저자는 자신의 전문 기술 지원을 셸리 샤오와 제니퍼 펜을 인정하고 싶습니다. 이 작품은 소아 비뇨기과와 스탠포드 소아 연구 기금의 학회에서 부여를 통해 가능하게되었다.

요도 카테터의 I. 준비 <ol><li> 각 마우스 방광과 샘플로 신장을위한 각각 한 cryovial 튜브 5-6 스테인리스 스틸 비즈 (방광, 1.6 mm의 크기 또는 0.9-2.0 mm의 조화) 또는 지르코늄 산화물 비즈 (신장, 0.5 mm 크기)을 놓으십시오. 비드 함유 튜브 압력솥. </li><li> 주변 온도로 냉각 튜브 후, 각각의 스테인레스 스틸 비드 함유 튜브 및 각 지르코늄 산화물 비드 함유 관에 멸균 PBS 400 microliters에 멸균 PBS 200 microliters를 추가합니다. </li><li> 저희는 형수와 Hultgren 13에 기술된 요도 카테터를 준비합니다. 플랫 헤드 포셉 및 고급 가위 (홍채 또는 유사한 유형)의 깨끗한 쌍을 압력솥과 악기는 주위 온도에 냉각 수 있습니다. 70 % 에탄올과 층류 후드의 표면을 닦아주십시오. 후드에서 폴리에틸렌 튜브의 30cm (대략) 세그먼트를 잘라. 무균 살균 세 CC 주사기에 멸균 30 게이지 바늘 (1 / 2 인치 긴 바늘)을 놓으십시오. autoclaved 포셉와 컷 폴리에틸렌 튜브의 한쪽 끝을 들고 그것이 허브를 만날 때까 바늘에 튜빙을 슬라이드. 약 2cm의 바늘의 끝을 초과되도록 튜브를 잘라. 멸균 배양 접시에있는 주사기와 장소에서 카테터를 제거합니다. </li><li> 교차 오염의 가능성을 줄이기 위해, 우리는 각각의 마우스를 하나의 카테 테르합니다. 모든 카테터가 만들어진 후, 적어도 30 분 동안 자외선을 조사하기 위해 덮개는 배양 접시에 노출하여 그들을 소독. UV 램프 똑바로 쳐다보지 또는 램프가 활성화하는 동안 모자 신체의 어떤 부분을 노출시키지 마십시오. UV 노출 후, 카테터는 배양 접시에있는 장기 저장할 수 있습니다. 우리는 불임을 유지하기 위해 Parafilm으로 접시를 밀봉하는 것이 좋습니다. </li></ol> II. 동물 접종 <ol><li> 마우스 스트레스 유발 혼란함을 주죠 요인을 방지하기 위해 실험 조작하기 전에 적어도 일주일에 도착해야합니다. 남성 마우스 요도가 ...에 카테 테르를 꽂다 매우 어려운 있기 때문에 여성의 생쥐를 사용합니다. CBA / J는 일반적으로 활용, UTI - 민감한 근친 마우스 변형입니다. 이것이 노화하기 전에 면역 성숙의 윈도우이기 때문에 생쥐, 연령 8 및 12 주 정도 사용해야합니다. 실험의 첫 날, 냉동 세균성 주식의 유리병에 살균 inoculating 루프의 끝부분을 찍어. 적절한 한천 플레이트에 작은 inoculum 및 연속 출력을 다쳤어요. 일반적으로, uropathogenic E. 대장균 (UPEC) 및 기타 종자는 37 Luria - Bertani (LB) 한천에서 밤새 성장 수 있습니다 ° C 주위 공기. UPEC의 계통 LB 한천에 고체, 노란 흰색 반투명​​ 식민지로 성장합니다. 즉시 세균성 주식은 냉동실로 돌아갑니다. Uropathogenic 박테리아 계통 반복, 시리얼 문화와 함께 시간이 지남에 따라 덜 치명이 될 수 있습니다. 따라서, 우리는 각각의 실험에 대한 새로운 한천 플레이트를 줄이 것이 좋습니다. </li><li> 실험의 일 2, 적절한 콜로니 형태를 확인 후, 밤새 국물 문화의 적어도 5 CC에서 한천 플레이트와 장소에서 하나의 식민지를 선택하십시오. LB의 국물이 가장 uropathogenic 박테리아 변종에 사용할 수 있습니다 (37 ° C, 주변 공기 200 RPM). 폭기을 허용하도록 국물 문화 튜브에 느슨하게 뚜껑을 유지. </li><li> 실험 3 일에, 유형 I 필리 표현을 향상시키기 위해, (일반적으로 37 ° C와 200 RPM) 다시 밤새 국물 최초의 국물 문화와 문화의 10 %를 가져가라. 유형 I 필리가 생체내 1 uropathogens에 대한 중요한 독성 인자로 표시되었습니다 이후 시리얼 수프 문화는 박테리아 uropathogenicity을 최적화하는 데 도움이됩니다. 폭기을 허용하도록 국물 문화 튜브에 느슨하게 뚜껑을 유지. </li><li> 실험의 일 4 일 3 국물 문화의 OD 600 측정합니다. 이미 테스트되고있는 세균성 긴장 유명하지 않은 경우, OD 600 cfu 사이의 관계를 결정하기 위해 최소 7 로그 (PBS로 수행 dilutions, LB 한천에서 수행 문화, 37 ° C 부화 야간) 이상의 10 배로 시리얼 희석 도금을 수행 / ML. 엄지의 규칙으로 0.4-0.5의 OD 600 일반적으로 50 microliters 당 1 - 2x10 7 cfu에 해당합니다. OD 600 cfu / ML 사이의 관계가 결정되면, 하나는 PBS의 50 microliters에서 마우스마다 원하는 cfu에 해당하는 OD 600 국물 문화를 조정할 수 있습니다. 일부 작업은 오히려 50 10 microliters의 접종은 kidneys6에 덜 역류에 이르게 것을 제안했다. 그러나, 대부분의 출판물은 마우스 최대 50 microliters의 사용을보고합니다. 일반적으로, 10 6 108 cfu / 마우스하지만, 각각의 박테리아 / 마우스 변형 조합이 경험적으로 생체내에 검증이 필요 사이의 원하는 cfu 범위. </li><li> 그 inocula가 떨어뜨림 후에 즉시 무효화되지 않도록하기 위해 생쥐 전에 전신 마취의 유도하기 위해 최소 30 분 동안 물을 박탈해야합니다. 또 다른 주요 작전 쥐를 scruffing하여 마취 유도 전에 voiding 유도하고 부드럽게 낮은 abdom을 눌러입니다ko 페이지를 참조하십시오. isoflurane 두 2.5 %는 1.8-2 % isoflurane과 유지 보수 마취 다음 8-12주 오래된 여성 CBA 마우스에 대한 안전 유도 복용입니다. </li><li> 마취가 달성되면, 생쥐는 isoflurane 함유 산소에 연결된 nosecone에 삽입 자신의 머리를 위로 향한 위치에 배치됩니다. 낮은 복부는 방광에서 소변을 철수하는 마사지입니다. 방광은 상대적으로 비어있는 경우,이 책략은 소변을 양보하지 않을 수 있습니다. 낮은 복부와 회음부는 70 % 에탄올로 적셔 있습니다. </li><li> 바늘없는 무균 한 CC의 주사기는 원하는 세균 inoculum을 작성하는 데 사용됩니다. 다음 멸균 요도 카테터는 무균 주사기에 배치됩니다. 관만이 1-2밀리미터은 바늘의 끝부분에 말초 남아 있도록 여분의 튜브는 가위로 카테터를 차단합니다. 그런 다음 주사기는 도청과 플런저가 똑바로 모든 거품을 제거하기 위해 주사기와 우울증이다. 정균 윤활의 덩어리가 젤리 멸균 페트리 접시 또는 멸균 주사기 래퍼의 내부에 squirted입니다. 카테터의 끝 (첨부 주사기 포함) 젤리에 담근이다. 