저자는이 문서에 사용 실험 조직을 수집 할 수있는 기회를 제공하기 위해 라이언 채플린 켄터키 고기 연구소와 동물 식품 과학과의 대학의 박사 그레그 Rentfrow을 인정합니다.

살아있는 동물을 사용하지 않았기 때문에 본 연구에 사용 된 절차는 켄터키 동물 관리 및 사용위원회의 대학의 승인을 필요로하지 않았다. 여기에 사용 된 시료의 수집에 앞서, 모든 동물은 고정 볼트 기절 exsanguinated되었다. 이 켄터키 대학의 연방 정부 검사 도축장 시설에서 실시했다. 미국 농무부 식품 안전 검사국의 공식 대표는 시체의 살아있는 동물과 처리 처리 모든 활동을 관찰했다. 계측의 1 준비 <ol><li> 실험의 시작 조직 샘플의 모음 사이의 시간, 장비 설정을 최소화하고 (추가 인원이 가능한 경우 나, 이러한 작업이 동시에 발생할 수있다) 실험 조직을 수집하기 전에 버퍼를 제조 하였다. NOTE : 이것은 조직 실험을 실시 가능한 남아있는 시간의 가장 큰 양을 제공하지만, 일부뿐만따라서 그것은 일반적으로 가능한 한 일찍 시작하는 것이 바람직하다, 실험은 오랜 기간 동안 실행할 수 있습니다 (또는 하루에 여러 실험을 완료하는 욕망이있다). </li><li> 전원을 연결 컴퓨터, 데이터 수집 장비, (버퍼 (들)) 수조와 myograph 장치 (들). myograph 장치 (들)에 교정 장치를 놓고 온도를 미리 설정 따뜻하게 단위 및 교정 장비 (37.5 ° C로 사전 설정) myograph 열을 켜고 수 있습니다. <ol><li> 컴퓨터에서 이전에 만든 차트 소프트웨어 설정 파일을 열고 실행을 시작합니다 (그러나 데이터를 수집하지 않음). </li></ol></li><li> 10 분 동안 장비를 따뜻하게. <ol><li> 데이터를 수집 시작합니다. </li><li> 모든 채널을 제로. </li><li> 확인하고, 인증 된 중량에 의해 공급이 g-포스로 그 채널과 연관된 각 힘 센서로부터 공급 된 전기 신호를 표준화하기 위해, 각 채널 (multimyograph 당 4 채널)에 (필요한 경우) 캘리브레이션을 수행. </li><li> 교정 및 단위 변환을 완료 한 후에, g 등의 모든 후속 데이터를 저장한다. 각 개별 기관의 욕망에 따라 적절하게 변경; 장비 및 소프트웨어는 milliNewtons 볼트와 같은 다른 장치의 사용을 허용한다. </li></ol></li><li> 가스 라인이 막혀 않은 지 확인하고 (들) 단위를 myograph하는 가스 공급 (95 %, O2 / 5 % CO 2)를 켭니다. 지속적으로 전체 절차를 수행하는 동안 (myograph 챔버에서) 모든 버퍼를 기체. </li><li> 70 % 에탄올 모든 myograph 챔버를 작성하고 10 분 동안 담근 에탄올을 제거하고 두번째 10 분 담가에 대해 반복합니다. <ol><li> 에탄올을 제거한 후, 챔버에서 버퍼의 세번째 추가를 떠나 준비된 버퍼 (버퍼 준비를위한 제 2 절 참조) 세 린스 다음에 탈 이온수로 3 회 씻어. 