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요약

전송 전자 현미경 검사 법 및 utero에서 변환의 조합을 개발 하는 동안 신경 시스템의 정밀한 열 대권 외의 형태학 적 변화를 공부에 대 한 강력한 접근 이다. 이 결합 된 메서드는 그들의 지형 표현에 관하여 neuroplasticity 기본 구조 세부 사항에 변화에 대 한 깊은 통찰력을 수 있습니다.

초록

현재 연구 관심사의 단백질에 의해 영향을 명확 하 게 확인 된 지형 구조에서 ultrastructural 매개 변수는 정확한 morphometrical 분석에 utero 변환 전송 전자 현미경 (TEM)와 결합 그 바이러스 전송을 통해 유기 체에 도입 되었습니다. 이 결합 된 접근 다음 지형 탐색 지도 조직 아틀라스에서 ultrastructural 식별 macrostructural에서 부드러운 전환에 대 한 수 있습니다. 에-utero-불리고 조직의 고해상도 전자 현미경 계시는 neuropil와 소성 매개 변수, cross-sectioned 시 냅 시스 bouton 지역, 시 냅 스 소포 내 미토 콘 드리 아의 수의 좋은 열 대권 외는 bouton 프로필, 시 냅 스 연락처, cross-sectioned axonal, 수 초 두께, myelin lamellae 수 및 미토 콘 드리 아 프로필의 cross-sectioned 분야의 길이. 이러한 매개 변수의 분석 유전자 구성의 바이러스 성 전송에 의해 영향을 받는 신경 영역에 ultrastructural가 소성의 변화에 대 한 필수적인 통찰력을 보여준다. 이 결합 된 방법만 사용할 수 없는 신경가 소성에 유전자 조작된 생체 약물의 직접 효과 공부 하지만 또한 가능성 (예를 들어, 컨텍스트에서 신경가 소성의 utero 구조 연구 신경 퇴행 성 질병)입니다.

서문

아니 광자는 전자의 깊이 학년에서 ultrathin 조직 표본을 침투 수 있습니다. 이 가벼운 현미경 검사 법 기술에 비해 미세 구조의 나노미터 해상도 이미지를 캡처에 가장 귀중 한 장점을 특성. 예를 들어 가장 미토 콘 드리 아, melanosomes, 등 다양 일 분 비과 립, microtubules, microfilaments, 섬 모, microvilli, 및 세포 접합 (세포 표면 세포내 세포의 시각화 수 있습니다. 전문화), 특히 신 경계1,2,,34synapses. 현재 방법론 연구의 전반적인 목표는 utero에서 변환의 가장 최신의 기술을 결합 하 여 태아 간섭에 따라 개발 하는 동안 신경가 소성에 변화의 ultrastructural 인식 이다. 관심의 virally 인코딩된 단백질 중앙 신 경계5,6,7,6척수 포함 하 여에 utero에서 불리고 되어 있다. 예를 들어, 함께 가장 utero에서 변환 사용 되었습니다 L1 및 핵 수용 체 단백질 사이 상호 작용에 관해서는 특히 L1 불충분 한 쥐에서 소성을 학습 하는 모터에 세포 접착 분자 L1의 효과 공부 하 고 소 뇌 신경7에서.

Neuroplasticity 매개 변수 분석 신 경계 내의 작은 지역의 지역화에 대 한 정확한 정보가 필요합니다. 따라서, 그것은 ultrastructural 세부 사항 및 다른 구조에 관하여 그들의 정확한 지형 방향을 설명 하기 위해 적절 한입니다. 현재 연구에서 특정 준비 방법 빛과 전자 현미경 검사 법에 따라 다른 형태학 분야의 상세한 조사에 제공 됩니다. 이 이렇게 결합 조직 조작, 마우스 뇌와 척수의 utero에 변환 시작 하 고 관류 고정, 다음의 몇 가지 기술을 몰드-포함, 그리고 가장에 대 한 처리 하는 조직. 포함 및 가장에 대 한 조직의 처리 사이 포함 하는 필수적인 단계는의 정확한 microphotographic 및 낮은 확대 설명서에 대 한 허용 간섭 빛 반사 기술을 사용 하 여 조직의 설명서 조직 표본8,,910. 현재 접근에 통합,이 기술은 신경 조직 표면 및 가장에 대 한 그들의 준비에 앞서 표본 조각 프로필의 지형 및 구조 정보를 검토 하는 연구를 수 있습니다.

