Quorum Sensing의 억제를 평가하기 위해 Thiophenesulfonamides를 사용한 E. coli 배양 처리

시작하려면 Lysogeny 육수 또는 LB 배지를 얻고 배지에 항생제를 첨가하십시오. 5ml의 배지를 캡이 있는 멸균 시험관에 분취합니다. 냉동고 재고에서 채취한 플라스미드를 발현하는 Escherichia coli 균주를 배지에 접종하고 밤새 셰이커에서 배양액을 배양합니다.

다음으로, DMSO와 와류에 10밀리몰 티오펜 설폰아미드 용액을 준비하여 잘 섞습니다. 15 밀리리터의 원뿔형 튜브에서 채취한 10 밀리리터의 배지에 배양액을 1-100회 역희석합니다. 소용돌이를 잠깐 섞습니다.

96웰 플레이트의 적절한 웰에 배양액을 추가합니다. 혼합 후 A행에서 E행까지 희석 시리즈를 준비하여 매번 50마이크로리터의 용액을 옮깁니다. 미세 다공성 테이프로 플레이트를 덮고 배양합니다.

테이프를 제거한 후 플레이트 리더를 사용하여 600나노미터 GFP 및 mCherry에서 광학 밀도를 판독합니다. 마지막으로, 데이터를 셀당 정규화된 형광으로 기록하고 플로팅합니다. 3-티오펜 설폰아미드 화합물에 대한 데이터는 화합물 1A 및 3B가 각각 다른 정도로 LuxR/HapR을 억제하는 반면 2B는 활성이 없음을 시사했습니다.