プロバイオティクス研究は、ガバジを用いた新生児マウスにおいて。はじめに, このビデオプロトコルは、新生児マウスにプロバイオティクスをギャジングするためのセットアップと手順を詳述します, その人生の日 2.腸管の滅菌コレクションは、腸内微生物叢分析のために、このプロトコルにも詳述されている。
いくつかの代表的な結果は、このプロトコルにも含まれ、データの種類の一部を導入し、この手順に従って導出することができる。新生児マウスの食道内のガビンジ、生後2日目。ダムのケージを、実験用ケージが加熱パッドに置かれているのと同じフードに置き、加熱パッドは約38°Cの中程度レベルに設定されます。
ホームケージからいくつかの土壌の巣を取り除き、手袋に入れ子材料の香りを転送するために手袋をはめた手で巣をこすります。これは、取り扱われるとき、子犬に、外国の香りの転送を減少させます。これは順番に外国の香りによるダムによる放棄またはカニバリゼーションのリスクを減らす。
子犬が家庭のケージに戻ったとき、手順の後。円錐形の保持巣を作成し、事前に温められている新しい無菌実験ケージに入れます。家庭のケージから実験ケージにすべての子犬を転送します。
実験ケージの円錐形の巣に子犬を移動します。ダムのケージを取り外し、ギャジングエリアから離れて置きます。これは、ダムが子犬を聞くのを防ぐことによって、ダムのためのストレスの多い条件を軽減し、手順を行います。
シリンジのパッケージを開けて簡単にアクセスできます。無菌の方法で、オートクレーブガベージの供給針を取り出し、注射器の頭に取り付けます。針は、70%エタノール、水、オートクレーブの前に洗浄されます。
異なる一組の送り針は、治療群と対照群の間で使用され、交差汚染を避ける。プロバイオティクス色素溶液を注射器に引き出し、フィンガを取り除くために指で反転してフリックし、シリンジ内のボリュームの空きスペースを取り除きます。液体を取り除くためにプランジャーに引き戻し、針のデッドスペースから、そしてプランジャーを押し落とし、空気と気泡を排出するために、これは気泡が動物に浸食されていないことを保証することが重要です。
シリンジの所望の容積を調節し、2匹のマウスの生命の日のために、30マイクロリットル以下を通して飼育されるべきである。針に見える黒いマーキングは、針をマウスに挿入できることを示す最大長を示します。この長さは、外部的に測定することによって、スナッとxiphoidプロセス間の長さを得る。
注射器を滅菌表面に下ろし、実験ケージから飼育する子犬を取り除き、健康徴候を観察する。これらの健康徴候には、皮膚の規則的な呼吸およびピンク色が含まれる。子犬を無菌の観察者シートの上に、加熱パッドの上に置きます。
送り針の外部表面を潤滑し、プロバイオティクスを溶解するために使用される溶媒を使用する。ここでデキストロース水は、この施設は、動物の食道に、針の円滑な侵入である。親指と人差し指を使って、首の皮膚で子犬をしゃがみます。
針を挿入できる位置で、優勢な手の注射器をつかみ、指を調整せずにプランジャーを押し下げます。口の奥に届くまで、給餌針の球根を45度の角度で挿入します。針の球根を所定の位置に保持しながら、針を離れて針で手を回すと、針が胴体で平らになると、それはスライドし始めます。
動きを刺激するために、注射器に余分な圧力が加えないようにしてください。嚥下のプロセスは遅くなり、忍耐が鍵となります。子犬が年を取るにつれて針の嚥下は、より速く、より簡単になります。
送り針は、電球が胃に入るのを防ぐために、事前にマークされています。マーキングがスナッスに近づくと、針の動きを阻止し、プロバイオティクス溶液をゆっくりと提供します。配達が完了したら、針をゆっくりと取り外します。
加熱パッドの上にマウスを置き、回復のために観察します。あえぎ反射が解決し、心拍数が上昇し、健康的なピンク色が再び現れ、45秒後に未解決のあえぎ反射が起きると、ガバジが失敗し、マウスが安楽死させなければならない。ガバジ染料は淡い皮膚を通して見える必要があり、染料はミルクスポットが通常見つかる領域でのみ見えるはずです。
胃への染料への閉じ込めは、成功した歩行を示す。色素が胸腔、または胃以外の任意の空洞に見つかった場合、マウスは、それが失敗した歩行を示すように安楽死させなければなりません。最小限の圧力が必要です, 人生の一日をスクラップ 2 マウス.