전체 두뇌를 단면에 대 한 특별 한 프레임 stereotaxic 좌표에 해당 합니다. 이 프레임과 신경 조직에서 영역의 형태 3 차원 (3D) 재건 혜택 형태학 분석에 사용할 수 있습니다. 시각화 된 섹션의 macrographs 지형 좌표를 할당 빌드하고를 순차적으로 번호가 매겨진된 섹션 조직 아틀라스에 지도.

수 지 처리, 후 포함 된 조직 ultrathin 섹션으로 구분 됩니다 (< 70 nm) 위에서 언급 한 조직 아틀라스의 지도 따라 선택된 영역을 포함. 그들의 내용의 및 단지 내에 인접 구조에 연락처의 소성 매개 변수 (예: 횡단면 프로필 영역 시 냅 스 boutons 또는 axonal 섬유)의 고해상도 이미지를 얻기 위해 가장 ultrathin 섹션 대상이 됩니다. neuropil입니다.

여기에 설명 된 방법으로 마이크로-그리고 nanostructures 시각화 된 macrostructures에서 부드러운 전환 utero에서 변환 개발의 긴장 후 형태학 신경가 소성의 비교 심층 연구를 허용 시스템입니다.

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프로토콜

동물 주제에 모든 절차는 함부르크와 노르 트 베스트 팔 렌, 독일의 연방 국가의 기관 동물 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다.  사용 하 여 살 균 기기, 보호 장갑 및 전체 수술을 통해 무 균 코트.

1.에 Utero 변환

  1. PH 7.4에 인산 염 버퍼 염 (PBS)에 원하는 대상 (4 x 1011 바이러스 성 입자 / µ L AAV1의)에 대 한 코딩 adeno 관련 바이러스 타입 1 (AAV1)를 준비 합니다. 빠른 녹색 µ 0.1 mg/L을 추가 하 고 37 ° c.에 AAV1-빠른-녹색 혼합물을 유지
  2. 원하는 모양으로 얇은 모 세관 팁 준비 (길이 80 µ m와 안쪽의 외부 직경 8 m m 50 µ m의 직경), micropipette 끌어당기는 사람을 사용 하 여 (설정: 압력 = 500, 열 700, 풀 = = 0, 속도 = 80, 시간 = 200, 테이블의 자료를 참조 하십시오 < / c1 >). 그것은 4-5 m m 되도록 모 세관의 끝을 휴식.
  3. 모 세관 팁 흡 인기 튜브 (44 cm x 0.7 cm)를 조립 하십시오 그리고 모 세관으로 AAV1-빠른-녹색 혼합물의 15 µ L 발음.
  4. 동물 주제 전체 절차 동안 37 ° C의 일정 한 생리 적 체온 유지.
  5. Preincubation 챔버로 임신 C57Bl/6 마우스 (배아 일 14.5)를 배치 하 고 기체 4 %isoflurane 마우스 anesthetize (0.6-0.8의 체적 공기 흐름 속도와 L/분).
  6. 피하, buprenorphine (몸 무게의 0.1 mg/kg) 주사.
  7. Prewarmed 수술 플레이트 (37 ° C)에 마 취 마우스를 놓습니다.
  8. 윤활제와 함께 눈을 커버.
  9. 마 취 마스크와 마우스에 맞게 (0.6-0.8의 체적 공기 속도로 가스 1.5% isoflurane L/min) 수술 판과 면도 복 부 피부 영역에. 면도 지역을 그리고 betadine 솔루션 3 X 75% 에탄올을 닦아냅니다.
    참고: 마 취 마우스의 호흡 동작을 지속적으로 모니터링 합니다. 마우스의 흡입-증발 기 패턴에 따라 isoflurane 가스의 농도 조정 합니다.
  10. 마우스의 뒷 발 골을 압박 하 여 발바닥의 반사의 부재를 확인 합니다.
  11. 곡선된 톱니 모양의 아이리스 포 셉 (10 cm)와 피부를 재 밌 고 직선 텅스텐 카바 이드가 위 (10 cm), 교육 년 따라 피부를 절단 한 다음, 바로 Dumont 핀셋 (12 c m, 0.2 m m으로 복 벽을 댔 지에 의해 복 부 구멍을 열으십시오 0.12 m m) x (8 cm)가 위 직선 바와 교육 알바 따라 벽을 절단 하 고.
  12. 복 부 오프닝에 한 조각의 fenestrated 파라핀 영화를 놓고 마이크로-모기 hemostatic 집게 (12.5 c m, 곡선)의 양쪽 끝에 영화를 해결 합니다.
  13. 자 궁 뿔 안에 태아 손상을 방지 하려면 숟가락 모양의 장치 자 궁 뿔을 노출 합니다. 자 궁 뿔에 PBS (37 ° C)의 몇 방울 똑 하 고 손해 또는 기형 자 궁 골목 안에 대 한 태아 검사.
  14. 순서와 자 궁 뿔에는 태아의 위치를 문서화 합니다. 주입을 위한 원하는 위치에 도달할 때까지 배아를 자 궁 골목 안에 신중 하 게 설정 합니다.
  15. 시각적으로 검사 하는 사출 사이트 (예를 들어, 뇌 심)와 염료 침투는 stereomicroscope에서 AAV1-빠른-녹색 혼합물의 1-2 µ L를 주사.
  16. 주입 된 배아를 문서화 하 고 복 부 구멍으로 다시 주입된 태아와 자 궁 뿔 장소.
  17. 복 부 구멍으로 PBS (37 ° C)의 몇 방울 똑. 복 벽 (사용 폴 리아 미드 6 0 크기의 봉합)과 피부 (사용 폴 리아 미드 3 0 크기의 봉합), Halsted의 모기 hemostatic 집게 (12.5 c m, 곡선)를 사용 하 여 봉합 하 여 캐비티를 닫습니다. 또는 사용 하 여 간단한 중단된 패턴 또는 스테인리스 봉합/스테이플 복 부 구멍 그리고 피부를 닫습니다.

