この手順の全体的な目標は、アレルギー性皮膚移植片で再建された完全な厚さの火傷の再現性のあるマウスモデルを作成することです。皮膚は表皮と真皮の2つの成分に分けられる。真皮の下には皮下脂肪があり、骨、腱、鼻隠しを覆う。
火傷の厚さの分類は、多くの場合、火傷の深さの程度を定義するために使用されます。表面的な火傷は表皮のみを伴い、表面的な部分的な厚さの火傷は表皮を伴い、ピローリーまたは上真皮のみを含む。深真皮部分厚い火傷は、表皮および真皮、血管、毛包、油および汗腺を含む網状真皮を含む。
完全な厚さの火傷は、皮膚の全体の厚さとおそらく皮下組織の関与を明らかにすることによって特徴付けられます。このタイプの創傷は、収縮または皮膚移植によってのみ治癒することができる。この手順の全体的な目標は、完全な厚さの火傷を作成し、完全な厚さの皮膚移植片で再構築することであった。
これは、80°Cに予熱された円形の真鍮ブロックを入れて、20秒間口の皮膚に塗布することによって達成された。壊死組織は、火傷の24時間後に外科的に切除された。ドナーマウスの尾から採取した完全な厚さの皮膚移植片を切除された火傷の上に置いた。
移植片は外科用接着剤で固定されます。ドナーとレシピエントの両方の動物は、マウスの同じ近親交配株から来る。生検マウスは、研究の過程で使用されます.
しかし、マウスの菌株も使用してもよい。これには、特に創傷治癒研究に有用である免疫担当無毛マウスが含まれる。毛の除去および関連する炎症として、ホボおよび毛髪の再成長は、領域測定および他のタイプの顕微鏡創傷評価時に、デジタル画像分析を妨げない。
これは、私たちのバイオ生物と細菌の懸濁液が創傷のあなたの顔に適用され、生物生物シグナルが細菌の成長率を示すために測定される感染のモデルで特に当てはまります。熱熱傷害装置は80°Cに予熱された直径10ミリメートルを測定するカスタムメイドの円形の真鍮のブロックから成っている。真鍮ブロックの温度は赤外線熱画像カメラを使用して確認されます。
完全な厚さの火傷を作成するために、真鍮ブロックはデジタル圧力計によって監視される0.15ニュートンの一定の圧力を使用して20秒間適用される。マルチモーダル鎮痛は、侵襲的な動物研究手順における疼痛管理のベストプラクティスです。鎮痛の理想的な投与体制には、先制または手続き前の鎮痛投与が含まれる。
1食あたり3ミリグラムのパラセタモールを飲料水に加え、処置の前と72時間前に供給した。1グラム当たり0.05マイクログラムでブプレノルフィンを、処置の30分前に皮下投与し、処置後最初の72時間に対して6時間毎に投与した。1キログラム当たり5ミリグラムのリドカインを、処置の15分前に各マウスのドーサムの周りに皮下投与し、術前に5%デキストロースで200マイクロリットルのラクチンゲル溶液を全量注入し、脱水を予防する処置の6時間後に投与した。
マウスは、1キログラムあたり10ミリグラムでキシラジンの腹腔内注射を使用してニセルチドを、1キログラムあたり100ミリグラムでケタミンを使用した。麻酔深さはつま先ピンチで評価できます。麻酔は、瞬き反射を廃止し、角膜水和及び連続的に空気に曝露される眼の維持に必要な涙液膜のリフレッシュを防止し、角膜の水分補給を維持するために眼に潤滑剤を塗布した。
各マウスのドーサムを切り取り、脱毛クリームを1分間塗布して髪を取り除きます。ニセルチド動物は平らなテーブルの上に置かれやすく、熱熱熱は20秒間摂氏80度に予熱された円形の真鍮ブロックを適用することによって作成される。マウスは、加熱パッドに戻され、それを暖かく保ち、低体温症を防ぐために、麻酔薬の頻繁な副作用である。
麻酔から回復したら、マウスを個々のケージに入れてもよい。火傷の誘発から24時間後。壊死組織は外科的に興奮する。
