生着のための術後モニタリング
6.脳の収穫
脳腫瘍モデルの開発には、脳定位固定装置を用いた同所性注射が不可欠となっています。この技術により、腫瘍細胞の正確で再現性のある配置が可能になり、神経腫瘍学の研究で一貫性のある信頼性の高いデータを生成するために重要です。同所性注射の成功は、定位固定装置フレーム、正確な動きのためのデジタルマイクロマニピュレーター、注射器、動物を固定するための麻酔システムなど、定位固定装置の正確なセットアップに大きく依存しています(図1A、B)。ガラス製マイクロシリンジを使用すると、通常2〜5μLの少量の頭蓋内注射が可能になります。適切なメンテナンスと頻繁な洗浄は、注射をブロックする可能性のある生物学的材料の蓄積を防ぐために不可欠です(図1C)。
マウスの定位固定装置を使用した脳腫瘍細胞の頭蓋内注射の手順には、いくつかの重要なステップが含まれます。まず、マウスは、手順全体を通して静止して快適に保つために麻酔をかけられます。動物が麻酔をかけられていることを示す典型的な手がかりには、つま先をつまむときの動きや反射の欠如、および規則的な呼吸パターンの存在が含まれます。次に、マウスを脳定位固定装置フレームに配置し、頭を固定位置に固定します(図2A)。ブレグマやラムダなどの頭蓋骨のランドマークを使用して、注射の正確な座標が決定されます。頭皮に小さな切開を行い、選択した座標で頭蓋骨にバリ穴を開けます(図2B)。定位固定装置アームに取り付けられたマイクロインジェクション針をバリ穴に挿入して、腫瘍細胞を目的の脳領域(皮質、小脳、または脳幹; 図2C)。針の位置を注意深く監視および調整することで、正確なターゲティングが保証されます。注射後、針をゆっくりと引き抜き、切開部を閉じます(図2D)。密封された創傷は、頭蓋内注射後2週間以内に治癒する見込みです。
頭蓋内注射後、動物は全体的な健康状態と神経学的症状の発症を注意深く監視する必要があり、これはしばしば腫瘍の進行を示します(補足表1)。通常、動物は注射後1週間目にわずかな体重減少(最大体重の最大10%)を経験することがあり、通常、注射部位が2週 目の終わりまでに完全に密閉されると安定します。一般に、動物は着実に体重が増加し、腫瘍の進行が起こるまで全身の健康状態を良好に保ちます。神経症状の発現は、脳腫瘍の種類、注射部位、動物系統などの要因によって異なります。例えば、皮質神経膠腫や上衣腫は進行性の体重減少や前脳肥大の可能性を呈することがありますが、脳幹神経膠腫や髄芽腫は、特に免疫不全の動物では運動失調や頭の傾きなどの症状を示すことがあります(図3A)。さらに、脳幹腫瘍を有する動物、特にNSGまたはNOD/SCID株において、旋回行動が観察されることがある。神経学的症状の進行は、多くの場合、段階的な体重減少と一致します。長いノズル付きのウォーターボトルを提供したり、柔らかい食べ物(どろどろした食品ペレット)や種子を提供したりするなど、適切なケア後の対策は、動物の健康をサポートするために不可欠です。実験エンドポイントに到達し、その後の動物の人道的な安楽死に到達すると、注射部位の肥大や出血領域の存在など、脳の潜在的な変化が明らかになる可能性があります(図3B)。
Kaplan-Meierグラフは、脳腫瘍動物モデルの生存結果を表現するために一般的に使用されます。これらは、頭蓋内注射または抗がん治療後の経時的な生存確率を視覚的に描写しています。これらのグラフは、前臨床研究の現場で生存データを分析および提示するための重要なツールとして機能します15,27。髄芽腫細胞培養D425の頭蓋内注射を小脳のさまざまな細胞密度で行いました。頭蓋内注射されたすべての動物は腫瘍を発症しました。その結果、細胞密度が高いほど、特にマウスあたり50,000個および100,000個の細胞が、マウスあたり10,000個の細胞よりも急速に生着することが示されました(図4)。さらに、患者由来の高悪性度神経膠腫(HGG)細胞を皮質と脳幹に頭蓋内注射し、これらの異なる部位での全生存期間と腫瘍増殖パターン、免疫組織化学的特徴を比較しました。場所に関係なく、すべての動物に頭蓋内に発生した腫瘍を注射しました。HGG細胞の培養は、ステップ1.1〜1.10で詳述したプロトコルに従って行った。頭蓋内注射のための細胞の調製は、ステップ2.1〜2.6に記載したように行ったが、頭蓋内注射手順は、ステップ4.1〜4.16で概説した方法に固執した27。皮質に注射すると、HGG細胞は頭蓋内注射後約25日間の生存期間の中央値を示しました(図5A)。動物は、ステップ5.1から5.4で概説されているようにモニターした。これらの動物は神経学的症状を示さなかったが、進行性の体重減少を示した。動物は、ステップ5.5で概説した人道的なエンドポイントに到達したときに人道的に安楽死させられました。脳は、ステップ6.1から6.5で詳述されたプロトコルに従って採取され、さらなる分析27のために送られた。免疫組織化学的分析により、血管新生の増加(図5B)および多数の増殖性Ki67細胞(図5C)の証拠を伴う、大きくて高度に核化された腫瘍塊が明らかになりました。脳幹に注射すると、HGG細胞は頭蓋内注射後約26日間の生存期間の中央値を示しました(図5D)。免疫組織化学的分析では、第4脳室/上部橋領域に大きな腫瘍塊があり、側脳室への軟髄膜浸潤が示されました(図5E)。さらなる免疫組織化学的分析により、脳幹およびその他の浸潤領域に多くの増殖性細胞が示されました(図5F)。この実験は、同じ腫瘍細胞を異なる解剖学的位置に注入しても腫瘍の増殖速度に影響を与えないことを強調していますが、成長パターンにはいくつかの違いが観察されます。