2입니다. 격리 된 조직 Telemacrophotography

  1. 버퍼의 준비
    1. 녹이는 14.95 g Na2HPO4 의 KH2포4 감동 200 rpm에서 증류수 1 L의 2.18 g Sörensen의 버퍼 (1 리터)를 준비 합니다. 관류의 임신 강아지 및 새끼는 출생에서 기간 사용 바늘의 적절 한 크기 복 부 또는 intragastric 주입에 대 한 하 고 터미널 나트륨 pentobarbital 마 취 농도 180 mg을 초과 하지 않는 다는 것을 확인 / 몸 무게의 킬로그램입니다.
    2. 75 ° C에 증류수 500ml를가 열 하 여 Mugnaini의 고정 솔루션 (5 L)를 준비 하 고 200 rpm, 5의 200 µ L 추가의 감동 아래 paraformaldehyde 분말 50 g을 추가 N NaOH, Sörensen의 버퍼의 추가 1, 500 mL, 1750 mL의 증류수 그리고 25%도 500 mL. 최대 5000 mL 증류수에 채우십시오. 이 마지막 버퍼를 사용 하 여 재 관류에 대 한.
      참고: 후드 Mugnaini의 고정 솔루션을 준비, 보호 안경을 착용 하 고 연기를 피하십시오. 관류의 더 나은 시각화에 대 한 메 틸 렌 블루 (0.05 g/L)를 추가 합니다.
  2. 마우스 관류 및 조직 분리
    1. Transcardially perfuse (배아 연구)의 경우 transduced 배아 또는 표준 절차6,7에 따라 원하는 나이 (예를 들어, 출생 후 하루 24)에 태어난된 transduced 술집 임신 쥐 11,12,13,14,15,,1617, 복 터미널 sodium pentobarbital을 사용 하 여 마 취 (200 mg/kg의 몸 무게).
    2. 마우스 transcardially 주입 덤플링 솔루션 (500 U) 쥐를 고취 26 G, 바늘으로 하 고, 고정, 전에 1을 사용 하 여 시체에서 피를 제거 하 고 그들에 게 40 ° C prewarmed Mugnaini의의 30 mL와 함께 transcardially를 perfuse에 PBS의 10 mL와 함께 transcardially 고정 솔루션입니다.
      참고: 성인 쥐에 대 한 복 부 대동맥14를 통해 대체 역행 관류를 수행 합니다.
    3. (예를 들어, 뇌 또는 척수)의 perfused 조직 분리 하 고 후 위 4 ° c.에 다른 24 h에 대 한 Mugnaini의 고정 솔루션의 적어도 10 mL에 조직
    4. 조직을 실 온에서 3 h에 대 한 PBS의 10 ml 씻으십시오.
  3. Agarose, 문서에 포함 하 고 단면
    1. 재현할 수 단면 각도8,,910특별 한 프레임에 고립 된 조직 (예를 들어, 뇌)를 조정 합니다. 또는, 조정 가능한 절단 두께 vibratome를 사용 합니다.
    2. 신경 조직 프레임에 배치 하 고 telemacrography에 대 한 조직 조정 좌표를 문서화 합니다.
    3. 3% 낮은 녹는 agarose 포함 매체 준비: Sörensen의 버퍼의 100 ml에서 agarose의 3 세대를 추가 하 고 90 ° c 물 욕조에 섞어가 열
    4. 조직을 포함 하는 프레임에 3 %agarose (30 ° C)를 붓는 다. 따뜻한 금속 블록과 프레임을 커버 하 고 경화 될 때까지 기다립니다. 경화, 동안 포함 된 조직 및 그것의 좌표 프레임 내에 이미지를 telemacrographic 장치를 사용 합니다.
    5. 절단 간격에 해당 하는 첫 번째 프레임의 좌표와 agarose 임베디드 조직 프레임으로 전송.
    6. 원하는 두께 (예를 들어, 1.5 m m)의 섹션으로 얇고 진동 면도날으로 장치 내장된 조직 컷 ( 재료의 표참조).
      참고: 면도날의 활공을 높이기 위해 내장된 조직에 글 리세 린 몇 방울 똑.
    7. PBS의 각 조직 섹션 이미지와 폴더에 이미지를 수집 합니다.