여러 박테리아 변종이 같은 실험에서 테스트되고있다면, 다른 변종을 포함하는 카테터에 기름칠을하는 젤리 같은 드롭을 사용하지 않도록주의합니다. </li><li> 확대를위한 스테레오 현미경 (배 줌 범위 0.8x)를 사용하여 anesthetized 마우스 clitoral 후드는 부드럽게 미세 이빨 포셉 한 쌍의와 비 지배적인 손에 쥐었다하고 깊은 분홍색 요도 (外耳道) (노출 cephalad 제기 그림 1). 주사기는 (첨부 카테터)를 연필 그립으로 지배적인 손에 쥐었다하고 카테터의 끝은 45도 각도에서 요도 (外耳道)에 종사합니다. clitoral 후드는 주사기의 긴 축을 따라 뻗어이며, 효과적으로 카테 테르에 요도를 &quot;로딩&quot;. 마우스 요도가 중복되어 있기 때문에이 작전 필수적입니다. 카테 테르는 방광 (최대 허브에, 그림 2)으로 쉽게 슬라이드해야하고, 부드럽게 요도의 중복 주름을 탐색하는 데 도움이 twirled 수 있습니다. 카테터가 hubbed되면 그것이 마우스의 긴 축을과 병렬 때까지 주사기가 낮아 수 있습니다. 비 지배적인 손으로 천천히 inoculum을 (적어도 5 초) 주입하는 데 사용되는 지배적인 손으로 카테터와 주사기의 위치를​​ 안정화 있도록 포셉를 놓을 수 있습니다. 액체가 주입하는 동안 카테터 주위에 흐르는 볼 경우 방광 하나가 가득하거나 카테 테르의 질 (요도에 바로 꼬리)에 있습니다. 사출은 즉시 중단하고 카테터의 위치를​​주의 깊게 검사해야합니다. 카테터가 요도에있다면, 주어진 마우스가 실험에 포함되지 않습니다. 반면에, 질에 잃어 버렸어요 카테터가 재지정 수 있으며 사출 다시 시도. 주사 후, 카테터와 주사기가 천천히 마우스 철회 있습니다. </li><li> 관리 세균을 철수시키고 가변 감염 수준으로 이어질 수 있습니다 초기 이후의 접종의 voiding의 가능성을 줄이기 위해 일부 조사는 transurethral inoculation10 후 30 분 동안 마취 생쥐를 유지합니다. 수술 후, 생쥐는 정상적인 호흡 패턴 및 활동의 반환을 확인하는 지속적인 관찰과 함께 깨끗한 온난 화 담요에 복구해야합니다. 일단 동물이 완전히 크롤 링하는 능력을 회복, 그들은 침구 함유 새장을 위해 제공될 수 있습니다. </li></ol> III. 감염된 조직에 측정 CFU <ol><li> 다양한 마우스 UTI 간행물은 6 시간에서 한 주 이상 사후 접종에 문화 결과를보고했습니다. 최적의 시간 지점은 각 세균 / 마우스 스트레인 조합에 대해 경험적으로 결정해야합니다. 무효화 소변은 멸균 페트리 접시 마우스를 scruffing하여 문화 얻을 수 있습니다. 수집된 소변은 항상 얼음에 보관해야합니다. 몇 시간 동안 무효화 소변을 얻기 위해 여러 시도는 마우스 voiding가 자주, 낮은 볼륨 (무효 당 30-100 microliters)이기 때문에, 필요하고, 스트레스에 의존 수 있습니다. </li><li> 무효화 소변 표본을 얻기 후에, 우리는 isoflurane과 경추 탈구를 사용하여 마우스를 희생. 복부는 무균 열립니다. 무효화 소변 표본이 성공적으로 이전 얻은 정보가 아닌 경우, 소변의 작은 금액은 종종 30 게이지 바늘과 주사기를 사용하여 방광 벽을 통해 aspirated 수 있습니다. </li><li> 하나 또는 둘 모두 신장이 제거 멸균 배양 접시에 최소한 4 개 (각 조각은 50 미만 마이크로 그램한다)에 다진과에 배치됩니다 지르코늄 구슬 / PBS 함유 얼음 cryovials합니다. 방광이 제거 최소 4 조각으로 다진하고, 스테인레스 스틸 비드 /에 위치합니다 PBS 함유 얼음 cryovials합니다. 조직 / 구슬 / PBS 함유 cryovials 것은 총알이 블렌더 균 질기에 배치되고 조직은 일분에 대한 &quot;8&quot;속도 설정을 사용 균질하고 있습니다. 어떤 조직 조각 균질 후 유지하는 것이 일반적입니다. 액체 homogenate의 50-100 microliters가 pipetted 수있는만큼, 고체 파편문제를 반드시하지 않습니다. 균질화 시간이 몇 가지 샘플에 대한 증가하는 경우, 그것은 균질의 일관성을 유지하기 위해 모든 조직에 대해 그렇게 할 중요합니다. 그것이, 교차 오염의 가능성을 피할 개별 샘플에게 표준 균 질기를 사용하여 하나씩 처리를보다 신속하고, 상당히 균질되는 샘플을 가열하지 않기 때문에 우리는 총알 블렌더 균 질기를 활용. </li><li> 수집된 소변 및 조직 homogenates 적어도 두 개 또는 세 10 배로 dilutions은 microtiter 접시에하여야한다. 예비 실험의 경우는 최소 7 10 배로 dilutions를 만들기 위해 신중한 수 있습니다. 적절한 한천의 문화는 최대 100 소변의 microliters, 방광, 및 / 또는 신장 homogenates. 소변 표본은 볼륨 제한 수 있기 때문에, 그것은 10 배로 dilutions를 수행하기 전에 100 microliters 자신의 볼륨을 가지고해야 할 수도 있습니다. 이것이 필요한 경우, 초기 희석은 (10 배 희석 전) 세균성 산출의 최종 계산에 고려해야합니다. 이러한 미디어 그램 부정적인 유기체를위한 선택이기 때문에 우리는, eosin - 메틸렌 블루 또는 MacConkey 한천 배지 (37시 야간 보육 ° C)에 culturing의 UPEC를 선호합니다. UPEC의 변종 유제품을 발효 능력으로 인해 중앙 umbilicated, 빨강 - 분홍색 식민지로 MacConkey 한천 배지에서 성장. </li><li> 하룻밤 문화 후, 각각의 접시 cfu을 계산합니다. 순차적으로 희석 시료의 경우, 50-100 식민지가 포함된 플레이트 희석은 가장 정확한 카운트로 간주됩니다. &quot;뒤로&quot;조직의 밀리그램 당 조직마다 cfu을 계산하거나, ML 당. </li></ol> IV. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/2070/2070fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 포셉 (사진 맨 위로 넘어)로 cephalad clitoral 후드를 리프팅하여 노출 요도 (外耳道) (어두운 분홍색 조직) <img src="/files/ftp_upload/2070/2070fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 요도를 Catheterized. 이열의 클리토리스가 방금 카테터 위에 볼 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2070/2070fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 블레더 cfu 2 일 uropathogenic E. 함께 8주 오래된 여성 CBA / J 생쥐의 transurethral 감염 후 카운트 대장균. Bladders는 MacConkey 한천에 시리얼 희석 도금에 의해 균질하고 cfu / ML 결정됩니다. 다이아몬드 개별 생쥐에 대한 cfu / ML을 나타냅니다, 수평 막대가 중간 cfu / ML을 나타냅니다.

