このプロトコルは、包括的で低コストで時間効率の高い技術の両方を提供するという点で重要です。トランスレーショナルリサーチの重要な要素に答え、個人レベルとグループレベルの両方でコンポーネントデータを分類します。この技術は、動物の全体的なプロフィールに関して抽出することができる総量の情報のために有利である。
これには、分類コンポーネントとその後の結論が含まれます。この技術は、心臓病学、神経学、薬理学など、幅広い研究分野への洞察を提供する可能性があります。この手法は、生殖研究にのみ適用できるわけではありません。
思春期の高齢ラットの圧縮スタイルのホールドなど、適切な年齢のホールドでラットを扱うことから始め、被験者を鼻を地面に向けて胸上部領域に当てます。シリンジを挿入する前に尾を静かに曲げることによって、被験者の膣管を露出させる。人差し指と中指でシリンジをしっかりと保持しながら、シリンジの先端をそれに平行な角度で膣管に挿入し、プランジャーを親指で内側に押し込んで塩化ナトリウムをゆっくりと運河に排出する。
シリンジのプランジャーを上皮ライニングから引き離して、膣管から塩化ナトリウムを抽出します。各細胞タイプの基準を使用して、サンプル中に存在する細胞を特徴付け、所見を記録します。有核化角化上皮細胞または定量化上皮細胞は、ギザギザまたは角張った縁状に見える。
核がないにもかかわらず、それはゴースト核と呼ばれる核がかつて存在していた場所を表す細胞内の明るい丸い領域を示すかもしれません。大きな有核上皮細胞、またはLNE細胞は、典型的には、不規則なギザギザまたは角度のある境界によって包まれた円形から多角形の細胞である。それらの核は、死または劣化を受けている細胞の核内のクロマチンの不可逆的な凝縮に関連する無傷から縮退またはピクノティックまでさまざまである。
核は細胞内の細胞質よりも少ないスペースを占有し、小さな上皮細胞よりも低い核対細胞質比を有する。白血球はコンパクトな球状細胞である。記載された他のすべての細胞型と比較した場合の最小値。
SNE細胞は、細胞内の細胞質よりも大きな空間を占める丸い核を有する非角化細胞であり、大きな上皮細胞と比較してより高い核対細胞質比を作り出す。4 つの X などの低い客観化を使用して、セル全体の配置の代表的なビューを取得します。細胞が凝集しているか、均等に分散しているか、ランダムに分散しているかを記録し、各細胞タイプの特定の組織を書き留めます。
次に、総細胞量をスミッジ、中等度、または多数の細胞量として視覚的に推定して記録し、個々の細胞量を、存在する各細胞型の割合として記録する。これらの分類成分を組み合わせて、どの発情周期段階が提示されているかを判断します。diestrus段階では、白血球が優勢または唯一の細胞型であることがわかる。
これらは通常、初めに凝集した形で配置されるが、後期段階ではより分散する。細胞の総量は比較的低いかもしれません、最も頻繁には2日目または3日目のdiestrus期間の後期段階で。白血球の濃縮鎖は、この段階で存在する可能性のある粘液の量が多いために観察され得る。
白血球に付随するSNE細胞の細胞鎖の小さな凝集塊は、発情前期への移行における後期期に見られることがある。膣液は、ダイストラスに移行し、完全に移行し、ダイストラスから移行するとき、粘性があり不透明に見える。発情前期には、SNE細胞が優勢な細胞であるが、白血球、LNE、およびAKE細胞は低い数で見出されることがある。
SNE細胞は、典型的には、この段階の間にクラスター、シート、またはストランドに配置され、より高い倍率で観察することができる粒状の外観を有する。膣液は、被験者が発情期に完全に移行すると、非粘性で透明になる。AKE細胞は発情期に優勢であり、SNE細胞が減少し、発情が続くにつれて細胞の数とサイズが全体的に増加する。
AKE細胞は、しばしばケラチンバーの形でクラスター化される。彼らはまた、開経から小疱疹への移行においてより分散することができる幽霊核を含むことができる。膣液は非粘性で透明であり、ラットが発情に移行し、発情に完全に移行し、発情から移行する。
ラットがメテストルスに移行するにつれて、LEUと比較してSNEおよびLNE細胞の量が多いことが多いが、すべての細胞タイプを探す。より多くの量の破片が、耳球および発情後の上皮細胞崩壊による転移の間に観察される。この段階では、すべての細胞型が見られ、さまざまな量で見られるため、一貫した配置が欠けています。
しかし、初期段階で上皮細胞に近接してパッキングされた白血球は、ジストラスに移行する際に凝集した配置に戻ることがある。膣液は、ステージ内で非粘性で透明に見える。そして、ダイストラスに移行する間、より粘性があり不透明な外観に変化します。
各段階内では、多くの変動が見られ、例えばディエストラス期内では、上皮細胞および白血球の両方が観察された。配置では、白血球からなる粘液鎖の凝集、および白血球の最初の凝集、および後のランダムまたは支払いも見られた。膣液サンプルを収集する際には、不適切な注射器挿入による膣管壁からの扁平上皮細胞の抽出を含む、反復洗浄を正当化する表現されていないコレクションがあった。
破片のみの集まり、分類するには低すぎる細胞数、焦点が合っていない細胞数。ステージの進行を棒グラフでグラフ化するのが一般的であり、これにより研究者は全体的なサイクルパターンを調べ、循環性を特定することができます。そして、サンプルは、サイクル長とステージ進行パターンによって分析することができます。
エストロウスサイクルプロファイルは、積み上げ棒グラフを使用して作成し、ラットごとまたはコホートごとのステージ進行を追跡することができます。各日の分類コンポーネントは、1 日ごとまたはステージごとにグラフ化されます。分類するコンポーネント データを数値で整理して、標準化された範囲を作成し、統計を収集することもできます。
低侵襲になるようにこの手法を練習し、顕微鏡スライドをスキャンして代表的なサンプルを探し、選択バイアスを減らします。全体として、覚えておいてください、通常のサイクルのようなものはありません。この手順に続いて、運動や行動パラダイムなどの実験変数を導入することができます。
これにより、研究は動物のベースラインサイクリングを事前に確立し、その後の特定の介入に対するホルモン反応を検出することができます。この方法により、研究者は性ステロイドホルモンと他の身体系との関連を探ることができます。これの一例は、性ステロイドホルモンの心臓受容体がシステム機能にどのように関連しているかである。