3. 전송 전자 현미경 검사 법에 대 한 격리 된 조직 준비

참고: 후드 아래 떨고 플랫폼에 단단히 closable 뚜껑 유리 접시에 외피의 모든 추가 단계를 수행 합니다.

  1. PBS에서 2 x 30 분 조직 단면도 씻어. 실 온에서 2 h의 2% 수성 오스뮴 tetroxide 솔루션 (OsO4) 섹션을 품 어.
    주의: 오스뮴 tetroxide 독성 이며 그것은 피부와 접촉할 때 유해할 수 있습니다.
  2. PBS에서 2 x 30 분 osmicated 섹션을 씻어.
  3. 10-15 분 동안 실 온에서 30%, 50%, 70% 에탄올에 섹션을 품 어 (옵션: 4 ° C에서 70% 에탄올에서 밤새 품 어).
  4. 이미지 왼쪽 및 45 °의 각도로 오른쪽에서 샘플에 적용 되는 LED RGB 빛8,9,10 (2 x 15w)에서 70% 에탄올에 osmicated 표본. 검은 요리와 지루한 검은 백그라운드를 사용 하 여 산란 하 고 조명 하는 동안 빛의 반사를 최소화 하기 위해.
    주의: 이미징 동안 건조 섹션을 허용 하지 않습니다.
  5. 시리즈는 폴더에서 이미지를 수집 하 여 좌표 섹션 이미지의 아틀라스를 만듭니다.
  6. 100% 에탄올 (2 x 30 분)과 상 온에서 100% 프로필 렌 산화물 (2 x 30 분)에서 표본 품 어.
    주의: 솔루션을 변경 하는 동안 건조 섹션을 허용 하지 않습니다.
  7. 부드럽게 유리 바 교 반 하면서 수 지의 260 mL 유리 용기 무수 물 dodecenylsuccinic의 240 mL 믹스. 이질성, 거품, 및 얼룩에 대 한 정기적으로 확인 합니다. 아주 부드럽게, 적어도 45 분 동안 손으로 저 어.
  8. 수 지/프로필 렌 산화물 1: 2와 1: 1의 비율로 준비 하 고 추가 3% 가속기 (2,4,6-Tris(dimethylaminomethyl)phenol).
  9. 1:2 단계에서 3.8 2 h를 누른 1:1 포함 솔루션에서 단계에서 3.8 2 h에 대 한 실 온에서 회전 바퀴에 솔루션을 포함 조직 품 어.
  10. 조직 평면 폴 리 프로필 렌 요리에서, 신선한 수 지 3% 가속기를 포함 하는 조직 커버 놓고 12 24 h에 대 한 65-85 ° C에서 임베디드 조직 치료 합니다.
  11. 포함 된 조직 실내 온도에 아래로 냉각 하 고 폴 리 프로필 렌 요리에서 수 지 포함 견본을 제거.

