높은 지방 다이어트를 먹이 쥐 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)과 인슐린 내성 검사 (ITT)를 사용 하 여 포도 당 대사 Vivo에서 의 연구

요약

현재 문서 생성 및 다이어트 유발 된 인슐린 저항 및 비만 모델 높은 지방 다이어트를 먹이 쥐의 대사 특성에 설명합니다. 그것은 더 상세한 프로토콜 경구 포도 당 내성 검사 및 포도 당 물질 대사에서 vivo에서의 전신 변경 모니터링 인슐린 내성 검사 수행을 갖추고 있습니다.

초록

비만 2 형 당뇨병, 인슐린 자극 포도 당 통풍 관을 조직의 포도 당 물질 대사의 총에서는 저항이 특징인 질병의 병 인에 가장 중요 한 단일 위험 요소를 나타냅니다. 포도 당 대사에 대 한 이해에 상당한 진행에도 불구 하 고 건강과 질병의 규제의 분자 메커니즘 아래 조사 동안 남아 소설 접근 방지 하 고 당뇨병 치료는 급하다. 파생 된 포도 당 인슐린, 먹이 주 동안 세포질 단백 동화 과정의 주 레 귤 레이 터로 서 역할 하 고 따라서 혈당 균형의 췌 장 분 비를 자극 하는 다이어트는 조직의 에너지 상태를 유지 하기 위해 레벨. 만성 지나치게 트리거 메타-염증, 주변 인슐린 수용 체 관련 변경에 이르게 신호 하 고 따라서 인슐린 중재 하는 포도 당 처리에 감도 감소 시킨다. 이러한 이벤트 궁극적으로 귀 착될 감소 뿐만 아니라 높은 단식 포도 당 및 인슐린 수치에 포도 당 내성에 인슐린 저항의 중요 한 지표 역할을. 여기, 우리 세대 및 높은 지방 다이어트 (HFD)의 변화 특성에 대 한 프로토콜을 제시-다이어트 유발 된 인슐린 저항의 자주 사용 모델 생쥐를 먹이. 우리는 구두로 관리 포도 당 부하 및 인슐린 분 비에는 시간이 지남에 따라 주변 처리 모니터링 경구 포도 당 내성 검사를 (OGTT), 자세히 보여 줍니다. 또한, 인슐린 내성 검사 (ITT) 전신 인슐린 작업 모니터링을 위한 프로토콜 선물이. 함께, 이러한 메서드 및 다운스트림 응용 프로그램 강력한 도구를를 구체적으로 평가 하는 포도 당 대사에 변경으로도 쥐의 일반적인 대사 표현 형의 특성을 나타냅니다. 그들은 인슐린 저항, 당뇨병 및 비만 치료 내정간섭의 효과 테스트로 뿐만 아니라 병의 더 나은 이해를 제공의 광범위 한 연구 분야에 특히 유용할 수 있습니다.

서문

선진국에서 비만 당뇨병 물리적인 비활동 및 가공된 식품의 과도 한 소비는 급속 한 도시 화, 산업화로 세계화에 의해 구동 됩니다 효과 전염병 차원에 도달. 비록 연구 인슐린 저항 및 그것의 공동 morbidities, 혈과 동맥 경화, 지난 십년 동안 돌기를 얻고 있다와 같은 건강 및 질병에 신진 대사를 조절 하는 복잡 한 생물 학적 메커니즘 남아 불완전 하 게 이해 여전히 방지 하 고 치료이 질병¹새로운 치료 modalities에 대 한 긴급 한 필요가 있다.

그것의 counter-regulatory 호르몬 글 루카 곤과 인슐린, 세포 에너지 공급 및 다량 영양소 균형, 따라서 또한 적절 한 조직의 혈액 포도 당 농도²유지의 주 레 귤 레이 터 역할을 합니다. 다른 macronutrients, 체액 성 요인으로 신경 입력 추가 수정이 응답 하는 동안 자체 포도 당 췌 장 β-세포, 인슐린 분 비의 주요 자극 제 중 하나로 작동 합니다. 인슐린 근육 및 지방 세포에 과잉 혈액 포도 당의 확산을 촉진 및 추가 분해로 단백질-또는 지방산 합성을 각각 활성화 하 여 결과적으로 먹이 상태 근육 프로세스를 트리거합니다. 또한, 인슐린 gluconeogenesis를 억제 함으로써 간 포도 당 출력을 억제 합니다. 만성 과도 한 에너지 소비와 메타 염증으로 이어질 hyperinsulinemia 주변 인슐린 저항 인슐린 수용 체 식으로 변경 따라서 장애인 인 하류 신호 통로에 다운 레 귤 레이 션 때문 인슐린 중재 하는 포도 당 처리 뿐만 아니라 간 포도 당 생산^3,4,,56의 부족 한 억제에 감도.