4つの病気の皮膚移植片は、安楽死させたドナーマウス尾から採取される。反対側は尾の下にあるので、マウスモデルを使用している可能性もありますが。したがって、ヒトの応答の程度は、ドナー皮膚移植片の起源によって異なる場合がある。
例えば、耳と後ろの皮膚は、尾の皮膚と比較して販売されなくなり、より堅牢な人間の反応を引き起こし、移植片の拒絶につながる可能性があります。皮膚移植片の厚さは、皮膚移植片の着付けに成功した決定因子を果たす可能性があるため、考慮され得る。背中からのような安全な皮膚は、組織の代謝要求が高いために失敗する可能性が高い。
その結果、報告された背中の皮膚移植片の発着の成功は、尾部皮膚移植片に対する報告された成功よりも低い。麻酔は、1分間に4リットルの流量で100%酸素中の5%イロフルランを吸入し、手術中の維持のために1分あたり2リットルで2%イオブルランを使用して麻酔を維持することによって誘発された。ブプレノルフィンは術後鎮痛を提供する手順の開始時に投与された。
火傷はポビドネヨウ素で準備され、続いて70%のアルコールが続いた。壊死性バーンは、円形の完全な厚さの皮膚欠損を取り除くためにはさみで切除され、皮下のパンニクルカルノーサス層が除去され、安定な皮膚移植片レシピエントベッドを作り出すために、いくつかの著者は、移植片の再血管化に必要であると考えられるように、皮下のパンヌカルヌスカルノーサス層を保存することを示唆している。しかし、この場合、この層の移動性と、移植片とレシピエントベッドの間の潜在的なせん断力が問題になることがあります。
パンニクルカルノーサス層の除去は、移植手順の成功に悪影響を及ぼさなかった。完全な厚さの移植片は、安楽死させたドナーマウスの尾から収穫される。尾部は縦方向に切開され、皮膚を下層の軟部組織から分離することができる。
尾の皮は、滅菌、通常の生理食い物で満たされたペトリ皿に広がり、定規を使用して円形のパッチにカットされます。その後、移植片は通常の生理食前に浸した滅菌ガーゼを持つペトリ皿に移され、移植の準備ができるまで4度を保つ。移植片は外科用の接着剤で受け取り側のベッドに固定される。
ドナー皮膚移植片とレシピエント創傷床の間の隙間は、皮膚の縁を揃えるために静かに押す。傷は不活性パラフィンガーゼおよび粘着性二次ドレッシングの中で服を着ている。移植された創傷のデジタル写真は、火傷後1、3、7日で撮影された。
死後、背びれ傷は筋膜に外科的に切除され、創傷は10%緩衝ホルマリンに半分固定され、占星術および免疫検査のために処理された。皮膚移植片は細胞の移動のための足場システムを提供する。正常な移植片の統合は、効率的な線維芽細胞およびレシピエント入札からドナー移植片への移動を行い、細胞外マトリックスを産生できる細胞に置換する。
大量創傷の組織学的部分は、ヘマトキシリンおよびエオシン染色を行った。ヘマトキシリンおよびエオシン染色された創傷の切片の代表的な画像は、黄色で強調された表皮付近の長さが7日目に有意に増加することを示し、火傷後3日目と比較した。再表皮化率を推定するために、表皮近くで覆われた創傷の領域を創傷全体の割合として表した。
細胞外マトリックスは、皮膚の非細胞成分であり、細胞成分の足場を提供する。細胞外マトリックスは、コラーゲンおよびフィブロネクチンなどの繊維状タンパク質で構成されています。これらの分子は、創傷の成熟を高め、コラーゲンタイプ1の皮膚半定量的免疫組織化学の構造的完全性を維持し、メイソンのトリクロムのような組織学的染色は、フォト顕微鏡写真から細胞外マトリックスの完全性を助けるために使用され得る。
第二ハーモニック生成顕微鏡のようなより高度な方法は、コラーゲン構造の定量分析のための強力なツールとして登場しています。マウスの皮膚移植は、レシピエント側へのグラフの統合を調査する優れた潜在的な前臨床モデルを提供する。本研究は、マウスモデルにおける皮膚移植を正常に行う信頼性の高い方法と、治癒創傷の組織学的評価を実証した。
