Diese Methode kann helfen, Fragen über den effektiven oder motivierenden Zustand von Tieren unter verschiedenen Schmerzbedingungen zu beantworten. Es ist ein wichtiger Schritt zur Verbesserung der Translation präklinischer Forschung. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie relativ schnell und einfach durchzuführen ist und dennoch komplexe Motivationen bewertet, die das schmerzbezogene Verhalten beeinflussen.
Beginnen Sie mit dem Bau der Seitenwände, des Bodens und der Decke der ersten Kammer mit einem undurchsichtigen weißen drei Millimeter dicken Acryl. Verwenden Sie für die nach vorne gerichtete Wand ein klares drei Millimeter dickes Acryl. Befestigen Sie den Deckel der ersten Kammer mit einem Scharnier, damit die Mäuse leicht in die Kammer gelegt und aus ihr herausgeholt werden können.
Befestigen Sie dann selbstklebendes Leuchtdiodenband an der Innenfläche des Deckels, um eine Beleuchtung von etwa 4.800 Lux zu gewährleisten. Schieben Sie eine undurchsichtige Acrylplatte in und aus der Position, um die Kammer vom Rest des MCA-Geräts zu schließen. Als nächstes konstruieren Sie eine 270 Millimeter lange unbeleuchtete Kammer zwei, die MCA-Testkammer, mit durchscheinendem dunkelrotem Acryl auf allen Seiten mit einem aufklappbaren Deckel auf der Oberseite.
Platzieren Sie dann ein 13 x 31-Gitter mit zwei Millimeterlöchern auf dem Boden der Kammer, durch das eine Reihe stumpfer Sonden mit Spitzen von 0,5 Millimetern Durchmesser hervorstehen kann. Passen Sie die Höhe der Sonden an, indem Sie zusätzliche Acrylplatten unter die Tastgrundplatte legen. Konfigurieren Sie bei diesem Ansatz das Gerät mit einer Sondenhöhe von null, zwei und fünf Millimetern.
Als Alternative zu abgestumpften Kartenstiften oder ähnlichen Materialien verwenden Sie die 3D-Druckerdateien, um den Boden der zweiten Kammer und die Sondenplatte mit einem waschbaren und biokompatiblen Material wie Nylon-12-Kunststoff zu drucken. Konstruieren Sie schließlich eine dunkle Kammer drei mit durchscheinendem dunkelrotem Acryl auf allen Seiten mit einem aufklappbaren Deckel ähnlich den Kammern eins und zwei. Platzieren Sie es am gegenüberliegenden Ende von Kammer eins, um als abgedunkelter Fluchtbereich vor den mechanischen Sonden in Kammer zwei zu dienen.
Gewöhnen Sie die Mäuse einen Tag vor der Planung der Baseline-Tests für 5 bis 15 Minuten mit ihren Käfigkameraden an die MCA-Einheit, um die soziale Erkundung des gesamten Geräts zu erleichtern. Stellen Sie sicher, dass die LEDs in Kammer eins ausgeschaltet sind, die Barriere zwischen den Kammern eins und zwei offen gehalten wird und die Sonden nicht durch den Boden der zweiten Kammer ragen. Richten Sie als Nächstes eine Videokamera ein, die 1080-Pixel-Aufnahmen auf einem Stativ mit einer seitlichen Ansicht des gesamten MCA-Geräts aufnehmen kann.
Passen Sie das Sichtfeld so an, dass der MCA das aufgenommene Bild ausfüllt. Sobald die Aufzeichnung beginnt, halten Sie eine Handheld-Trockenlöschtafel in die Feldansicht der Kamera, um den Beginn des Videos mit identifizierenden Informationen über den Testlauf des Tieres zu beschriften. Stellen Sie für den ersten Durchlauf die Sondenhöhe auf Null ein und übertragen Sie die zu testende Maus aus dem Heimkäfig in die erste Kammer mit der Barrieretür.