4. 정량 분석에 대 한 Ultrastructural Neuroplasticity 매개 변수 선택

  1. 관심의 영역을 매핑
    1. 관심 (예를 들어, 해 마 또는 소 뇌)의 영역을 선택 하 고이 지역에 있는 아틀라스 (3.5 단계)에서 이미지를 선택 하 여 섹션 아틀라스에서 영역을 지역화.
    2. 섹션 이미지에 관심 분야의 경계를 스케치 하 고 찾기/첨가 수 지 표본에 지역 경계.
    3. 스크래치 마크는 미세 바늘 게이지 (26 G, 1)를 사용 하 여 수 지 표본에 관심 (예를 들어, 해 마 또는 소 뇌)의 영역의 테두리.
    4. 트리밍에 대 한 수 지를 부드럽게 하거나, 또는 트리밍 장치를, 얇은 잎, 또는 사 포를 사용 하는 오븐에서 85 ° C를 수 지 표본 열.
    5. 면도날으로 수 지 표본에서 관심 영역을 삭제할 ( 재료의 표참조). 접착제 (직경 8 mm)와 1 cm의 길이 예를 들어, 필요한 구경의 아크릴 유리의 바에는 견본을 탑재 합니다. 세미-ultrathin 단면화 및 탑재 된 견본을 정돈 한다.
    6. Semithin (0.75 µ m) 준비와 ultrathin (70 nm)는 ultramicrotome를 사용 하 여 잘린된 영역 섹션: 0.75 µ m 두께 1.5 m m/s 및 70 nm 두께 0.7 m m/s에 그것을 설정.
    7. 유리 캐리어 semithin 섹션을 수집 하 고 1% 톨루이와 섹션 (4 분)에 대 한 PBS에 블루 얼룩.
    8. 섹션 이온된 수에 여러 번 씻는 다. 얼룩진된 섹션 4 x를 사용 하 여 가벼운 현미경 검사 (0.1 ∞의 나 /-), 10 (0.22 ∞/0.17의 없음), x 40 (0.65 ∞/0.17의 없음), x (1.25 ∞/0.17의 없음) 목표 x 100.
    9. 니켈 격자에 ultrathin 섹션을 수집 합니다. 180에 가장을 격자를 주제로 kV 및 3, 200 x, 6, 000 x, 및 8, 000 배 확대.
  2. TEM 분석
    1. 양적 TEM 분석 (예를 들어, 소포 및 미토 콘 드리 아 또는 myelinated 및 nonmyelinated 축 삭 boutons)에 대 한 관심의 ultrastructural 매개 변수를 선택 하 고 이러한 매개 변수 3, 500 x, x 6000 및 8000 x 배율 TEM 이미지.

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결과

쥐의 안정적이 고 빠른 마 취에 대 한 수많은 안전 매개 변수 고려 되었다, 하 고 마 취 단위의 최적화 된 작업 영역 적절 한 (그림 1A)으로 판명. 단위는 쥐와 쥐와 같은 작은 동물에 성공적인 수술에 필요한 정밀 액체 isoflurane 및 주위 공기의 혼합을 제어 하도록 설계 되었습니다. 공기와 isoflurane 원하는 설정에 따라 기화 기에 혼합 하 고 ?...

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토론

Utero에서 변환의 중요 한 단계는 주입. 정확한 주입 뇌 심 또는 관심의 다른 영역으로 경험 및 실습 기술 필요합니다. 얇은 microcapillary 팁, 덜 조직 손상이 발생할 수 있습니다; 그러나,이 사출 압력을 증가 하는 비용입니다. Utero electroporation19,20,,2122, 달리 utero에서 변환 후 삽입 된 배아의 생존 율은 아?...

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공개

저자는 공개 없다.

감사의 말

저자는 그들의 지원 및 동물 관리에 대 한 의료 학부, Ruhr 대학 보 훔에 동물 시설의 동료를 감사합니다.

