この方法は、異なる疼痛条件下での動物の有効または動機付け状態に関する質問に答えるのに役立ちます。これは、前臨床研究の翻訳を改善するための重要なステップです。このテクニックの主な利点は、比較的迅速かつ簡単に実行できますが、痛みに関連する行動に影響を与える複雑な動機を評価することです。
まず、第1室の側壁、床、天井を、厚さ3ミリメートルの不透明な白色アクリルを用いて構築することから始める。正面に面した壁には、厚さ3ミリメートルの透明なアクリルを使用してください。チャンバー1の蓋をヒンジで取り付けて、マウスをチャンバー内に簡単に配置してチャンバーから取り出すことができるようにします。
次に、自己粘着性発光ダイオードテープを蓋の内面に貼り付けて、約4,800ルクスの照明を提供します。不透明なアクリルシートを所定の位置に出し入れして、チャンバー1をMCAデバイスの他の部分から閉じます。次に、長さ270ミリメートルの無点灯チャンバ2、MCA試験チャンバを、上部にヒンジ付き蓋を有する全側面に半透明の濃い赤色アクリルを用いて構築する。
次に、チャンバーの床に2つのミリメートルの穴を持つ13 x 31グリッドを配置し、直径0.5ミリメートルの先端を備えた鈍いプローブの配列を突出させることができます。プローブベースプレートの下にアクリル板を追加して、プローブの高さを調整します。このアプローチを使用して、プローブの高さを 0 mm、2 mm、および 5 mm に設定してデバイスを構成します。
鈍いマップピンまたは同様の材料の代わりに、3Dプリンタファイルを使用して、チャンバ2の床とプローブプレートをナイロン12プラスチックなどの洗濯可能で生体適合性のある材料で印刷します。最後に、チャンバー1と2に似たヒンジ付き蓋で、四方に半透明の濃い赤色のアクリルを使用して暗いチャンバー3を構築します。チャンバ1の反対側の端に配置して、チャンバ2の機械プローブからの暗くなった脱出領域として機能します。
ベースラインテストをスケジュールする1日前に、マウスをケージメイトと一緒にMCAユニットに5〜15分間順応させ、デバイス全体の社会的探査を容易にします。チャンバ1のLEDがオフになっていること、チャンバ1とチャンバ2の間のバリアが開いたままになっていること、およびプローブがチャンバ2の床から突き出ていないことを確認します。次に、MCA デバイス全体の側面を向いた三脚に 1080 ピクセルの映像を記録できるビデオ カメラを設定します。
MCA が記録した画像に収まるように視野を調整します。録画が開始されたら、カメラのフィールドビューにハンドヘルドドライイレースボードを持ち、ビデオの開始に動物のテストの実行に関する識別情報でラベルを付けます。最初の実行では、プローブの高さをゼロに設定し、バリアドアが所定の位置にある状態で、テスト対象のマウスをホームケージからチャンバー1に移します。
録画したフッテージに表示されるタイマーを開始します。10秒後、チャンバー1のLEDをオンにします。マウスが点灯したチャンバーに20秒間入った後、チャンバー1とチャンバー2の間のバリアを撤回します。
動物を2分間観察し、テストが進行中にストップウォッチで待ち時間または滞留時間を測定します。チャンバ2への最初の入室までのレイテンシ、チャンバ2を横切る半分以上交差するレイテンシ、チャンバ2の合計滞留時間、チャンバ3に到達するレイテンシ、および2分以内の各チャンバ内の合計デュエル時間を記録し、それらを比率に変換します。テストが完了したら、マウスをホームケージに戻します。
MCAチャンバーを70%エタノールで洗浄し、完全に乾燥させます。プローブの高さをゼロに設定してコホート内のすべてのマウスを走らせた後、機械式プローブベースプレートの下にアクリルの3ミリメートルシートを挿入し、プローブの高さが2ミリメートルでランを繰り返します。プローブの高さを2ミリメートルに設定してすべてのマウスを走らせた後、プローブベースプレートの下にアクリルのシートを3枚挿入し、プローブの高さを5ミリメートルにしてランを繰り返します。
テストセッションの最後に消毒剤で最終洗浄を行います。完全なフロイントのアジュバント誘発性炎症性疼痛モデルでは、生理食塩水注射はベースラインと比較して脱出潜時を変化させない。アジュバントを注射したマウスは、注射後4日目に脱出潜伏時間の有意な増加を示したが、プローブの高さが5ミリメートルに上昇したときのみであった。
この増加した潜伏時間は、試験開始の90分前にカルプロフェンを投与されたマウスでは見られなかった。神経因性疼痛の神経損傷モデルでは、プローブの高さを5ミリメートルに設定した場合、ベースラインと比較して脱出までの潜伏時間が有意に増加した。この増加は、試験の90分前にオピオイド鎮痛薬ブプレノルフィンを投与することによって防止された。
脱出潜伏時間の増加は、神経損傷前にMCA試験のベースラインラウンドを受けなかったマウスにおいても観察された。5ミリメートルでの神経損傷を免れたマウスにおける脱出潜伏時間の増加は、試験の90分前にガバペンチン投与によって防止された。骨折または鋳造モデルでは、チャンバ1から脱出するレイテンシは、損傷前のプローブ高さに比例して増加した。
損傷後、潜伏時間はゼロミリメートルで変化しなかったが、ベースラインと比較して、男性の2ミリメートルと5ミリメートルのプローブ高さと女性の5ミリメートルのプローブの高さで有意に増加した。この手順を試みる際に覚えておくべき最も重要なことは、すべてのマウスがMCA装置に慣れていることを確認し、研究を通して適切な無作為化と盲検化を維持することです。この方法は、フォン・フレイまたは条件付き場所選好を含む疼痛感受性の他の尺度と共に使用することができる。
