ソース: トーマス・チャフィー1, トーマス・S・グリフィス2,3,4,キャサリン・L・シュヴェルトフェガー1,3,4
1ミネソタ大学ミネソタ大学研究室医学病理学科,ミネアポリス,MN 55455
2ミネソタ大学泌尿器科,ミネアポリス,MN 55455
3ミネソタ大学、ミネアポリス、MN 55455
4ミネソタ大学免疫学センター,ミネアポリス,MN 55455
組織切片の病理学的解析は、正常な組織構造のより良い理解を得るために使用することができ、疾患のメカニズムの理解に貢献することができます。組織生検は、患者または生体内モデルの実験から、ホルマリンまたはパラホルムアルデヒドで固定し、パラフィンワックスに埋め込むことによって保存されることが多い。これは長期貯蔵およびティッシュが切除されることを可能にする。組織はマイクロトームを使用して薄い(5 μm)セクションに切断され、セクションはガラススライドに付着している。組織セクションは抗体で染色することができ、組織セクション内の特定のタンパク質の検出を可能にします。蛍光色素(フルオロクロムとも呼ばれる)に結合した抗体を用いた染色は、レーザーによって励起されたときに特定の波長で発光する化合物であり、免疫蛍光として知られている。セクション内のタンパク質を検出する機能は、組織内の細胞型の不均一性、特定のシグナル伝達経路の活性化、バイオマーカーの発現などの情報を提供できます。使用される蛍煙素や分析に利用できる顕微鏡の種類に応じて、複数の色を使用することができ、ターゲットの多重分析が可能です。
以下のプロトコルは、パラフィン埋め込組織セクションの免疫蛍光染色に関与する基本的なステップを概説する。このプロトコルは、組織の固定、パラフィン埋め込みのプロセス、または組織の断面に関する詳細を含まないことに注意することが重要です。組織が切り分けされ、ガラススライド上に置かれると、それらは一連の等級のエタノール(EtOH)インキュベーションを通して再水和される。セクションは、組織セクションへの抗体の非特異的結合を減少させるためにブロッキング試薬でインキュベートされる。その後、セクションは、蛍舞体で直接標識されてもよいし、そうでないかもしれない一次抗体でインキュベートされる。一次抗体が直接標識されていない場合、セクションは、フッ素で標識された二次抗体でインキュベートされます。異なる抗体は、異なる染色条件を必要とし、したがって、抗体の最適化のための提案が含まれる。すべての結合されていない抗体を除去するために洗浄した後、スライドは、核を蛍光標識するためにDAPIを含む媒体で取り付けられる。取り付け媒体が乾燥したら、異なる蛍光色素を検出できるレーザーを使用してスライドを画像化できます。
1. セットアップ
2. プロトコル
3. データ分析と結果
図1:乳腫瘍部のF4/80染色。固定後、マウス乳腺腫瘍を抗F4/80で切り分けて染色し、DAPI含有マウントメディアを用いて取り付けた。染色は、細胞表面F4/80染色によって赤色で示される。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
画像化から得られたデータは、組織セクション内のタンパク質の発現の強度および局在化に関する情報を提供する。調べられているタンパク質に応じて、これらのデータは、組織セクション内の特定の細胞集団の頻度に関する情報を提供することもできます。これは、正に染色された細胞の数をカウントし、総細胞集団と比較することによって定量することができます。
免疫蛍光は、組織セクションのコンテキスト内でタンパク質発現および局在化の調査を可能にする。この技術は、正常および疾患組織におけるタンパク質局在化または細胞数を調べることによって、組織が疾患の文脈でどのように変化するかを理解するために使用することができる。ローカリゼーションまたは式パターンの変更は、サンプルの特定の属性を決定してリンクできます。
スキップ先...
このコレクションのビデオ:
Now Playing
Immunology
53.6K 閲覧数
Immunology
92.6K 閲覧数
Immunology
22.7K 閲覧数
Immunology
237.0K 閲覧数
Immunology
28.3K 閲覧数
Immunology
78.5K 閲覧数
Immunology
43.4K 閲覧数
Immunology
43.0K 閲覧数
Immunology
87.4K 閲覧数
Immunology
24.1K 閲覧数
Immunology
22.2K 閲覧数
Immunology
151.4K 閲覧数
Copyright © 2023 MyJoVE Corporation. All rights reserved