図1:脳腫瘍細胞の頭蓋内注射のための定位固定装置の代表的な画像 (A)麻酔装置は通常、BSCフードの隣に配置されるため、誘導室と定位固定装置の両方に麻酔を二重に投与する必要があります。(B)ガラス製マイクロシリンジ洗浄ステーションと定位固定装置ホルダー。シリンジは、各頭蓋内注射後に生理食塩水、エタノール、続いて水で洗い流す必要があります。.(C)BSCフード内の定位固定装置、麻酔室、ボール盤、定位固定装置、定位固定装置、固定装置、綿チップ、メス、ピンセット、ピペット、チップを示しています。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:免疫不全マウスに対して頭蓋内注射を行っている代表的な画像(A)麻酔円錐体に配置された麻酔動物。(B)皮膚を切開した後、耳のバーで両側に皮膚を固定します。(C)注射用のドリル穴の上に配置されたガラスマイクロシリンジ。(D)皮膚は接着するとモヒカンスタイルを形成します。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:脳腫瘍細胞の生着後に観察された潜在的な神経学的症状(A)脳幹にDMG細胞を頭蓋内注射した後に頭部が傾いた動物。(B)注射側が腫瘍形成を明らかにする右皮質半球の拡大。動物に上衣腫細胞を注射した。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:異なる細胞密度での髄芽腫培養D425の生着。 髄芽腫細胞を、2 μL の ECM ハイドロゲル、50,000 細胞、および 100,000 細胞に 10,000 細胞の密度で定位固定装置を使用して頭蓋内注射しました。動物は漸進的な体重減少について監視され、記録された最高体重を20%下回ると人道的に安楽死させられました。10,000個の細胞を注入した動物の生存期間の中央値は29日でしたが、細胞密度が50,000個と100,000個の細胞を注入した動物の生存期間の中央値は、それぞれ17.5日と15日でした。この研究で注射されたすべての動物は、腫瘍を成功裏に発症しました。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図5:皮質および脳幹にHGG細胞を頭蓋内注射したNSG動物の代表的な生存曲線および組織学的解析。 約100,000個のHGG細胞(継代3)を2μLのECMハイドロゲルに脳定位固定装置を用いて注入しました。動物は漸進的な体重減少のために監視され、記録された最高体重を20%下回ると人道的に安楽死させられました。この脳腫瘍亜型では神経学的症状は観察されなかった。(A)HGG細胞を皮質に注入した動物の生存期間の中央値は、注射後約25日(N=2)です。(B)皮質のH&E染色は、血管新生の増加を伴う高度に核化された領域を示しており、これは赤血球の存在によって示される。(C)皮質の腫瘍生着領域は、KI67染色で示されるように、高レベルの増殖性細胞を示します。(D)HGG細胞を脳幹に注入した動物の生存期間の中央値は、注射後約26日(N = 2)です。この研究で注射されたすべての動物は、腫瘍を成功裏に発症しました。(E)脳幹のH&E染色は、側脳室の軟髄膜に腫瘍浸潤が観察される高度に核化された領域を示している。(F)脳幹の腫瘍生着領域は、KI67染色で示されるように、高レベルの増殖性細胞を示します。メイン画像の黒いスケールバーは2mmを示し、拡大挿入された画像は20μmを示しています 。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
補足表1: 動物の頭蓋内注射および抗がん剤による治療の可能性の検査に使用されるモニタリングフォーム。 この表をダウンロードするには、ここをクリックしてください。
この研究で詳述されている頭蓋内注射技術は、小児脳腫瘍の同所性患者由来異種移植片(PDX)モデルを確立するための堅牢な方法を提供しますが、いくつかの領域を改善する必要があります。この技術を改善するための1つのアプローチには、腫瘍細胞の調製プロセスを最適化することが含まれます。これには、腫瘍細胞の移植に使用される材料の精製が含まれます。ECMハイドロゲルはゴールドスタンダードと考えられていますが、脳や腫瘍のECMにより類似した成分で構成されたハイドロゲルを利用すると、BT細胞の生存と生着が向上する可能性があります。このアプローチは、髄芽腫や上衣腫など、生着期間が長い腫瘍タイプに特に有益です。例えば、コラーゲンはグループ3の髄芽腫の成長に重要な役割を果たすことが示されていますが、ラミニンはSHH型の髄芽腫28をサポートします。さらに、ECMの硬さも腫瘍の成長に影響を与える可能性があります。例えば、高悪性度膠芽腫は、正常な脳組織と比較してその中心部の硬直性が高く、これが腫瘍の成長と生存を支えている可能性がある29。ECMの組成と剛性をさまざまな腫瘍タイプの特定の要件に合わせて調整することで、PDXモデルの生着と成長を大幅に改善できる可能性があります。
