Nuclei Isolation from Cardiac Progenitor Cells

시작하려면 70% 에탄올과 RNase 제거 용액으로 작업장과 재료를 청소하십시오. 용해 완충액, 용해 희석 완충액, 0.1 x 용해 완충액을 새로 준비하고 완충액을 세척하고 완충액을 얼음 위에 유지합니다. 스윙 버킷 원심 분리기를 섭씨 4도까지 미리 냉각합니다.

스윙 버킷 원심 분리기에서 심장 전구 세포 현탁액을 원심 분리합니다. 튜브 바닥을 건드리지 않고 모든 상층액을 부드럽게 제거합니다. 100 마이크로리터의 냉각된 0.1 x 용해 완충액을 세포 현탁액에 첨가하고, 이를 10회 피펫팅하여 혼합한다.

얼음에서 5 분간 배양 한 후 1 밀리리터의 식힌 세척 완충액을 넣고 혼합하십시오. 현탁액을 원심분리한 후, 상층액을 제거하고, 차가운 세척 완충액으로 세척을 2회 더 반복한다. 희석된 핵 완충액을 준비합니다.

핵 완충액에 핵을 재현탁한 후 핵 저장 용액을 얼음 위에 놓습니다. 분리된 핵의 품질을 핵막 형태 평가에 의해 평가했을 때, 분리된 핵은 명시야 현미경 하에서 매끄럽고 균일하게 둥글게 나타났으며, 이는 효과적인 분리 과정을 나타냅니다.