질병의 유전, 영양, 또는 실험적인 유도 동물 모델의 광범위 인슐린 저항 및 당뇨병의 동반 질환^{7의 다양 한 형태의 분자 메커니즘 연구를 우수한 도구 수 입증 된} . 대표적인 예는 특징 조합에서 증가 식이 섭취로 인해 급격 한 체중 증가 인슐린 저항^8, 의 결과로 감소 신진 대사 효율, 널리 사용 되 고 잘 설립 HFD 유도 마우스 모델은 ⁹. 단식 혈액 포도 당 및 인슐린 수치에 상승 인간과 동물 모델에서 혈당 관리를 장애 허용 오차 있습니다 인슐린 저항의 자주 사용된 지표 및 포도의 다른 조직의 변경 대사입니다. 모니터링 혈액 포도 당 및 인슐린 수치 또는 자극 후 기저 상태에 따라서 쉽게 접근할 수 있는 정보입니다.

현재 프로토콜 설명 두 자주 사용된 방법, 구두 포도 당 내성 검사 (OGTT) 및 인슐린 저항 테스트 (ITT), 대사 표현 형의 특성을 조사 하는 유용한 HFD 먹인 쥐의 생성 포도 당 대사에 변경입니다. 우리는 세부 사항에, 시간이 지남에 구두로 관리 포도 당 부하 및 인슐린 분 비의 처리를 평가 OGTT 설명 합니다. 또한, 우리는 ITT 인슐린 응답을 bolus로 혈액 포도 당 농도 모니터링 하 여 전신 인슐린-행동 조사를 수행 하는 방법에 지침을 제공 합니다. 이 문서에서 설명 하는 프로토콜 잘 설립 하 고 여러 연구^10,,1112에 사용 되었습니다. 약간의 수정 성공을 증가 하는 데 도움이 될 수 있습니다, 뿐만 아니라 실험적인 디자인 및 데이터 분석으로 유용한 힌트 잠재적인 함정을 피하기 위해에 대 한 지침을 제공 합니다. 여기에 설명 된 프로토콜 몸 전체 포도 당 대사와 인슐린 저항 등의 관련된 질환에 유전, 약물, 식이, 및 기타 환경 요인의 영향을 조사 하기 위해 매우 강력한 도구가 될 수 있습니다. 포도 당 또는 인슐린 자극, 이외에 다른 화합물의 다양 한 개별 연구의 목적에 따라 자극을 위해 사용할 수 있습니다. 이 원고를의 범위 밖에 있지만 다른 많은 다운스트림 응용 프로그램에서 수행할 수 있습니다 그려진된 혈액 샘플의 혈액 포도 당 및 인슐린 (예를들면, 지질 및 지단백 프로필) 값의 분석 등 자세한 뿐만 아니라 신진 대사 마커 (예를 들어, 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR), 서쪽 오 점 분석 및 Enzyme-Linked Immunosorbent 분석 결과 (ELISA))의 분석. 더 cytometry 교류 하 고 형광 활성화 된 세포 분류 (FACS) transcriptomic, proteomic, 및 metabolomic 접근 타겟이 불분명 한 분석을 위해 활용 될 수 있습니다 하는 동안 고유한 단일 세포 인구에 효과 조사 하기 위해 적용 될 수 있습니다.

전반적으로, 우리 또한 전신 대사 변경는 OGTT와 질병 병 인 공부를 위한 유용한 도구가 될 수 있는 ITT 공부 두 가지 강력한 방법을 설명 하면서 HFD 유도 마우스 모델을 생성 하는 간단한 프로토콜을 제공 하 고 특히 인슐린 저항 및 당뇨병 등 대사 관련 질환의 분야에서에서 새로운 치료를 개발.

프로토콜

여기에 설명 된 모든 메서드를 동물 관리 및 사용 위원회 비엔나의 의학 대학에 의해 승인 하 고 따라는 연맹의 유럽 실험실 동물 과학 협회 (FELASA)을 실시 되었습니다. 하시기 바랍니다이 프로토콜에서 설명 하는 모든 절차만 해야 참고 기관 및 정부 승인 후 뿐만 아니라 기술적으로 능숙 한 직원에 의해 수행.