참고 : 버퍼와 조직이 준비 될 때까지이 시점에서 장비는이 상태에서 유휴 상태를 유지할 수 있으며, 직원은 experimen 진행 준비가되어 있습니다t. </li></ol></li></ol> 버퍼의 2 준비 <ol><li> 11.1 mM의 D-글루코오스의 최종 농도를 달성하기위한 교통 및 조직 샘플의 처리에 사용하기위한 1 L-Henseleit 크렙스 완충액을 준비한다; 1.2 mm의 4 황산; 1.2 mM의 KH 2 PO 4; 4.7 밀리미터의 KCl; 118.1 mM의 NaCl을; 3.4 mM의 염화칼슘이; 24.9 mM의 탄산 수소 나트륨. <ol><li> 저어 접시에 탈 물을 약 900 ㎖ 중에 크렙스 염 9.6 g을 섞는다. </li><li> 원하는 버퍼의 L 당 2.1 g의 중탄산 나트륨 다음에 0.373 g 염화칼슘 탈수 섞는다. </li><li> 95 %, O2 / 5 % CO 2와 함께 20 분 동안 가스 완충액. </li><li> L. 1로 볼륨을 조절, 가스 처리 후 7.05로 산도를 조정 (최종 목표 pH가 7.4이되어야합니다 버퍼의 여과 산도를 증가) </li><li> 필터를 사용할 준비가 될 때까지 4 ° C에서 깨끗한 멸균 한 L 매체 병 및 저장 버퍼로 버퍼를 소독. </li></ol></li><li> 별도의 크렙스-H를 준비크렙스 - Henseleit이 수축 실험과 관련된 추가 화합물과 버퍼 수송을위한 2.1 단계에 설명 된대로 myograph 실험에 사용 enseleit 완충 용액. 참고 : 일반적으로이 L이 문서에서 설명하는 실험에 충분하지만,이 볼륨이 증가하거나 실험의 길이에 따라 감소 될 필요가있다, myograph 챔버, 및 (치료 추가에 대해) 수의 버퍼 교체의 수입니다. <ol><li> 가스 처리 단계 (단계 2.1.3) 이전에, 9.1 mg의 추가 버퍼 데시 프라 민 염산의 (버퍼의 L 당 준비되고있다). </li><li> 프로프라놀롤 염산의 1.0 μM 솔루션을 준비하고 크렙스 - Henseleit 완충 용액이 용액 (준비되고 버퍼의 L 당) 1 ㎖에 추가합니다. 사용의 일에이 버퍼를 확인하고 myograph 작동 온도 (myograph에서 37.5 ° C 온도를 산출 온도)에 보관하십시오. 참고 : 데시 프라 민은 생체 아민 재 흡수 메커니즘을 억제하기 위해 추가더 빠르게 발생하도록 혈관 입욕 버퍼로부터 추가 실험 정화를 허용. 프로프라놀롤의 추가는 수용체 아드레날린을 β하는 치료 화합물의 결합을 비특이적을 방지 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 3 수집 및 혈관의 제조 <ol><li> 가능한 한 빨리, 시체에서 위장관를 제거합니다. 동물이 더 이상 무의식적 인 반사를 전시하면, 머리를 제거하지 숨길 다음 수직으로 시체를 올립니다. 시체에서 위장 육부 (항문 식도)의 제거가 승인 도축장 직원 (&lt;20 분의 시간에서 멋진의)에 의해 완성되어야한다. 참고 : 일반적으로 장관이 표준 운영 절차 또는 시설의 직원이 다음에 연방 정부가 위임 절차와에서 수집되는 위치 / 시설로 제한됩니다 얼마나 빨리. <ol><li> 대부분의 시설에서, 위장관의 조작을 실시식량 공급을 입력 운명 사체의 처리에서 별도의 위치에서. 위장관은 촬영과 조사를 위해 밖으로 확산 될 수있는 근처의 편리한 위치를 사용합니다. </li></ol></li><li> 위장관이 확산되면, 소장, 맹장에 소장을 연결하는 회맹 배 및 회맹 배 (그림 1A)에 인접 연장 회장 플랜지를 식별합니다. <ol><li> 메스 나 칼을 사용하여 매우 가볍게 회장 플랜지의 중심 장간막 막에 절개. 