<ol>
	<li>Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+type+1+pilus+expression+in+Escherichia+coli+to+ascending+urinary+tract+infections+in+mice.">Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice.</a> Infect Immun. 55, 373-380 (1987).</li><li>Rouschop, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+CD44+facilitates+Escherichia+coli+infection+of+the+murine+urinary+tract.">Urothelial CD44 facilitates Escherichia coli infection of the murine urinary tract.</a> J Immunol. 177, 7225-7232 (2006).</li><li>Malaviya, R., Ikeda, T., Abraham, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mast+cells+to+bacterial+clearance+and+their+proliferation+during+experimental+cystitis+induced+by+type+1+fimbriated+E.+coli.">Contribution of mast cells to bacterial clearance and their proliferation during experimental cystitis induced by type 1 fimbriated E. coli.</a> Immunol LettM. 91, 103-111 (2004).</li><li>Lane, M. C., Alteri, C. J., Smith, S. N., Mobley, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+flagella+is+coincident+with+uropathogenic+Escherichia+coli+ascension+to+the+upper+urinary+tract.">Expression of flagella is coincident with uropathogenic Escherichia coli ascension to the upper urinary tract.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 16669-16674 (2007).</li><li>Hvidberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+long-term+ascending+urinary+tract+infection+mouse+model+for+antibiotic+treatment+studies.">Development of a long-term ascending urinary tract infection mouse model for antibiotic treatment studies.</a> Antimicrob Agents Chemother. 44, 156-163 (2000).</li><li>Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+urinary+tract+infection+by+intraurethral+inoculation+with+Escherichia+coli:+refining+the+murine+model.">Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model.</a> J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).</li><li>Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+and+host+responses+to+Escherichia+coli+urinary+tract+infection+in+genetically+distinct+mouse+strains.">Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains.</a> Infect Immun. 66, 2798-2802 (1998).</li><li>Gunther, N. W. t., Lockatell, V., Johnson, D. E., Mobley, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+dynamics+of+type+1+fimbria+regulation+in+uropathogenic+Escherichia+coli+during+experimental+urinary+tract+infection.">In vivo dynamics of type 1 fimbria regulation in uropathogenic Escherichia coli during experimental urinary tract infection.</a> Infect Immun. 69, 2838-2846 (2001).</li><li>Bishop, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP-regulated+exocytosis+of+Escherichia+coli+from+infected+bladder+epithelial+cells.">Cyclic AMP-regulated exocytosis of Escherichia coli from infected bladder epithelial cells.</a> Nat Med. 13, 625-630 (2007).</li><li>Thumbikat, P., Waltenbaugh, C., Schaeffer, A. J., Klumpp, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+responses+accelerate+bacterial+clearance+in+the+bladder.">Antigen-specific responses accelerate bacterial clearance in the bladder.</a> J Immunol. 176, 3080-3086 (2006).</li><li>Hagberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ascending,+unobstructed+urinary+tract+infection+in+mice+caused+by+pyelonephritogenic+Escherichia+coli+of+human+origin.">Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin.</a> Infect Immun. 40, 273-283 (1983).</li><li>Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+urinary+tract+infection+by+intraurethral+inoculation+with+Escherichia+coli:+refining+the+murine+model.">Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model.</a> J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).</li><li>Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+urinary+tract+infection.">A murine model of urinary tract infection.</a> Nat Protoc. 4, 1230-1243 (2009).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