難しい擦り傷の兆候は、呼吸不能、重要なあえぎ、および長期間舌を突き出すことを含むことができる。ギャザリング手順のためのいくつかの提案は、あなたの擦り傷の手の指の後ろを休ませ、注射器を保持する手のひらの上に、これは子犬の位置が安定していることを保証し、手順および針の間に、動物の中で動き回らない。ガバジの間、針の重量は、滑りを容易にし、針が外圧を加えることなく、子犬によって飲み込まれるようにする。
子犬をダムのケージに戻し、スケジュールに従って監視をフォローアップします。コロニー形成解析のための腸管サンプルの収集。動物は、動物のケアと使用プロトコルで承認された方法によって、人道的に安楽死させた。
外科テーブルは無菌吸収性マットが並んでいる。工具は70%エタノールを使用して滅菌され、250°Cで熱いビート滅菌を行いました。動物の外部サービスは、70%エタノールでディスサイト化される。
鉗子とはさみを使用して外皮を4つの象限にカットし、腹骨を裂かないように特別な注意を払います。腹側によく露出するように皮膚を横に押し込みます。腹筋を切り開くために、異なる、新しい無菌ツールを使用し、このプロセスの内臓を裂かないように特別な注意を払ってください。
子犬の胃を見つけ、十二指腸でクランプします。2つの無菌鉗子を使用して、胃を見つけ、胃の十二指腸の端を見つける。胃と十二指腸の交差点で右クランプ。
腸を実行するために2つの新しい無菌鉗子を使用し、一方の鉗子を使用して十二指腸を保持し、もう1つの鉗子を使用して任意の結合組織を取り除き、腸をそのまま保持する。あなたが解明すると、動物を覆う無菌吸収パッドの上に腸を置きます。あなたが腸を裂く場合は、解明手順中に、腸の向きがそのままになるように、それが裂けた領域をマークします。
直腸端部でクランプし、両方のクランプでカットを行います。無菌印のアルミ箔の上に、正しい方向に、無傷の腸を置きます。その後の分析に必要な腸のセクションに印を付けます。
DNAは、これらの腸から抽出され、最適化された抽出手順を使用して、およびプロバイオティクスを定量するためにQPCR分析が行われる。DNAは新鮮な腸から抽出されるか、または腸を冷凍庫ボックスを使用して摂氏80度の負の80度で貯蔵することができる。代表結果は、乳酸菌プランタリウム、毎日および一日おきにガベージを伴うコロニー形成である。
マウスの腸では高いLPシグナルが観察され、毎日のマウスと比較して1日おきにギャブジした。したがって、その後の実験が構築され、1日おきにギャバジュを使用している。乳酸菌プランタラムはマウスをガバジドし、ウンガジドマウスと共に収容した。
LPの可変シグナルは、LPガバジドマウスと共収容された未治療マウスで観察された。LPのコロニー形成広がって、ごみの仲間との間で可能であり、したがって治療条件は、我々の後続の実験のためにケージによって分離された。結論は、この手順は、新生児マウスに任意の液体の正確な量を提供するために使用することができます。
腸のサンプリングは、他の分析方法を通じて、マイクロバイオームの変化を探索するために、外挿することができます。このビデオの範囲は、プラットフォームを提供することです, 研究者は、新生児マウスギャージモデルを使用します, 観察された効果の背後にあるメカニズムを理解します, プロバイオティクスの早期投与と.この研究を可能にしてくれたコルマンラボチーム、ブリティッシュコロンビア大学のアニマルケアサービスに感謝します。