1. HFD 먹인 쥐

참고: 음식 및 물 무료 12 h 명암 주기 모든 C57BL/6J 생쥐를 유지 합니다.

1. 나이의 6 주, 장소 마우스, 비만 유발 하는 HFD (40-60% 지방 칼로리)에 8-12 주 동안 먹이 상체 제어 그룹 (LFD) 낮은-지방 다이어트를 하는 동안 (10% 지방 칼로리).
2. 주간 기준 생쥐의 몸 무게를 결정 합니다. 체중 곡선 HFD 먹이 그룹에서 더 높은 사면 두 그룹에서 유사한 패턴을 표시 합니다.

2입니다. OGTT

참고: 경우 혈액 샘플링 시간 점 마다 15 분 OGTT 중 선택, 실험 수행 되어야 한다 병렬로 15 마우스의 최대 마우스 당 적어도 1 분 처리 시간을 위해.

1. OGTT 전날에 준비
   1. 쥐 식용 수에 접근이 보장 하면서 신선한 침구와 빠른 그들 (14 h)를 테스트 하기 전에 하룻밤 새에 쥐를 전송 (예를 들어, 오후 6 시 시작 시간 오전 8시 다음날 아침에 대 한 음식을 제거).
      그러나 참고: 금식 쥐 하룻밤은 표준 접근 짧은 빨리 (5-6 h)는 더 쥐 (자세한 내용 참조)에 대 한 생리.
2. (하지만 실험 전에) 실험의 날 준비
   1. 20% 포도 당 용액 10 mL를 준비 (분해 D-(+)-증류수에 포도 당).
      참고: 동물에 관리 되는 모든 시 약 약리학 학년 될 필요가 및 살 균.
   2. 5 µ L로 각 샘플링 시간 지점과 각 마우스에 대 한 하나의 잘 작성 하 여 플라즈마 컬렉션에 대 한 96 잘 접시를 준비 NaEDTA (0.5 M EDTA, pH 8.0에서 0.9 %NaCl, RT에 저장). 실험 하는 동안 얼음에이 접시를 저장.
      참고: 자세한 검사 목록에 대 한 보충 그림 1 을 참조 하십시오.
3. 모든 쥐의 몸 무게를 측정 하 고 (예를 들어, 마우스 1 = 1 대시, 마우스 2 = 2 대시, 등) 쥐 쉽게 구별할 수 있도록 영구 표시와 함께 그들의 꼬리를 표시 합니다.
4. 혈당 측정 및 혈액 샘플링 (그림 2)
   1. 신중 하 게 날카로운가 위를 ("변형 A" 그림2에서)를 사용 하 여 꼬리 끝의 1-2 m m 잘라. 항상 용 혈 또는 혈액 포도 당 결정에 대 한 새로운 혈액 샘플을 채취 하기 전에 조직 액으로 오염 방지 하려면 혈액의 첫 번째 드롭 다운을 닦아내십시오. glucometer와 함께 (= 시간 포인트 0) 기저 혈액 포도 당 수준 측정 하기 위한 작은 혈액 샘플 (~ 3 µ L)를 그립니다.
      주의: 확인 하 고는 glucometer에 테스트 스트립의 충전 수를 조정 합니다.
      참고: 대체 혈액 샘플링 방법으로 닉 마우스의 측면 꼬리 정 맥 날카로운 메스 칼 날 ("변형 B" 그림2에서). 측면 꼬리 정 맥 보통 여러 샘플에 대 한 꼬리의 기지에 쪽으로 이동 하는 꼬리 끝에서 꼬리의 길이 따라 약 1 / 3에 액세스 합니다. 현지 마 취 크림의 사용을 권장 합니다. 적어도 30에 대 한 부드러운 조직에 손가락 압력을 적용 하 여 혈액의 흐름을 중지 s 동물의 감 금 소에 반환 되기 전에.