박테리아의 transurethral 접종하여 마우스 요도의 요로 감염의 유도는 오랜 설립하지만, 기술적으로 까다로운 절차 11. 기형 및 Hultgren 최근 마우스 요로 감염 13 transurethral 기술의 우수 리뷰를 발표했다. 본 논문에서는, 우리는 더 이상이 실험 방법의 미세한 포인트를 설명하려고합니다. 초보자는 방광을 폭로 정중선 개복술을 수행하는 인도 잉크 (PBS 1 %)의 희석 ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>E&amp;K Scientific</td>
<td>640201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Caps for cryovial tubes, with 'O' ring</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>E&amp;K Scientific</td>
<td>440011-N</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bullet Blender</td>
<td>&nbsp;</td>
<td> Next Advance</td>
<td>BBX24</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Zirconium Oxide Beads (0.5mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Next Advance</td>
<td>ZROB05</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel Beads (1.6mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Next Advance</td>
<td>SSB16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Next Advance</td>
<td>SSB14B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CBA/J Mice, 8-12 week old female</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Laboratories</td>
<td>000656</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMD</td>
<td>EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LB agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LB broth</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMD</td>
<td>1.10285.0500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane (Aerrane)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Baxter</td>
<td>NDC 10019-773-60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Inoculating loops</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22-363-601</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eosin-methylene blue (EMB) agar powder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Himedia Laboratories</td>
<td>MM022-500G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MacConkey agar powder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Difco</td>
<td>212123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LB agar powder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Difco</td>
<td>244520</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)]</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>427401</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30 gauge needles, 1/2 inch</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>305106</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1 ml tuberculin Slip-Tip syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>309602</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3 ml Luer-Lock syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>309585</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