最近のいくつかの研究は、患者の腫瘍サンプルの取り扱いとPDXモデルの開発に関する貴重な洞察を提供しました。Tsuliらは、DMG組織を直接移植すると、通常、初代培養よりも生着率が高くなることを強調しました15。Smith らは、脳腫瘍生検または剖検サンプルの頭蓋内注射を通じて 37 の PDX モデルを確立し、全体の成功率は 43% であると報告し、HGG が最も高い生着率 (100%) を示し、次いで髄芽腫 (45%) と上衣腫 (25%) を示しました。腫瘍の潜伏期間は1か月から11か月まで大きく異なり、より攻撃的な腫瘍はより迅速に生着します11。対照的に、Brabetzらは、HGGが31%の生着率を示し、髄芽腫(37%)および上衣腫(17%)のより低い全成功率を報告しました16。これらの違いにもかかわらず、SmithらおよびBrabetzらによって実施された最後の2つの研究では、PDXモデルが一般に免疫組織化学的および分子レベルで患者の腫瘍を再現することが確認されましたが、元の腫瘍サンプルと確立されたモデルとの間にはわずかなゲノムの不一致が観察されました。これらの知見は、代表的なPDXモデルの開発における課題を強調し、腫瘍タイプ間での生着成功のばらつきを強調しています11,16。
同所性アプローチの大きな制限の1つは、腫瘍細胞がルシフェラーゼまたは磁気共鳴画像法(MRI)でタグ付けされている場合、Xenogen Imagingなどの画像システムを使用しない限り、腫瘍サイズを正確に測定できないことです。腫瘍細胞をルシフェラーゼで標識すると、生着を確認し、腫瘍の進行を非侵襲的に監視するための生物発光イメージングが可能になり、解決策が得られる可能性があります。この方法は、治療に対する反応を動的に追跡する能力を強化し、それにより治療効果のより正確な評価を提供するであろう17,30。別の方法には、MRI技術の利用が含まれます。ただし、腫瘍の検出可能性は、腫瘍のサイズに依存します。より大きな腫瘍はより容易に同定され、これはしばしば実験エンドポイントにあり、検出は腫瘍のサブタイプによっても異なる場合があり、GBMはびまん性神経膠腫よりも検出が容易である27,31。特にびまん性神経膠腫の場合、無傷の血液脳関門(BBB)の存在は、造影剤の増強の欠如につながります。しかし、GBMでは、漏出性のある血管系と浮腫の存在により、腫瘍組織と周囲の健康な脳組織との間のコントラストが増幅され、検出プロセスに役立つ可能性があります。一般に、検出を改善するためには、造影剤が必要である30、31、32。拡散強調イメージング(DWI)や流体減衰反転回復(FLAIR)などの代替イメージング技術は、非増強腫瘍領域の検出を改善するために時々使用されます。しかし、これらの方法にも限界があり、腫瘍の境界33の正確な描写を常に提供するとは限らない。Amide Proton Transfer-weighted(APTw)イメージングは、タンパク質と水のプロトン交換を追跡することによりびまん性神経膠腫を検出し、腫瘍の等級付けを支援する非侵襲的MRI技術です。有望ではあるが、人工物に対する感受性などの課題に直面しており、小動物のイメージングにはまだ適応されておらず、その広範な応用は限られている34。
また、薬効研究に同所性BT PDXモデルを利用する際に考慮すべきもう一つの重要な側面は、使用するPDXモデルのBBBの完全性です。BBBの透過性は、脳腫瘍治療における薬物送達と有効性に大きく影響します。例えば、脳幹神経膠腫におけるBBBの完全性の維持は、しばしば薬物の浸透不良をもたらし、全身療法の有効性を制限する17。一方、グループ3の髄芽腫では、MRI画像でBBBの完全性が不均一であることが観察されており、患者由来異種移植片(PDX)モデルでも同様に漏れていることがわかった35。したがって、各PDXモデルにおけるBBBステータス(無傷か漏れているか)を特徴づけることは、適切な治療戦略を設計し、薬効試験の結果を正確に解釈するために不可欠です。
全体として、概説された頭蓋内注射手順は、BT PDXモデルを確立し、治療薬の有効性研究を実施するための堅牢なアプローチを提供します。これらのモデルの包括的な理解と相まって、継続的な改良により、その有用性が増大し、小児BT患者に対する治療介入の開発が促進されます。
著者は何も開示していません。