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자료

NameCompanyCatalog NumberComments
2,4,6-Tris(dimethyl-aminomethyl)phenolServa36975
26 G x 1'' needleHenke-Sass, Wolf GmbH
410 Anaesthesia Unit for air pumpBiomedical Instruments (Univentor)8323102
Adeno-associated virus serotype 1 (AAV1)UKE (Viral Core Facility)-For references and target areas of AAV1 see: https://www.addgene.org/viral-vectors/aav/aav-guide/ and also: Designer gene delivery vectors: molecular engineering and evolution of adeno-associated viral vectors for enhanced gene transfer. Kwon I, Schaffer DV. Pharm Res. 2008 Mar;25(3):489-99. Recombinant AAV viral vectors pseudotyped with viral capsids from serotypes 1, 2, and 5 display differential efficiency and cell tropism after delivery to different regions of the central nervous system. Burger C, Gorbatyuk OS, Velardo MJ, Peden CS, Williams P, Zolotukhin S, Reier PJ, Mandel RJ, Muzyczka N. Mol. Ther. 2004 Aug;10(2):302-17. Self-complementary recombinant adeno-associated virus (scAAV) vectors promote efficient transduction independently of DNA synthesis. McCarty DM, Monahan PE, Samulski RJ. Gene Ther. 2001 Aug;8(16):1248-54.
AgaroseSigma-AldrichA9414low gelling agarose
Air PumpBiomedical Instruments (Univentor)Eheim 100
AralditeCIBA-GEIGY23857.9resin for embedding of tissue
aspirator tune assembliesSigma-AldrichA5177-5EA
Breathing Mask Mouse Anodized AluminiumBiomedical Instruments (Univentor)-
buprenorphineTemgesicampulespainkiller
capillariesScience-ProductsGB100TF-10with fillament
Dodecenylsuccinic anhydrideFluka44160
Dumont tweezers (#3, 12 cm, straight, 0.2 x 0.12 mm)FST11203-23
electric shaverPhillips-
Ethicon sutures (Ethilon, 6-0 and 3-0)Ethicon-polyamide
eye lubricantBepanthene-
Fast GreenSigma-AldrichF7252for visualization of injected liquids
Gas Routing Switch 4/2 connectorsBiomedical Instruments (Univentor)8433020
halsted Mosquito hemostatic forceps (12.5 cm, straight)FST13011-12
Heparin-NatriumRatiopharm25 000 I.E./5 mL
Induction box for mice
with horizontally moving lid.
Inner dimensions: LxBxH: 155 mm x 115 mm x 130 mm.
Wall thickness: 6 mm		Biomedical Instruments (Univentor)-
iris forceps (10 cm, curved, serrated)FST14007-14
iris scissors (11 cm, straight, tungsten carbide)FST14501-14
Isofluran OP Tisch, electrically heated, sm
Outer dimensions: 257mm x110 mm x 18 mm.
Heating area: 190 mm x 90 mm
The removal of the isoflurane escaping
the breathing mask is downwards in compliance with the
regulations		Biomedical Instruments (Univentor)-
isoflurane (Attane)JD medicalinhalation anesthesia
LED RGB lightsCameoCLQS15RGBWLEDs 2 x 15 W
Light microscope Basic DM ELeica-4x (N.A. 0.1 ∞/-), 10x (N.A. 0.22 ∞/0.17), 40x (N.A. 0.65 ∞/0.17), 100x (N.A. 1.25 ∞/0.17) objectives
micropipette pullerScience-ProductsP-97
Mosquito hemostatic forceps (12.5 cm, curved)FST13010-12
Nickel grids, 200 meshTed Pella1GC200
Osmium (VIII)-oxidDegussa73219
Propylene oxideFluka82320
razor bladesSchick87-10489
Sodium pentobarbital (Narcoren)Merial GmbH-
TC01mR 1-Channal temperature controller with feedbackBiomedical Instruments (Univentor)-
Technovit 4004 two components glueKulzer
TelemacrodeviceCanon-Canon Spiegelreflex Kamera EOS2000D, EF-S 18-55 mm f/3.5-5.6 IS STM Objective, Extension below 150 mm, Manual Extension Tube 7 mm ring, 14 mm ring, 28 mm ring, Macro reverse ring (58 mm), Canon copy stand.
Thermopuller P-97Sutter Instruments-
thin vibrating razor blade deviceKrup-with Szabo thin blades
toluidine blueSigma-Aldrich89640
Transmission electron microscope C20Phillips-up to 200 kV
Tygon 6/4 Tubing material for connection of all parts
Outer diameter: 6 mm
Inner diameter: 4 mm
Wa
ll thickness: 1 mm		Biomedical Instruments (Univentor)-
Ultracut EReichert-Jung-ultramicrotome
Univentor ScavengerBiomedical Instruments (Univentor)8338001
Vannas scissors (8 cm, straight)FST15009-08

참고문헌

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  7. Kraus, K., et al. A Fragment of Adhesion Molecule L1 Binds to Nuclear Receptors to Regulate Synaptic Plasticity and Motor Coordination. Molecular Neurobiology. 55, 7164-7178 (2018).
  8. Andres, K. H., von Düring, M. Interferenzphänomene am osmierten Präparat für die systematische elektronenmikroskopische Untersuchung. Mikroskopie. 30, 139(1974).
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