안락사된 2개월에서 6개월 된 임신한 암컷 마우스에서 해부한 배아를 1% 태아 소 혈청이 포함된 차갑고 완전한 배지에 넣는 것으로 시작합니다. 배아에서 자궁내막 조직, 태반, 난황낭을 5배 배율로 제거한 후 집게를 사용하여 배아 심장 부위에서 심장 전구체를 해부합니다. 1.5 밀리리터 마이크로 원심 분리기 튜브에서 5 개의 마우스 배아에서 해부 된 모든 심장 부위를 꺼내 섭씨 4도까지 미리 냉각 된 스윙 버킷에서 원심 분리합니다.
상층액을 제거하고, 조직 배양 등급 PBS 1 밀리리터로 조직을 세척한다. 튜브를 섭씨 4도에서 1분 동안 300G에서 원심분리합니다. 이어서, 상청액을 제거하고, 1 밀리리터 PBS로 2회 세척을 반복한다.
완료되면 PBS를 0.05% 트립신-EDTA로 교체합니다. 원심분리하고 0.05% 트립신-EDTA로 두 번의 세척을 반복합니다. 조직을 소화하려면 50 마이크로 리터의 0.05 % 트립신 -EDTA를 넣고 섭씨 37도에서 10 분 동안 가열합니다.
다음으로, 넓은 오리피스 필터 팁을 사용하여 현탁액을 위아래로 흡입하여 5분 후에 부드러운 기계적 해리를 적용합니다. 해리된 세포에 350마이크로리터의 완전한 배지를 추가하여 트립신 소화 활성을 비활성화합니다. 세포 현탁액을 40마이크로미터 세포 여과기를 통해 통과시킵니다.
갓 해리된 세포 현탁액을 원심분리하여 동결을 위해 세포를 준비합니다. 상청액을 조심스럽게 제거하고 1 밀리리터의 냉장 냉동 매체에 펠릿을 다시 현탁하십시오. 세포 현탁액을 예냉된 냉동 바이알에 옮기고 극저온 바이알을 예냉된 냉동 용기에 넣습니다.
냉동 용기를 섭씨 영하 80도에 4-8시간 동안 두었다가 시퀀싱 실험을 위해 액체 질소로 옮깁니다.