두 집게 손가락을 사용하여, 퉁명스럽게 장간막 혈관 (그림 1B)를 노출 지방과 결합 조직을 멀리 해부. </li></ol></li><li> 장 장간막에서이 플랜지 또는 팽창에서 여러 가지를 해부 (~ 길이 2cm) 회장 (그림 1C)의이 부분을 지원하는 노출 장간막 동맥과 정맥 번들. <ol><li> U 경우조직을 파악 직접 파악 또는 손상에 부정적인 조직의 성능 (14)에 영향을 줄 수 스트레칭의 일종으로 그들을 제거하는 동안의 모든 혈관을 잡아 당기지하는데주의를 기울여야하는 집게를 노래. 혈관 제거는 가장 제거 될 섹션의 각 단부에 걸쳐 절단 한 다음 이제 격리 구역에 함께 또는 병렬로 절단함으로써, 수행된다. 편의를 위해 선박 집게 한 쌍의 파악하기 위해 일부 조직을 제공하기에 따라 주변 조직의 일부를 제거합니다. </li><li> 포셉 쌍, 차가운 얼음-Henseleit 크렙스 완충액을 함유하는 튜브에 조직 샘플을 담그고 처리 실험실에서 발생할 수있을 때까지 얼음 상에 저장한다. </li></ol></li><li> 절삭면이나 배양 접시에서 조직 샘플을 놓고 부분적으로 차가운 얼음 크렙스 - Henseleit에 잠수함. <ol><li> 범위 # 5 보석상 집게, 노이스 홍채 가위를 사용하여 램프를 확대 또는 해부,주의 깊게 주변의 지방과 니플을 멀리 해부 (5.0 배의 배율 2.5은 충분하다)조직을했습니다 및 동맥과 정맥을 분리합니다. 섹션의 일단에 개구 용기를 식별하고 신중 집게로 용기를 둘러싸는 밴드를 파악. </li><li> 가위로 잘라 올려 근막 아래에 가위의 끝을 밀어 용기에 평행합니다. 초기 절개 한 후, 지방 및 결합 조직은 가위로 상기 양측을 절단하여 용기로부터 분리 될 수있다. 선박 벤치에 소요되는 시간을 최소화하면서 혈관이 가능한 깨끗한 지 확인합니다. </li><li> (샘플 수집 후 최대 24 시간 동안 저장하고 여전히 유효 수축력 데이터를 생성 상태를 유지 할 수 있습니다) 4 ° C에서 신선한 크렙스 - Henseleit 버퍼와 저장소의 튜브에 혈관을 돌려줍니다. </li><li> 면도날을 사용하여, 슬라이스 용기가 2 mm 부의 원하는 수로 myograph에 사용되는 (그것은 일관된 단면을 얻기 위해 조직 슬라이서를 사용하는 것이 도움이된다). </li><li> 해부 SCO 아래의 각 부분을 검사PE (12.5X 배율)은 각 섹션 실수 해부 청소하는 동안 수행 더 이상, 지점, 밸브, 또는 표면 손상이 없음을 확인합니다. 이상 징후, 분기, 밸브, 또는 표면 손상이있는 경우 혈관 부분을 교체합니다. </li></ol></li><li> myograph 챔버 (일반적으로 &lt;30 분)에 장착하기위한 준비가 될 때까지 C 얼음 또는 4 °에서 (크렙스 - Henseleit 버퍼에 빠져들) 점포 허용 썰어 용기 섹션. </li><li> 부드럽게 루멘을 통해 지원을 삽입하여 myograph에 선박을 탑재하고 2-3그램 읽기 위의 혈관을 스트레칭하지 않도록주의하면서 (myograph에 micropositioner 사용) 장력을 증가시킨다. </li><li> 모든 챔버가 적용되면, 모든 방에서 버퍼를 진공 청소기로 청소 및 버퍼의 5.0 ㎖로 채우고 평형 기간과 실험을 시작하기 15 분 타이머를 시작합니다. </li></ol> (4) 실험 <ol><li> 안정한 고해상도를 달성하기 위해 1.5 시간 동안 모든 용기 섹션을 평형화1.0 g의 팅 장력. <ol><li> 크렙스 - Henseleit 배양 버퍼마다 15 분 교체합니다. </li><li> 평형 동안 지속적으로 2g에 혈관 부분에 긴장을 조절하고 약 0.80 g까지 휴식을 취할 수 있습니다. 