transurethral induction of mouse urinary tract infection

관심 Uropathogenic 세균성 변종은 한천을 재배하고 있습니다. 일반적으로, uropathogenic<em&gt; E. 대장균</em&gt; (UPEC) 및 기타 종자는 37 Luria - Bertani (LB) 한천에서 밤새 성장 수 있습니다 ° C 주위 공기. UPEC의 계통 LB 한천에 노란 흰색 반투명​​ 식민지로 성장합니다. 적절한 콜로니 형태의 확인에 따라, 하나의 식민지는 다음 국물에 교양으로 포착하고 있습니다. LB의 국물은 대부분 uropathogenic 세균의 변종에 사용할 수 있습니다. 두 시리얼, 하룻밤 LB의 국물 문화는 유형 I 필리, uropathogenic 박테리아에 대해 잘 정의된 독성 요소의 표현을 향상시키기 위해 고용 수 있습니다. 국물 문화가 호수 (PBS)를 버퍼 인산에서 원하는 농도로 희석하고 있습니다. 에이트에 12주 오래된 여성 생쥐는 isoflurane 마취하에 위치하고 transurethrally 30 게이지 주사기를 튜브가 덮인 폴리에틸렌을 사용하여 박테리아와 주사를하고 있습니다. 경험적으로 각각의 박테리아 / 마우스 변형 조합에 대한 결정되어야합니다 일반 inocula은 10아르<sup&gt; 6</sup&gt; 10<sup&gt; 8</supPBS의 10-50 microliters에서&gt; cfu마다 마우스. 원하는 감염 기간이 지나면 (한 몇 주 일), 소변 샘플과 방광과 신장이 모두 수확하고 있습니다. 각 기관은, 다진 PBS에 배치하고, 블루 불렛 균 질기에 균질입니다. 소변과 조직 homogenates는 순차적으로 PBS에 희석하고 적절한 한천에 대한 양식입니다. 그 다음날은 콜로니 형성 단위가 계산됩니다.

