이 작품은 네바다, Reno의 대학에서에서 시작 자금 및 NIGMS 부여 번호 P20 GM103650 건강의 국립 연구소에 의해 지원 되었다.

1. 동작 경기장 건물과 행동 분야에서 Optogenetic 자극 수 있도록 하드웨어 준비
<ol><li>빛을 박탈 행동 경기장을 구축, 66 cm3 x 61 x 89의 차원으로 상자를 만들 (35"L x 24" W x 26"H) 블랙 컬러 플 렉 시 글라스 아크릴 시트 (두께 3 m m) ( 재료의 표참조)의 만든. 이러한 상자를 만들려고 재료 로컬 하드웨어 매장에서 사용할 수 있어야. (그림 1A) 동작 방에 테이블 탑에이 상자를 배치 합니다.</li>
	<li>흑백 USB 3.0 CCD 카메라는 IR 긴 통과 830 nm 필터와 8 m m F1.4 C 마운트 렌즈를 장착 하는 마운트 ( 재료의 표참조) 블랙 박스 천장의 센터에. 장소 2 개의 적외선 LED 스트립 ( 재료의 표참조) 테이블 위에 어두운 경기장 (그림 1A)에서 애벌레를 조명 하기 위하여.</li>
	<li>LED 플랫폼 구축, 22 c m × 22 c m 평방 알루미늄 접시 (선호 그린 매트 블랙으로 마무리 한 반사를 제거 하는 스프레이)를 얻을. 격판덮개의 센터에서 CCD 카메라 주위에 맞게 충분히 큰 구멍을 뚫고 금속 커터를 사용 하 여.</li>
	<li>빨간색 LED 스트립 조명 ( 재료의 표참조)와 금속 플레이트 커버. 시리즈에서 LED 빛 스트립 와이어 솔더와 라즈베리 파이 2B 마이크로프로세서에 의해 제어 되는 커플러 릴레이에 스트립 와이어 피드 ( 재료의 표참조) (그림 1B 와 2).</li>
	<li>설치 하 고 LED 스트립 광 커플러 릴레이 연결 하기 전에 라즈베리 파이 프로세서에 우분투 친구/Raspian 제시/리눅스 기반의 운영 체제를 구성 합니다. 전원 공급 장치 LED 스트립 및 커플러 (그림 2)를 연결 ( 재료의 표참조). (그림 1B) CCD 카메라는 LED 플랫폼을 탑재 합니다. 참고: 우분투 메이 트 v16.04 운영 체제는 자유롭게 사용할 수 있습니다. 간단한 파이썬 기반 명령 집합 LED 가벼운 자극 (구문 파일 참조)의 프로그램 패턴을 쉽게 적용할 수 있습니다.</li>
	<li>행동 분야에서 여러 지점에서 동질적인 irradiance를 확인 합니다. 계의 도움으로 경기장의 표면에 절대 방사를 측정 하 고 경기장의 표면에 걸쳐 ~1.3 W/m2 로 그것을 결정 합니다. 참고:이 강도에서 더 중대 한 변화에서에서 관찰 되었다 온도 실험의 과정을 통해. 또 다른 연구10 ~1.9 W/m2 의 높은 방사를 사용 하 고 실험의 과정을 통해 온도에 아무런 변화를 관찰.</li>
</ol>2. 동작 분석 초파리 애벌레의 준비
<ol><li>표준 비행 거리 음식에 파리를 유지 ( 재료의 표참조) 25 ° C, 50-60 %RH, 그리고 12 h/12 h 명암 주기에서.</li>
	<li>
한 쌍의 ORNs에서 CsChrimson 을 표현 하기 위하여 처녀 여성에서에서 교차 UAS-벨트-CsChrimson 선 OrX Gal4 선에서 남성 (21 애벌레 냄새 수용 체 중 하나에 해당 하는 'X' (또는) 각 고유 하 게 표현 되는 유전자 ORNs의 21 쌍)의9,11.
	<ol>
<li>또는, 모든 21 애벌레 ORNs에서 CsChrimson 을 표현 하기 위하여 UAS-벨트-CsChrimson 에서 처녀 여성 크로스 라인 남성에 게는 Orco Gal4 선 ('Orco'는 모든 21 ORNs에 표현 되는 공동 수용 체)에서.</li>
		<li>이 실험에서 컨트롤로 자체로 UAS-벨트-CsChrimson 라인을 사용 합니다. 참고: 여기에 나열 된 비행 주식 모두에서 사용할 수 있습니다 블루밍턴 초파리 재고 센터 ( 재료의 표참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
십자가에서 남성과 여성의 파리 친구 및 48 h에 대 한 알 수 있습니다, 일단 성인 신선한 유리병에 전송.