선박 (그들은 마운트를 미끄러 져 있음)을 너무 많이 긴장을 허용하지 않도록하십시오. 선박이 조정을 필요로하지 않고 1g 장력을 보유하고 안정된 기준 긴장을 달성하기 위해보십시오. </li></ol></li><li> 평형화 동안의 KCl 수용액 1.32 M 용액이 참조로서 사용되도록 준비한다. </li><li> 만족스러운 평형의 완료 후, 용기를 목욕 5.5 ml의 용액에 0.12 M 용액에 결과에 1.32 M의 KCl 용액 500 μl를 추가합니다. <ol><li> 이 외에도에서 최대 반응은 조직 생존력을 평가하기 위해 사용되며, 행 (처리 된 데이터를 정규화하는 등의 농도 응답을 사용할 수있는 수동 장력을 조정할 수 없어, 1.32 M KCl을 첨가 이어gonist). </li><li> 장력이 1.0 g의 기준 값으로 돌아올 때까지 15 분 간격으로 버퍼를 교체합니다. </li></ol></li><li> 기준선에 도달하면, 버퍼를 변경 함과 동시에 1 분 타이머를 시작한다. 시작 시간의 경이적인을 방지하기 위해 동시에 모든 챔버에 대해이 작업을 수행합니다. <ol><li> 추가 할 수있는 기준을 흔든다은 1 분 카운트 다운 동안 챔버 (1)에 대한 설명을 준비합니다. </li><li> (이 총 부피의 0.5 % 미만을 유지 치료) 실험 지시로서 각 챔버에 25 ㎕의 분취 액에 기준을 추가한다. </li><li> 최종 표준이 추가되면, 9 분 타이머를 시작한다. </li><li> 구 분 표준 인큐베이션의 끝에, 처리 챔버에서 함유 완충액을 제거하고 신선한 완충액 5.0 mL를 넣고 2.5 분 타이머를 시작. </li><li> 단계를 반복 4.4.4. </li><li> 제 2.5 분 세정의 끝에서, 진공 챔버와 신선한 완충액을 추가 SECON의 개시 카운트 다운하는 1 분 타이머를 시작D 표준 추가. </li></ol></li><li> 일의 표준 추가 모든이 사이클을 계속합니다. </li><li> 최종 표준뿐만 아니라 이후 9 분 배양 동안 500 μL의 실행 기준 용량 추가의 끝의 1.32 M KCl을 참조 화합물을 제조. </li><li> 최종 처리 첨가 후 1 분 간격에 따라,의 KCl을 추가하고 9 분 타이머를 시작합니다. 주 : KCl을 첨가 실험의 결론에 조직의 생존 능력을 확인하기위한 것입니다 무시할 응답 결과 처리를 관리하는 경우에 유용합니다. </li><li> 최종 9 분 기준 화합물 보육의 결론에, 진공 청소기를 사용하거나 모든 챔버에서 버퍼를 제거합니다. 신선한 버퍼를 추가하지 마십시오. 실험을 마친다. </li><li> , 차트 파일을 저장 혈관 부분을 제거하고 적절하게 처리하고 정리 프로토콜에 따라 (제조업체가 제공 및 실험실 특정 될 수 있습니다) myograph의 장비. </li></ol>

