펩타이드 하이드로겔에서 대장암 유래 오가노이드의 면역염색

먼저 펩타이드 하이드로겔 20마이크로리터 방울을 24웰 플레이트에 피펫팅합니다. SW1222 세포주의 800개 세포를 4일 동안 각 웰에 파종합니다. 넷째 날에 배지를 피펫팅합니다.

PBS로 각각 두 번 잘 씻으십시오. 그런 다음 400마이크로리터의 4% 포름알데히드 용액을 우물에 추가합니다. 배양이 완료되면 P1000 피펫 팁을 사용하여 포름알데히드 용액을 흡입합니다.

그런 다음 PBS로 우물을 한 번 더 씻으십시오. 1m리터의 투과화 완충액에 세포를 실온에서 30분 동안 배양합니다. 완충액을 피펫팅하고 PBS로 웰을 세척한 후 0.5mL의 차단 완충액을 추가합니다.

이제 차단 버퍼를 제거한 후 PBS로 웰을 세척합니다. 그런 다음 200 마이크로리터의 희석된 1차 항체를 웰에 피펫팅합니다. 접시를 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다.

P200 피펫 팁을 사용하여 용액을 제거합니다. 그런 다음 PBS 용액으로 우물을 씻으십시오. 다음으로, 희석된 2차 항체 바이알에 팔로이딘 접합체를 1:40의 비율로 추가합니다.

이 혼합물을 플레이트의 웰에 피펫팅합니다. 그런 다음 어두운 곳에서 3 시간 동안 실온에서 접시를 배양하십시오. 용액을 흡입하고 PBS로 웰을 세척한 후 각 웰에 300마이크로리터의 DAPI 용액을 피펫팅합니다.

배양 후 용액을 피펫팅한 후 PBS로 웰을 다시 세척합니다. 접시를 섭씨 4도에서 최대 7일 동안 보관하십시오. 면역염색 결과 비생물기능성 펩타이드 P, 생체기능성 펩타이드 P1 및 Matrigel에서 발견되는 오가노이드가 정점 및 기저막에 국한되어 있음을 보여주었습니다.

비생물학적 기능성 펩타이드 P는 기저막에서 세포-세포 접합 발현을 유도했습니다.