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Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

이 동영상은 transurethrally 마우스 요로 감염을 유발하고 결과 감염의 범위를 정할 방법을 보여 것입니다.

마우스 요로 감염의 Transurethral 유도

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

transurethral-induction-of-mouse-urinary-tract-infection

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

36.4K 조회수.  Stanford University. 이 동영상은 transurethrally 마우스 요로 감염을 유발하고 결과 감염의 범위를 정할 방법을 보여 것입니다.

비디오: Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1. It has traditionally been considered a rare disease but reporting has increased markedly in recent years. Hypophysitis, in fact, develops not uncommonly as a "side effect" in cancer patients treated with antibodies that block inhibitory receptors expressed on T lymphocytes, such as CTLA-42 and PD-1 receptors. Autoimmune hypophysitis can be induced experimentally by injecting mice with pituitary proteins mixed with an adjuvant3. In this video article we demonstrate how to extract proteins from mouse pituitary glands and how to prepare them in a form suitable for inducing autoimmune hypophysitis in SJL mice.

Autoimmune hypophysitis can be reproduced in mice by injecting an extract of mouse pituitary proteins.

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

연구

면역학 및 감염병학

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with leukemia, severe burn wounds, or organ transplants1. In patients at high-risk for developing PA bloodstream infections, the gastrointestinal (GI) tract is the main reservoir for colonization2, but the mechanisms by which PA transitions from an asymptomatic colonizing microbe to an invasive, and often deadly, pathogen are unclear. Previously, we performed in vivo transcription profiling experiments by recovering PA mRNA from bacterial cells residing in the cecums of colonized mice 3 in order to identify changes in bacterial gene expression during alterations to the host&#x2019;s immune status.
As with any transcription profiling experiment, the rate-limiting step is in the isolation of sufficient amounts of high quality mRNA. Given the abundance of enzymes, debris, food residues, and particulate matter in the GI tract, the challenge of RNA isolation is daunting. Here, we present a method for reliable and reproducible isolation of bacterial RNA recovered from the murine GI tract. This method utilizes a well-established murine model of PA GI colonization and neutropenia-induced dissemination4. Once GI colonization with PA is confirmed, mice are euthanized and cecal contents are recovered and flash frozen. RNA is then extracted using a combination of mechanical disruption, boiling, phenol/chloroform extractions, DNase treatment, and affinity chromatography. Quantity and purity are confirmed by spectrophotometry (Nanodrop Technologies) and bioanalyzer (Agilent Technologies) (Fig 1). This method of GI microbial RNA isolation can easily be adapted to other bacteria and fungi as well.

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

A reliable method for the RNA isolation of Pseudomonas aeruginosa recovered from murine cecums is described. The RNA recovered is of sufficient quantity and quality for subsequent qPCR, transcription profiling, and RNA Seq experiments. This technique can be adapted for RNA isolation of other intestinal microbes.

의 RNA 격리 녹농균 Murine 위장관을 Colonizing

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa

Mucosal surfaces, including in the gastrointestinal, urogenital, and respiratory tracts, provide portals of entry for pathogens, such as viruses and bacteria 1. Mucosae are also inductive sites in the host to generate immunity against pathogens, such as the Peyers patches in the intestinal tract and the nasal-associated lymphoreticular tissue in the respiratory tract. This unique feature brings mucosal immunity as a crucial player of the host defense system. Many studies have been focused on gastrointestinal and respiratory mucosal sites. However, there has been little investigation of reproductive mucosal sites. The genital tract mucosa is the primary infection site for sexually transmitted diseases (STD), including bacterial and viral infections. STDs are one of the most critical health challenges facing the world today. Centers for Disease Control and Prevention estimates that there are 19 million new infectious every year in the United States. STDs cost the U.S. health care system $17 billion every year 2, and cost individuals even more in immediate and life-long health consequences. In order to confront this challenge, a greater understanding of reproductive mucosal immunity is needed and isolating lymphocytes is an essential component of these studies. Here, we present a method to reproducibly isolate lymphocytes from murine female genital tracts for immunological studies that can be modified for adaption to other species. The method described below is based on one mouse.&#x2003;

An efficient way to isolate lymphocytes from mouse genital tract is described. This method takes advantage of enzyme digestion and Percoll gradient separation to allow efficient isolation. This technique is also adaptable to for use in other species

마우스 성기 요로 점막에서 림프구의 분리

Mucosal surfaces, including in the gastrointestinal, urogenital, and respiratory tracts, provide portals of entry for pathogens, such as viruses and ...