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이러한 생물학적 검정의 개발 초기 도전 장간막 혈관 용 반복 수집 사이트 구축했다. 회장 결과적 장간막 통해 소장에서 진행 중에 소장 변화의 기능의 일부와 유사한 패턴으로 변화 샘플 사이트 일관성은 중요하다. 장간막 동맥과 정맥의 회장 지점은 가장 쉽게 식별 해부학 적 랜드 마크를 통해이었다. 맹장의 위치 및 장간막의 왼쪽에 그 말단에 회맹 배 다음으로이 두개골 장간막 동맥 (15)의...

티슈 침대 혈류량의 변화는 장기의 기능에 큰 영향을 미칠 수있다. 소장의 주요 기능은 영양소 흡수이다. 영양소 흡수 및 혈류 증가 표면 일 소화물 이동함에 따라 영양소 흡수에 도움을 위해 장내의 흡수성 표면 동맥 혈류가 필요하다. 혈류의 감소로 인해 transepithelial 그라데이션이 감소로 영양소 흡수의 감소를 일으킬 수있다. 영양소 이외에, 또한 소장의 장간막 국소 혈류에 효과를 발휘하는 2 차 대사, 약물, 독소에 노출 될 수있다. 반추 동물의 경우, 화합물은 사료에서 해방 될 수있다 (예를 들면, 아미노산, 또는 맥각 알칼로이드와 같은 독소와 같은 영양소) foregut의 발효 과정을 통해. 이 화합물은 반추위 발효 미생물의 신진 대사를 살아남을 경우, 지금은 흡수 가능또는 상호 작용 그들은 동물의 위장관을 통과있다. 생체 내 혈류를 측정하는 다른 방법을 사용할 수가있다 (예를 들어, 도플러 초음파, 혈액 유량계, 방사성 표지 된 미소 구, 및 표시 희석 기법 내주) 다양한 실험 시나리오 또는 치료의 평가를 허용한다. Mulvany 및 Halpern 3 전선을 사용하는 기술을 설명하는 문서 myograph 혈관 링 제제를 장착 발행까지 그러나, 혈관 평활근의 기계적 또는 약리학 적 특성에 관한 정보를 얻기 위해, 방법은 대형 선박을 제한된 남았다. 이 기술의 개발 이후 변형 관형 구조체의 평가 다른 다양한 애플리케이션을 허용 연관된 myograph 시스템으로 이루어질 것을 계속한다. 시스템은 또한 여기서 큰 혈관 관류 4를 장착하기위한 고정 봉을 이용하도록 한 내용기술이 요구되지 않습니다. 용기 및 동물 종류와 다른 동물 종의 데이터로부터 동일한 용기에 다른 해부학 적 기원과 구별에서 혈관의 dissimilarities 때문에 쉽게 다른 선박 또는 다른 동물 5 종류에서 동일한 용기에 걸쳐 추정 될 수 없다. 따라서, 별도의 생물 검정을 개발하고 이러한 측면이 변경 언제든지 확인해야합니다. 최근 여러 생물 검정은 복재 정맥과 오른쪽 반추위 동맥과 정맥 6,7는 가축에 사용하기 위해 이러한 기술과 수사관 개발되었다. 이러한 생물학적 검정은 맥각 알칼로이드는 소장지지 혈관에 미치는 효과를 구체적으로 조사하기 위하여 개발되었다. 그것은 공급 알칼로이드 50 ~ 60 %로 4 위 내용에 나타나는 것으로보고되었다, 그러나 5 %는 대변 팔에 복구됩니다. 스트릭 랜드 등. 9, 맥각 알칼로이드의 리뷰가 가능한 데이터 sugg를 언급EST는 소장 흡수가 ergopeptine 가장 중요한 사이트가 될 수 있음. 커트 등. 맥각 알칼로이드의 열을 검토 바이오 측면 그들이 상피 장벽을 통과하면, 맥각 알칼로이드가 쇄골 하 정맥 또는 장간막 정맥 및 포털 혈액으로 림프 시스템에 의해 하나를 운송 말했다. 로즈 등. 11은 높은 내생 감염 (높음 맥각 알칼로이드) 다이어트 소모 처리구에서 십이지장 혈류의 감소 및 결장을보고 하였다. 오른쪽 반추위 동맥과 정맥 생물 검정을 사용하여, 푸트 등. (12) 맥각 알칼로이드가 반추위 혈관에서 혈관 작용 것을 보여 주었다. 푸트 외. 13이어서 생체 내에서 증명이 감소 반추위 상피 혈류 맥각 알칼로이드 결과로 반추위 노출. 반추위의 흡수성 표면에 혈류 감소는 부수적 영양소 (휘발성 지방산) 플럭스의 감소를 일으켰다. 한때 감안할 때foregut에서 소장에게 전달 맥각 알칼로이드의 antity; 이 소장 혈관 및 영양 흡수에 비슷한 효과가 발생할 것이라고 가정했다. 이는 소 근위 회장 장간막 동맥 및 정맥 생물 검정의 개발을 필요로.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="611">
	<tbody>
		<tr height="64">
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			<td style="width:259px;">Comment/Description (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Multi Myograph</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">610M</td>
			<td style="width:259px;">A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">Powerlab 8/sp</td>
			<td style="width:127px;">ADIntruments</td>
			<td style="width:120px;">ML785</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">LabChart 7</td>
			<td style="width:127px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:120px;">Version 7</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Force Calibration Kit</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">100055</td>
			<td style="width:259px;">Specific to DMT myographs</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Bottle-top Filter</td>
			<td style="width:127px;">Nalgene</td>
			<td style="width:120px;">595-4520</td>
			<td style="width:259px;">0.22 um pore size; 45 mm neck size</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">#5 Jewler&#8217;s Forceps</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">555008FT</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of forceps can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Noyes Iris Scissors</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">18-1510</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of scissors can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Dissecting Scope</td>
			<td style="width:127px;">Zeiss</td>
			<td style="width:120px;">Stemi 2000-C</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of dissecting light microscope will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Adjustable Tissue Matrice</td>
			<td style="width:127px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:120px;">TM C12</td>
			<td style="width:259px;">This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Krebs-Hensleit Buffer</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">K3753-10x1L</td>
			<td style="width:259px;">It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:105px;">Calcium chloride dehydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">C7902-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">S5761-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Desipramine-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">D3900-5G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Propranolol-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P0884-1G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">KCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P9333-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:105px;">95% O2/5% CO2</td>
			<td style="width:127px;">Scott Gross</td>
			<td style="width:120px;">UN3156</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolating and using sections of bovine mesenteric artery and vein as a bioassay to test for vasoactivity in the small intestine