   2. 신선한 세관 (세관 수평 유지)를 사용 하 여 혈액 샘플 (약 30 µ L)를 수집 합니다. 모 세관 튜브 끝의 상단에 피 펫 팁으로 신중 하 게 공기 방울을 피하고 있는 동안 96 잘 접시의 우물에 수집 된 혈액을 추진 한 피 펫을 사용 하 여 모 세관 튜브를 비어 있습니다. 한 번에 하나씩 모든 마우스-이 절차를 반복 합니다.
      참고: 혈액, 수집 또는 수집의 드롭 올바른 볼륨 (예를 들어, 30 µ L)으로 조정 하는 피 펫을 사용 하는 모 세관 튜브를 통해 혈액 컬렉션에 대 한 대안 혈액 파라핀 필름과 피펫으로에 꼬리에서 그것은 EDTA 솔루션으로. 엄격 하 게 하지 마십시오 혈액 또는 glucometer 테스트 스트립, 석유 젤리의 접촉을 그것 이후 포도 당 및 인슐린 측정에 영향을 미칠 수 있습니다.
      주의:는 OGTT는 마우스에 대 한 매우 스트레스: 마른 쥐 잃을 수 있다 약 그들의 체중의 15%는 하룻밤 빠른 동안. 또한, 다른 시간 지점에서 혈액 샘플링 혈액의 상당한 손실에 지도 한다. 쉽게 혈액 샘플링, 신중 하 게 석유 젤리 mouse-tail 마사지 가능 하다.
      참고: 기관 지침 설정된 기간 내 수집한 혈액의 허용 가능한 금액을 제한할 수 있습니다. 샘플링 볼륨 및 timepoints 허용 된 최대값을 초과 하지에 조정 되어야 한다. 쥐의 몸 무게 총 계산 하는 데 사용할 한다 혈액 철수 허용.
5. 몸 무게 (1 g 포도 당/kg 몸 무게, 3g/kg까지 증가 될 수이 있습니다)에 따라 포도 당 솔루션의 필요한 볼륨 계산 모든 마우스에 대 한 구강 관리를. 예를 들어 30 g의 몸 무게로 마우스 30 mg의 포도 당을 관리 하는 20% 포도 당 솔루션의 150 µ L를 해야 합니다.
   참고: 마우스의 무게에 포도의 복용량을 기반 하는 표준 절차입니다. 신체 구성 데이터를 사용할 수 있는 경우 혈당의 복용량 OGTT를 계산 해야 하는 대에 따라는 엎드려 서 체 질량 (자세한 내용 참조).
6. 혈당 관리
   1. 준비 everythingthat 사전에 전체 실험 기간 동안 필요 하다 (타이머, 실험 기록 시트, 포도 당 모니터와 스트립, 모세 혈관, 주사기, 포도 당 솔루션, 96 잘 접시, 메스, 계산기, 균형, 영구 마커, 벤치 서류는 팁와 장갑 플라스틱).
   2. 포도 당 응용 프로그램에 대 한 단단히 아저씨에 의해 그것을 파악 하 여 마우스를 제 지. 제 지에서 왜곡에서 마우스를 방지 하 고 제대로 다시 머리를 기울이고 목 피부에 충분 한 견고를 적용 합니다. 또한 마우스 숨을 제대로 쉴 수 있는 확인 합니다.
      참고: 포도 당 관리 시작 되 면 좋은 시간 관리 매우 중요 하다.
   3. 조심 스럽게 먹이 바늘을 사용 하 여 위장에 직접 (단계 2.5 기준) 포도 당 솔루션을 관리할 수 있습니다. 조심 스럽게 직접 식도 쪽으로 입을 통해 먹이 바늘. 바늘을 삼 키는 마우스 허용: 바늘 전적으로 마우스의 낮은 식도/위장에 싱크. 다음에 포도 당 솔루션 (그림 3a) 주사.