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

작은 동물 모델에서 요로 감염: 남성 및 여성 쥐의 Transurethral 도관 법

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into the urinary bladder to either induce animal models of bladder pathologies or evaluate the effectiveness of intravesical treatments. Most rodent models of lower urinary tract (LUT) pathologies are induced in female mice due to ease of intravesical instillation of the substances via the female urethra. However, due to anatomical differences between the female and male LUT, transurethral instillation in a male mouse has been deemed a very challenging procedure, and it has not been previously described. In this manuscript, we provide a detailed description of how to prepare polyethylene (PE) tubing for subsequent insertion into the urethra of a male mouse. In addition, we discuss the ideal types of PE tubing to be used depending on the desired site of inoculation. Furthermore, we describe point by point how to prepare an animal for a successful transurethral instillation to avoid injury to the urethra and ensure the delivery of the solution to the desired location. The procedure is started by retracting the prepuce and the glans to expose the opening of the urethral meatus. Next, the glans are grasped by blunt non-crushing forceps to stabilize the penis and the PE tubing. The PE tubing is first inserted into the urethral meatus parallel to the animal body, then its angle is adjusted by tilting the catheter to maneuver it to follow the natural curvature of the urethra. This technique can be used to induced murine models of bladder pathologies and/or evaluate the effectiveness of intravesical treatments in male mice.

Transurethral instillation is a challenging procedure and has not been well described in the literature. The aim of this manuscript is to describe a technique for transurethral insertion of a catheter for intravesical delivery of liquids with active substances into the urinary bladder and/or prostate in adult male mice.

성인 남성 마우스 transurethral 주입 절차

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in humans. Several mouse models of gastric Helicobacter infection have been developed to study the molecular and cellular mechanisms whereby H. pylori bacteria colonize the stomach of human hosts and cause disease. Herein, we describe protocols to: 1) prepare bacterial suspensions for the in vivo infection of mice via intragastric gavage; 2) determine bacterial colonization levels in mouse gastric tissues, by polymerase chain reaction (PCR) and viable counting; and 3) assess pathological changes, by histology. To establish Helicobacter infection in mice, specific pathogen-free (SPF) animals are first inoculated with suspensions (containing &#8805;105 colony-forming units, CFUs) of mouse-colonizing strains of either Helicobacter pylori or other gastric Helicobacter spp. from animals, such as Helicobacter felis. At the appropriate time-points post-infection, stomachs are excised and dissected sagittally into two equal tissue fragments, each comprising the antrum and body regions. One of these fragments is then used for either viable counting or DNA extraction, while the other is subjected to histological processing. Bacterial colonization and histopathological changes in the stomach may be assessed routinely in gastric tissue sections stained with Warthin-Starry, Giemsa or Haematoxylin and Eosin (H&#38;E) stains, as appropriate. Additional immunological analyses may also be undertaken by immunohistochemistry or immunofluorescence on mouse gastric tissue sections. The protocols described below are specifically designed to enable the assessment in mice of gastric pathologies resembling those in human-related H. pylori diseases, including inflammation, gland atrophy and lymphoid follicle formation. The inoculum preparation and intragastric gavage protocols may also be adapted to study the pathogenesis of other enteric human pathogens that colonize mice, such as Salmonella Typhimurium or Citrobacter rodentium.

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Mice represent an invaluable in vivo model to study infection and diseases caused by gastrointestinal microorganisms. Here, we describe the methods used to study bacterial colonization and histopathological changes in mouse models of Helicobacter pylori-related disease.

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

Isolation of Single Intracellular Bacterial Communities Generated from a Murine Model of Urinary Tract Infection for Downstream Single-cell Analysis

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected in the urinary tract. The protocol can be broadly divided into three sections: the infection, bladder epithelial cell harvesting, and mouth micropipetting to isolate individual infected epithelial cells. The isolated epithelial cell contains viable bacterial cells and is nearly free of contaminating extracellular bacteria, making it ideal for downstream single-cell analysis. The time taken from the start of infection to obtaining a single intracellular bacterial community is about 8 h. This protocol is inexpensive to deploy and uses widely available materials, and we anticipate that it can also be utilized in other infection models to isolate single infected cells from cell mixtures even if those infected cells are rare. However, due to a potential risk in mouth micropipetting, this procedure is not recommended for highly infectious agents.