포유류의 위장 시스템은 지속적으로 해당 시스템으로부터 혈류에 영향을 미칠 수있는 화합물 (바람직한 및 바람직하지 않은)에 노출된다. 소장에 혈액 흐름의 변화는 기관의 흡수 기능에 대한 효과가 발생할 수 있습니다. 발효와 소화 과정을 통해 사료에서 해방 독소에 특히 관심이 생산 효율성을 개선 할 수있는 영역으로 반추 동물에서 개발했습니다. 이 문서와 관련된 비디오는 소 장간막 동맥의 고립 된 단면에서 vasoactivity과 multimyograph를 사용하여 정맥 화면 화합물을 개발 한 체외 생물 검정을 설명합니다. 혈관이 마운트 myograph으로 평형화되면, 생물 분석 자체가 사용될 수있다 : 수축성 응답 또는 관심있는 화합물을 평가하기 vasoactivity 스크리닝 도구로; 약리학 적으로 특정 수용체​​ 작용제에 의해 수용체를 표적 종류의 존재를 결정의; 하나 이상의 길항제의 존재와 수용체의 역할을 결정하고; 또는 길항제를 사용하여 원하는 화합물의 잠재적 인 상호 작용을 결정합니다. 이 모든 것을 통해, 데이터는 실시간으로 수집되고, 하나의 동물로부터 수집 된 조직은 다른 실험 치료의 다수 (체외 이점)에 노출하고, 정확을 제공하는 모세관 침대의 양쪽에 혈관 구조를 의미 할 수있다 소장을 지원하는 구 심성 및 원심성 혈액 공급에 일이 될 수 있는지의 그림.