Starten Sie einen Timer, der im aufgezeichneten Filmmaterial sichtbar ist. Nach 10 Sekunden schalten Sie die Kammer eine LED ein. Nachdem sich die Maus 20 Sekunden lang in der beleuchteten Kammer befunden hat, ziehen Sie die Barriere zwischen den Kammern eins und zwei zurück.
Beobachten Sie das Tier zwei Minuten lang und messen Sie Latenzzeiten oder Verweilzeiten mit einer Stoppuhr, während der Test läuft. Notieren Sie die Latenz bis zum ersten Eintritt in Kammer zwei, die Latenz, um mehr als die Hälfte der Kammer zwei zu überqueren, die Gesamtverweilzeit in Kammer zwei, die Latenz, um Kammer drei zu erreichen, und die Gesamtverweilzeit in jeder Kammer innerhalb von zwei Minuten und konvertieren Sie sie in Proportionen. Sobald der Test abgeschlossen ist, bringen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig zurück.
Reinigen Sie die MCA-Kammern mit 70% Ethanol und lassen Sie sie vollständig trocknen. Nachdem Sie alle Mäuse in der Kohorte mit einer auf Null eingestellten Sondenhöhe ausgeführt haben, legen Sie eine drei Millimeter große Acrylschicht unter die mechanische Tastgrundplatte und wiederholen Sie den Lauf mit einer Sondenhöhe von zwei Millimetern. Nachdem Sie alle Mäuse mit einer auf zwei Millimeter eingestellten Sondenhöhe ausgeführt haben, legen Sie eine weitere drei Millimeter große Acrylschicht unter die Tastergrundplatte und wiederholen Sie den Lauf mit einer Sondenhöhe von fünf Millimetern.
Führen Sie am Ende der Testsitzung eine Endreinigung mit einem Desinfektionsmittel durch. Im vollständigen adjuvantinduzierten entzündlichen Schmerzmodell von Freund ändert eine Kochsalzinjektion die Fluchtlatenz im Vergleich zum Ausgangswert nicht. Mäuse, denen das Adjuvans injiziert wurde, zeigten vier Tage nach der Injektion einen signifikanten Anstieg der Fluchtlatenz, jedoch nur, wenn die Sondenhöhe auf fünf Millimeter angehoben wurde.
Diese erhöhte Latenz wurde bei Mäusen, die 90 Minuten vor Beginn der Tests Carprofen erhielten, nicht beobachtet. Das Modell der verschonten Nervenverletzung neuropathischer Schmerzen erhöhte signifikant die Latenz, um im Vergleich zum Ausgangswert zu entkommen, wenn die Sondenhöhe auf fünf Millimeter eingestellt wurde. Dieser Anstieg wurde durch die Verabreichung des Opioid-Analgetikums Buprenorphin 90 Minuten vor dem Test verhindert.
Eine erhöhte Fluchtlatenz wurde auch bei Mäusen beobachtet, die vor einer Nervenverletzung keine Baseline-Runde von MCA-Tests durchliefen. Die erhöhte Fluchtlatenz bei verschonten Nervenverletzungsmäusen bei fünf Millimetern wurde durch Gabapentin verhindert, das 90 Minuten vor dem Test verabreicht wurde. Im Bruch- oder Gussmodell stieg die Latenz, um aus der ersten Kammer zu entkommen, proportional zur Sondenhöhe vor der Verletzung an.
Nach der Verletzung blieb die Latenz unverändert bei null Millimetern, nahm aber bei der Sondenhöhe von zwei Millimetern und fünf Millimetern für Männer und der fünf-Millimeter-Sondenhöhe für Frauen im Vergleich zum Ausgangswert signifikant zu. Das Wichtigste, woran Sie sich erinnern sollten, wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist sicherzustellen, dass alle Mäuse an das MCA-Gerät gewöhnt sind, und die richtige Randomisierung und Verblindung während der gesamten Studie aufrechtzuerhalten. Diese Methode kann neben anderen Messungen der Schmerzempfindlichkeit verwendet werden, einschließlich von Frey oder bedingter Platzpräferenz.