      1. 어떤 저항을 만났다 또는 동물 투쟁 즉시 바늘을 철회 하 고 위치를 변경할. 첫 번째 gavage 직후 타이머를 시작 하 고 1 분 간격으로 다른 모든 쥐에 포도 당을 관리.
         참고: 그것은 핥 아 삼 키는, 먹이 바늘의 쉽게 삽입을 촉진 자극 마우스의 입에 한 방울 포도 당 솔루션의 먹이 바늘에서 직접 적용할 도움이 될 수 있습니다. 이 심각 하 게 동물을 다치게 수 있습니다으로 먹이 바늘을 삽입할 때에 압력을 적용 되지 않습니다.
7. 15 분 후에 glucometer와 혈액 포도 당 수준을 측정 하 고 또한 걸릴 각 마우스 (2.4 단계에서에서 설명한 세부)로 혈액 샘플 (~ 30 µ L) 동일한 순서 대로 그들은 주입 했다.
   참고: 시간 관리는 매우 중요 하다; 최대한 gavage에 관해서는 동일한 시간 간격을 사용 하 여 밀접 하 게 따라 합니다. 결과 수정할 수 있습니다 스트레스를 줄이기 위해 가능한 및 전체 절차 동안 최소한으로 억제 하는 제한으로 자유롭게 이동 하는 쥐를 보자. 한 손으로 꼬리를 우유와 다른 혈액을 수집 합니다.
8. 예상된 결과 (예를 들어, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 및 180 분 포도 당 행정 후에)에 따라 선택한 시간 지점에서 2.7 단계를 반복 합니다. 선택한 시간 포인트 120 분 보다 더 긴 경우에, 쥐 식 수에 액세스할 확인 합니다. 생쥐는 항상 식 수에 대 한 액세스를 확인 하십시오. 실험으로 완료 되 면 자신의 집 새 음식 및 물에 쥐를 반환 합니다.
   주의:는 OGTT는 쥐에 대 한 매우 소진. 따라서는 ITT 같은 다음 대사 시험을 수행 하기 전에 적어도 일주일 기다려.
9. 실험 후 원심 g, 30 분, 4 ° C x 2500에서 혈액 샘플 분석까지-20 ° C에서 접시의 우물을 저장 하는 상쾌한 (플라즈마)를 전송 합니다.
   1. 존재 하는 경우 샘플의 혈을 기록 (섹션 3 참조).
10. 상용 ELISA를 사용 하 여 플라스마 인슐린 레벨 키트 ( 테이블의 자료를 참조) 결정의 키트 제조 업체의 지침에 따라.
    참고: 금식 상태 물론 조사 생쥐의 신진 대사에이 분석 하는 동안 문제가 발생할 수 있습니다: 하룻밤 금식 인슐린 레벨 (0 번 포인트)은 매우 낮은 하 고 그러므로 검출 한계에 가까운. 이 문제를 방지 하려면 권장된 플라즈마 볼륨의 수량을 두 번 하 고 따라 ELISA 분석 실험의 결과 이등분 합니다. 다른 한편으로, 마우스 HFD 먹인 쥐에 (서) 특히 OGTT, 동안 인슐린 피크에 도달 하면, 인슐린 수치가 검출 한계를 초과할 수 있습니다: 샘플 희석 (예를 들어, 10 0.9 %NaCl) ELISA 분석 결과 반복 하 고. 플라즈마 샘플에 혈 판독 값의 감소의 결과로 인슐린의 저하로 이어질 수 있습니다. 저하는 시간, 온도, 샘플에서 헤모글로빈 농도에 따라 다릅니다. 감기 또는 인슐린 저하를 줄이기 위해 얼음에 항상 hemolyzed 샘플을 유지.