著者らは、この方法論を確立するための必須サンプルを惜しみなく提供してくれたSydney Children's Hospital Network、Sydney Children's Tumour Bank Network、およびZero Childhood Cancer Programの患者、臨床医、研究者に感謝します。Children's Cancer Institute Australiaは、ニューサウスウェールズ大学シドニー校およびSydney Children's Hospital Networkと提携しています。このプロトコルは、National Health and Medical Research Council(Synergy Grant #2019056、Leadership Grant APP2017898 to DZ)およびCancer Institute New South Wales Program Grant(TPG2037 DZおよびMT)からの助成金によって支援された研究努力、およびLevi's Project、The Kids Cancer Project、The Cure Starts Now、DIPG Collaborative、 キュア脳腫瘍財団、ロバート・コナー・ドーズ財団、ベニー・ウィルズ財団。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Anaesthetic agent (e.g. Isoflurane) | Merck | 792632 | |
100% Ethanol | Merck | 459844 | |
70% ethanol | NA | NA | Make 70% ethanol from 100% ethanol diluting it with sterile water |
80% ethanol | NA | NA | Make 80% ethanol from 100% ethanol diluting it with sterile water |
Adhesive microscope slides | Merck | Z681156 | |
Analgesic (Buprenorphine 0.3mg/mL) | Jurox | NA | |
Carbon filter canister | Vet Equip | 931401 | |
Conical tubes 15 mL (Falcon) | Fisher Scientific | 14-959-53A | |
Conical tubes 50 mL (Falcon) | Fisher Scientific | 14-432-22 | |
DMSO | Merck | 472301 | |
Ear bars | Kopf | 1921 | |
ECM hydrogel (Matrigel, Corning) | Merck | E1270 | |
Eye Ointment (Poly Visc) | ChemistDirect | 719986 | |
Fetal Calf Serum | Merck | F0926 | |
glass microsyringe | Hamilton | 7002 | |
Isopropanol wipes | Medisa | SUL_LWMS-1 | |
KI67 antibody | Abcam | ab209897 | |
Microcentrifuge tubes | Eppendorf | 211-2130 | |
Microdrill bit 0.028” | Kopf | 8170 | |
Microinjection unit | Kopf | 5004 | |
PBS | Merck | P4474 | |
Pipette 10mL | Corning | CLS4488 | |
Pipette 1mL | Eppendorf | 3123000063 | |
Pipette 200uL | Eppendorf | 3123000055 | |
Pipette 20uL | Eppendorf | 3123000098 | |
Pipette 25mL | Corning | CLS4489 | |
Pipette tip 1mL | Corning | CLS4868 | |
Pipette tip 200uL | Corning | CLS4860 | |
Polysorbate 20 detergent (F10SC) | Health and Hygiene | G3070 | |
Pulse oximeter (MouseSTAT) | Kent Scientific | SPO2-MSE | |
Riodine (Povidone-Iodine) | Merck | Y0000466 | |
Scalpel (disposable) | Medisa | SUL_SCALPEL | |
Skin Glue Vetbond | Medisa | 3M_1469SB | |
Small Animal stereotactic instrument with digital display console | Kopf | 940 | |
Stereotactic Drill | Kopf | 1474 | |
Temperature monitoring system | Harvard Apparatus | 55-7020 | |
Trypan Blue | Merck | 93595 |
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