This protocol describes a simple method of isolating single, infected-bladder epithelial cells from a murine model of urinary tract infection.

다운스트림 단일 세포 분석에 대 한 요로 감염의 Murine 모델에서 생성 된 단일 세포내 세균성 지역 사회의 절연

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected ...

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models continue to be an essential tool for developing new antifibrotic strategies. Here we provide an effective method to investigate in vivo antifibrotic activity of human mesenchymal stromal cells obtained from whole umbilical cord (hUC-MSC) in attenuating bleomycin-induced lung injury. C57BL/6 mice receive a single endotracheal injection of bleomycin (1.5 U/kg body weight) followed by a double infusion of hUC-MSC (2.5 x 105) into the tail vein, 24 h and 7 days after the bleomycin administration. Upon sacrifice at days 8, 14, or 21, inflammatory and fibrotic changes, collagen content, and hUC-MSC presence in explanted lung tissue are analyzed. The injection of bleomycin into the mouse&#160;trachea allows the direct targeting of the lungs, leading to extensive pulmonary inflammation and fibrosis. The systemic administration of a double dose of hUC-MSC results in the early blunting of the bleomycin-induced lung injury. Intravenously infused hUC-MSC are transiently engrafted into the mouse lungs, where they exert their anti-inflammatory and antifibrotic activity. In conclusion, this protocol has been successfully applied for the preclinical testing of hUC-MSC in an experimental mouse model of human pulmonary fibrosis. However, this technique can be easily extended both to study the effect of different endotracheally administered substances on the pathophysiology of the lungs and to validate new anti-inflammatory and antifibrotic systemic therapies.

Here we present an effective method to investigate the antifibrotic activity of intravenously infused human mesenchymal stromal cells obtained from the whole umbilical cord following the induction of lung injury by an endotracheal injection of bleomycin in C57BL/6 mice. This protocol can be easily extended to the preclinical testing of other therapeutics.

Bleomycin의 내시경 주입에 의한 마우스 폐 손상의 유도

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

In Vivo Augmentation of Gut-Homing Regulatory T Cell Induction

Inflammatory bowel disease (IBD) is an inflammatory chronic disease in the gastrointestinal tract (GUT). In the United States, there are approximately 1.4 million IBD patients. It is generally accepted that a dysregulated immune response to gut bacteria initiates the disease and disrupts the mucosal epithelial barrier. We recently show that gut-homing regulatory T (Treg) cells are a promising therapy for IBD. Accordingly, this article presents a protocol for in vivo augmentation of gut-homing Treg cell induction. In this protocol, dendritic cells are engineered to produce locally high concentrations of two molecules de novo, active vitamin D (1,25-dihydroxyvitamin D or 1,25[OH]2D) and active vitamin A (retinoic acid or RA). We chose 1,25(OH)2D and RA based on previous findings showing that 1,25(OH)2D can induce the expression of regulatory molecules (e.g., forkhead box P3 and interleukin-10) and that RA can stimulate the expression of gut-homing receptors in T cells. To generate such engineered dendritic cells, we use a lentiviral vector to transduce dendritic cells to overexpress two genes. One gene is the cytochrome P450 family 27 subfamily B member 1 that encodes 25-hydroxyvitamin D 1&#945;-hydroxylase, which physiologically catalyzes the synthesis of 1,25(OH)2D. The other gene is the aldehyde dehydrogenase 1 family member A2 that encodes retinaldehyde dehydrogenase 2, which physiologically catalyzes the synthesis of RA. This protocol can be used for future investigation of gut-homing Treg cells in vivo.

Here we present a protocol for in vivo augmentation of gut-homing regulatory T cell induction. In this protocol, dendritic cells are engineered to locally produce high concentrations of the active vitamin D (1,25-dihydroxyvitamin D or 1,25[OH]2D) and the active vitamin A (retinoic acid or RA) de novo.

내장 호밍 규제 T 세포 유도의 생체 내 확대

Inflammatory bowel disease (IBD) is an inflammatory chronic disease in the gastrointestinal tract (GUT). In the United States, there are approximately 1.4 ...