3입니다. ITT

참고: OGTT (쥐, 혈액, glucometer, 및 석유 젤리 사용의 처리)에 대 한 설명 같은 예방 조치는 ITT 수행할 때 적용 될도 있다. 예를 들어 모든 주사 한다 실시 15 분 이내 1 분 간격으로 15 마우스 동시에 테스트 하는 경우. ITT, 모 세관 튜브와 혈액 샘플의 후속 컬렉션 선택 사항입니다.

1. 실험 전에 준비
   1. 빨리 쥐 쥐 식용 수에 접근이 보장 하면서 인슐린 주입 하기 전에 적어도 2 시간에 대 한 (예를 들어, 오전 8 시 음식 제거, 마우스 테스트 후 2-5 h).
   2. 0.9%에서 인슐린 1:1,000 희석 NaCl (재고: 100 U/mL 인슐린; 작업 농도 0.1 U/mL) 20% 포도 당을 준비 하 고 (D-(+)-포도 당 솔루션에 녹아 증류수) 쥐 될 혈당 관리를.
      참고: 그렇지 않으면 하룻밤 사이에 발생할 수 있습니다는 저 혈당을 피하기 위해 짧은 빠른 동물 금식 후는 ITT 수행 일반적으로 됩니다. 동물에 관리 되는 모든 시 약 약리학 학년 될 필요가 및 살 균.
2. 마우스의 bodyweight 측정 하 고, 꼬리를 표시 하 고 날카로운가 위를 사용 하 여 꼬리 끝을 잘라 한 앞에서 설명한 단계 2.4에서에서 OGTT에 대 한 기저 혈액 포도 당 수준을 측정.
3. 인슐린 주입
   1. Intraperitoneally 인슐린 주사를 (0.75 U 인슐린/kg 몸 무게, 미리 계산), 아저씨 방법으로 마우스를 억제.
   2. 신선한을 사용 하 여, 메 마른 27 또는 30 게이지 바늘을 불편과 어떤 주사 사이트 감염의 위험을 피하기 위해 각 동물에 대 한.
      참고: 피부의 살 균 인슐린 관리, 기간을 연장할 수 있습니다 고 따라서 동물에 추가적인 장애를 발생할 수 있습니다. 따라서, 그것은 권장 하지 않습니다.
   3. 노출 동물의 복 부 측에 약간의 각도에서 아래로 마우스 머리 기울기. 동물의 복 부 (그림 3b)의 더 낮은 오른쪽 사분면에 메 마른 바늘 및 30 ° 각도로 경사와 함께 배치 합니다. 첫 번째 마우스 주입 후에 즉시 타이머를 시작 합니다.
      참고: 낮은 복용량 ITTs (0.1 U/kg) 구체적으로 간 인슐린 감도 평가 하기 위해 수행할 수 있습니다. 관해서는 OGTT, 몸 무게에 따라 주입 볼륨 계산은 표준 절차, 복용량을 내놓고 하는 동안 상체를 신체 질량에 선호 신체 구성 데이터 사용할 수 있는 경우.
4. 선택한 시간 지점 (예를 들어, 15, 30, 45, 60 및 90 분 후)에서 혈당을 측정 합니다.
   참고: 인슐린 쥐¹³에서 ~ 10 분의 짧은 하프 타임으로, 인슐린 관리 (예를 들어, h 2 후) 후 늦은 차이 인슐린 활동의 직접적인 영향을 반영 하지 않을 수 있습니다. 20% 포도 당 솔루션 경우 마우스 된다 혈당 관리 (혈액 포도 당 수준 35 mg/dl)과 죽음의 위험에.
5. 마지막으로 점, 후 음식과 물을 듬뿍 준비 자신의 집 새에 다시 쥐를 놓습니다.

결과

그림 1 규정식에 쥐의 대사 형질에 대 한 도식 시간 테이블을 보여 줍니다. LFD 그룹 컨트롤 그룹으로 될 수 있습니다 약 6 주 나이, 마우스는 HFD에 배치 한다. 중요 한 것은, 몸 무게는 몸 무게 예상된 증가 관찰을 매주 결정 되어야 합니다. 어떤 종류의 스트레스 (예를 들어, 잡음 또는 공격적인 남성 행동) 몸 체중을 방해할 수 있습니다 하 고 즉?...

토론

당뇨병 및 세계의 인구에 관련 된 질병의 높은 보급은 분자 메커니즘,¹⁹질병 치료와 예방, 해결 하는 연구에 대 한 강한 요구. 제시 프로토콜에서는 OGTT와 ITT, 전신 대사 변경의 평가 대 한 강력한 도구는의 전도 서 대사 연구에 사용 되는 강력한 동물 모델 HFD 쥐의 세대에 대 한 확고 방법을 설명 합니다. 같은 인슐린 저항. 이 문서에 소개 된 방법이 의심된 유전자, 환경 요인 뿐만 ...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mouse strain: C57BL/6J	The Jackson Laboratory	664	LFD/HFD
Accu Chek Performa - Glucometer	Roche	6870228	OGTT/ITT
Accu Chek Performa - Strips	Roche	6454038	OGTT/ITT
D-(+)-Glucose solution	Sigma-Aldrich	G8769	OGTT
Actrapid - Insulin	Novo Nordisk	417642	ITT
Reusable Feeding Needles	Fine Science Tools	#18061-22	OGTT; 22 gauge (-24 gauge for young mice)
Omnifix-Fine dosing syringes	Braun	9161406V	OGTT/ITT
Sterican Insulin needle (30G x 1/3"; ø 0.30 x 13 mm)	Braun	304000	ITT; lean mice
Sterican (G 27 x 3/4"; ø 0.40 x 20 mm)	Braun	4657705	ITT; mice on HFD
96 Well PCR Plates, non-skirted, flexible	Braintree Scientific, Inc.	SP0016	OGTT
Ultrasensitive Mouse Insulin ELISA kit	Crystam Chem	90080	OGTT
Rodent Diet with 60% kcal% fat	Research Diets Inc	D12492	mice on HFD
Rodent Diet with 10% kcal% fat.	Research Diets Inc	D12450B	mice on LFD
BRAND micro haematocrit capillary	Sigma-Aldrich	BR749321	OGTT/ITT
Vaseline - creme	Riviera	P1768677	OGTT/ITT