포함 된 결과를 생성하는 데 사용되는 혈관 3주 간격 내 6 홀스타인 수송아지 (425 ± 8 ㎏)에서 수집 하였다. 의 KCl 농도 증가 처리를 추가로 전형적인 장간막 혈관 수축 반응의 예는 반응의 크기는 (공여체 동물의 크기와 상관) 용기의 크기와 약간 다를 것이다.도 2에 표시 할뿐만 아니라 수있다 부적절한 취급으로 (부정적) 영향을받을 수집 및 청소하는 동안 선박의 (스트레칭). 따라서, ...

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Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

isolating-using-sections-bovine-mesenteric-artery-vein-as-bioassay-to

Research

JoVE Journal

Medicine

9.6K 조회수.  USDA-Agricultural Research Service.  소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다. 

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A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, the de novo mutation rate in humans is relatively high, so new mutations are generated at a high frequency in the population. However, de novo mutations have not been reported in most common diseases. Mutations in genes leading to severe diseases where there is a strong negative selection against the phenotype, such as lethality in embryonic stages or reduced reproductive fitness, will not be transmitted to multiple family members, and therefore will not be detected by linkage gene mapping or association studies. The observation of very high concordance in monozygotic twins and very low concordance in dizygotic twins also strongly supports the hypothesis that a significant fraction of cases may result from new mutations. Such is the case for diseases such as autism and schizophrenia. Second, despite reduced reproductive fitness1 and extremely variable environmental factors, the incidence of some diseases is maintained worldwide at a relatively high and constant rate. This is the case for autism and schizophrenia, with an incidence of approximately 1% worldwide. Mutational load can be thought of as a balance between selection for or against a deleterious mutation and its production by de novo mutation. Lower rates of reproduction constitute a negative selection factor that should reduce the number of mutant alleles in the population, ultimately leading to decreased disease prevalence. These selective pressures tend to be of different intensity in different environments. Nonetheless, these severe mental disorders have been maintained at a constant relatively high prevalence in the worldwide population across a wide range of cultures and countries despite a strong negative selection against them2. This is not what one would predict in diseases with reduced reproductive fitness, unless there was a high new mutation rate. Finally, the effects of paternal age: there is a significantly increased risk of the disease with increasing paternal age, which could result from the age related increase in paternal de novo mutations. This is the case for autism and schizophrenia3. The male-to-female ratio of mutation rate is estimated at about 4&#x2013;6:1, presumably due to a higher number of germ-cell divisions with age in males. Therefore, one would predict that de novo mutations would more frequently come from males, particularly older males4. A high rate of new mutations may in part explain why genetic studies have so far failed to identify many genes predisposing to complexes diseases genes, such as autism and schizophrenia, and why diseases have been identified for a mere 3% of genes in the human genome. Identification for de novo mutations as a cause of a disease requires a targeted molecular approach, which includes studying parents and affected subjects. The process for determining if the genetic basis of a disease may result in part from de novo mutations and the molecular approach to establish this link will be illustrated, using autism and schizophrenia as examples.

Molecular genetic strategy for finding de novo mutations causing common disorders such as autism and schizophrenia.

같은 자폐증과 정신 분열증과 같은 일반적인 장애에 드 노보 변이를 식별하는 전략

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

연구

의학

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model creating an artificial fistula between the common carotid artery (CCA) and the external jugular vein (EJV) has been widely described and proved technically feasible. This construct provokes a consistent cerebral venous hypertension (CVH), and therefore has helped studying the contribution of venous hypertension to formation, clinical symptoms, and prognosis of brain AVMs and dural AVFs. Equivalent mice models have been only scarcely described and have shown trouble with stenosis of the fistula. An established murine model would allow the study of not only pathophysiology but also potential genetic therapies for these cerebrovascular diseases.
We present a model of arteriovenous fistula that produces a durable intracranial venous hypertension in the mouse. Microsurgical anastomosis of the murine CCA and EJV can be difficult due to diminutive anatomy and frequently result in a non-patent fistula. In this step-by-step protocol we address all the important challenges encountered during this procedure. Avoiding excessive retraction of the vein during the exposure, using 11-0 sutures instead of 10-0, and making a carefully planned end-to-side anastomosis are some of the critical steps. Although this method requires advanced microsurgical skills and a longer learning curve that the equivalent in the rat, it can be consistently developed.
This novel model has been designed to integrate transgenic mouse techniques with a previously well-established experimental system that has proved useful to study brain AVMs and dural AVFs. By opening the possibility of using transgenic mice, a broader spectrum of valid models can be achieved and genetic treatments can also be tested. The experimental construct could also be further adapted to the study of other cerebrovascular diseases related with venous hypertension such as migraine, transient global amnesia, transient monocular blindness, etc.

We describe a method for creating a reliable model of cerebral venous hypertension in the adult mouse. This model has been widely described and tested in the rat. This new counterpart in the mice opens the possibility of using genetic modified animals and thereby broadens the applications of the model.

