mPSC를 transfection한 후 6웰 플레이트에서 배지를 흡입합니다. 그런 다음 각 우물에 200마이크로리터의 트립신을 추가합니다. 휘젓고 섭씨 37도에서 30초 동안 배양합니다.
접시의 측면을 두드리고 200마이크로리터의 얼음처럼 차가운 FACS 버퍼를 추가합니다. P200 피펫을 사용하여 각 웰의 내용물을 혼합하여 세포를 제거하고 단일 세포 용액을 만듭니다. 각 웰에서 96웰 플레이트의 적절한 웰로 200마이크로리터를 옮깁니다. 플레이트를 300G에서 5분 동안 원심분리합니다.
원심분리 후 유세포 분석기에서 샘플을 실행하기 전에 펠릿을 150마이크로리터의 FACS 완충액에 재현탁시킵니다. 역형질주입과 비교했을 때, 전방 transsection은 마커에 양성인 세포의 비율이 현저히 낮았습니다. 흥미롭게도, forward Transfect는 평균적으로 세포 집단에 현저하게 적은 양의 DNA를 전달하지 않았습니다.
역방향 절개에서 배양 시간은 리포터 양성 세포의 비율에 유의한 영향을 미쳤습니다. 그러나 양성 세포에서의 평균적인 리포터 발현은 배양 시간의 영향을 받지 않았습니다. poly transfection과 co-transfection 모두에서, forward transfection은 reverse transfection에 비해 선택된 종말점에 존재하는 세포의 수를 유의하게 감소시켰습니다.
역 다중절편(reverse poly-transection)의 경우, 더 높은 transfection 효율과 잘 표현된 DNA 비율의 더 넓은 동적 범위가 관찰되었습니다.