성인 마우스 정맥 ​​고혈압 모델 : 외부 경정맥 정맥 문합에 경동맥.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. Intra-tracheal inoculation of a known amount of bacteria has been successfully used to reproduce the pathogenesis of pneumonia which then develops into sepsis. Monitoring hemodynamic parameters and providing standard clinical treatment including infusion of antibiotics, fluids and drugs to maintain blood pressure is critical to simulate routine supportive care in this model but to do so requires both arterial and venous vascular access. The video details the surgical technique for implanting carotid artery and common jugular vein catheters in an anesthetized rat. Following a 72 hr recovery period, the animals will be re-anesthetized and connected to a tether and swivel setup attached to the rodent housing which connects the implanted catheters to the hemodynamic monitoring system. This setup allows free movement of the rat during the study while continuously monitoring pressures, infusing fluids and drugs (antibiotics, vasopressors) and performing blood sampling.

Vascular accesses to measure hemodynamics, provide fluids and perform blood sampling are important to any small animal model study. We present a technique for implanting catheters into the carotid artery and the common jugular vein in an anesthetized rat for connecting to a system to perform monitoring, infusions and sampling.

경동맥과 경정맥의 도관은 의식 쥐 모델에서, 혼합 및 혈액 샘플링을 혈역학 적 조치를 수행하는

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe the use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations of superior and uniform quality to that which can be achieved by hand. The device comprises a base that holds 4 stainless steel rods and a top, which acts a cutting guide. The rods are inserted into the lumen of the small intestine [divided into thirds] and the colon. The rods and samples are then placed over a piece of filter paper or card into the holding slots in the base of the device. The top of the device is then positioned and serves as a cutting guide. The two angled sections in the center of the top piece are used to guide a knife or scalpel and cut the intestines longitudinally on the top of the rods. Once the intestinal sections have been cut, the top is removed and the card,&#160;tissue and rods gently removed from the device and placed on the bench. The rods are then gently rolled sideways to flatten and stick the intestinal segments onto the underlying piece of filter paper or card. The final preparation can then be examined or fixed and stored for later analysis. The preparations are invaluable for the study of intestinal changes in normal or genetically modified mouse models. The preparations have been used for the study and quantification of the effects of inflammation (colitis), damage, pre-cancerous lesions (aberrant crypt foci (ACFs) and mucin depleted foci (MDFs)) and polyps or tumors.

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

간단한 장치는 빠르게 마우스 소장의 전체 마운트를 준비하는 방법

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

창 자 호르몬 분 비는 격리를 사용 하 여 기본 메커니즘 끼얹는다 쥐 소장

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a promising therapeutic target in many disorders, such as autoimmune diseases, atherosclerosis, and cancer. RNAi-mediated gene silencing is a valuable approach of choice to probe and manipulate macrophage function; however, the transfection of macrophages with siRNA is often considered to be technically challenging, and, at present, few methodologies dedicated to the siRNA transfer to macrophages are available. Here, we present a protocol of using polyethyleneimine-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles (PEI-SPIONs) as a vehicle for the targeted delivery of siRNA to macrophages. PEI-SPIONs are capable of binding and completely condensing siRNA when the Fe:siRNA weight ratio reaches 4 and above. In vitro, these nanoparticles can efficiently deliver siRNA into primary macrophages, as well as into the macrophage-like RAW 264.7 cell line, without compromising cell viability at the optimal dose for transfection, and, ultimately, they induce siRNA-mediated target gene silencing. Apart from being used for in vitro siRNA transfection, PEI-SPIONs are also a promising tool for delivering siRNA to macrophages in vivo. In view of its combined features of magnetic property and gene-silencing ability, systemically administered PEI-SPION/siRNA particles are expected not only to modulate macrophage function but also to enable macrophages to be imaged and tracked. In essence, PEI-SPIONs represent a simple, safe, and effective nonviral platform for siRNA delivery to macrophages both in vitro and in vivo.

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

We describe a method of using polyethyleneimine (PEI)-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles for transfecting macrophages with siRNA. These nanoparticles can efficiently deliver siRNA to macrophages in vitro and in vivo and silence target gene expression.

Polyethyleneimine 코팅 된 산화 철 나노 입자 작은 간섭 RNA의 세포에 배달 하는 수단으로 생체 외에서 그리고 Vivo에서

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...