	<ol>
<li>계란을 포함 하는 식품 유리병의 표면에 400 µ M, 모든 trans 망막 (ATR) 디 메 틸 sulfoxide (DMSO)에 용 해 및 89 m m 자당 증류수에 용 해를 포함 하는 혼합물의 400 µ L를 추가 합니다. 참고: 작은 양의 자당 ATR 솔루션의 애벌레 먹이 촉진 합니다. ATR은 CsChrimson 식9,10upregulating에 필요한 공동 인자 이다. ATR은 빛에 민감한.</li>
		<li>ATR 계란을 포함 하는 음식 튜브에 추가 되 면 추가 72 h에 대 한 어둠 속에서 튜브를 품 어. 참고:이 연구 및 위의 두 연구 ATR 먹이 인 애벌레 행동에 효과 관찰 하지, 하는 동안 제어 ATR ATR를 포함 하지 않는 위의 혼합물의 동일한 금액을 테스트 라인을 쓰는 하 여 먹이의 효과 대 한 것이 좋습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>높은 밀도 (15%) 자당 솔루션을 사용 하 여 부유 하 여 제 3 탈피 애벌레 (달걀 누워 후 ~ 120 h) 비행 식품의 표면에서 추출. 한 P1000 사용 micropipette 1000 mL 유리 비 커에 자당 솔루션의 표면에 떠 있는 애벌레를 구분 합니다.</li>
	<li>워시 애벌레 때마다 유리 비 커에 800 mL 신선한 증류수를 교환 하 여 3-4 회. 애벌레 동작 분석 결과를 그들을 복종 하기 전에 10 분 동안 휴식을 하실 수 있습니다.</li>
</ol>3. 동작 분석 결과
<ol><li>(22-25 ° C) 사이 일관 된 온도 유지 및 동작 방에 습도 (50와 60 %RH) 사이.</li>
	<li>
22 cm x 22 cm 광장 페 트리 접시에 녹은 agarose (1.5%)의 따르는 150 mL로 애벌레 크롤링 매체를 준비 합니다. 1 페 트리 접시의 분석 결과, 실험 당 8-10 시험의 각 재판 부 어 있다. 응고 및 동작 분석 결과에서 그들을 사용 하기 전에 접시에 1-2 시간 기다린 agarose를 허용 합니다.
	<ol>
<li>전송 준비 3-탈피 애벌레의 20 개 이상 하는 센터의 페 트리 접시 (그림 1C). 페 트리 접시의 뚜껑을 커버. CCD 카메라 아래 행동 분야에서 페 트리 접시를 놓습니다. 참고: 실험에 따라 동작 분석 실험 일반적으로 수행 됩니다 3-5 분. odorant 지도 단서를 제공 하는 분석 결과에 사용 되 면 그것은 관찰 되었다 결과 냄새 그라데이션 약 5 분의1에 대 한 안정적인 유지. 긴 시험 시간은 권장 하지 않습니다. 탈수 또는 장기간된 630 nm 빨간불을 노출에서 애벌레에 해로운 효과 하지이 시간 포인트 내에서 관찰 되었습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>설정에 850 nm 적외선 LED 가벼운 소스 동영상에 애벌레를 시각화. 애벌레 움직임을 기록 하는 CCD 카메라를 시작 합니다.</li>
	<li>라즈베리 파이 프로세서, 프로그램 레드 빛 자극의 적절 한 패턴을 관리 하는 절차와 관련 된 소프트웨어를 사용 하 여. 참고: 일련의 간단한 파이썬 기반 명령 (구문 파일 참조) LED 가벼운 자극의 프로그램 패턴을 쉽게 적용할 수 있습니다.</li>
</ol>4. 데이터 처리 및 분석
<ol><li>Matlab 같은 모든 사용 가능한 프로그래밍 소프트웨어에 각 재판의 녹화 된 비디오를 가져옵니다.</li>
	<li>시간의 기능으로 동영상에 있는 모든 애벌레의 XY 좌표를 가져옵니다. 추적 소프트웨어의 한계에 따라 15-20 제 3 탈피 애벌레 단일 영화1,8에서 추적할 수 있습니다. 참고: 세트 (구문 파일 참조) 적절 한 조건에 맞게 쉽게 적응 될 수 있는 간단한 Matlab 코드 ('Tracklarva')이 제공 됩니다. 이 실험에서 모든 시험을 결합 하 여 프로그램과 분석 결과의 전체 기간에 대 한 모든 유 충의 XY 좌표를 출력 (아래 코드 구문 참조). 또는, 한 연구자에 자유롭게 사용할 수 있는 여러 가지 오픈 소스 기반된 프로그램을 사용할 수 있습니다. 예: JAABA (http://jaaba.sourceforge.net/)12.</li>
	<li>
생성 된 XY 좌표를 사용 하 여 애벌레 궤적 플롯을 추가 애벌레 운동 분석.
	<ol>
<li>행동 분석에 대 한 시퀀스 실행의 교류로 개별 애벌레 궤적 세그먼트 속도, 경로 곡률, 제목 각도, 탐색 통계를 사용 합니다.</li>
		<li>실행은 앞으로 운동의 연속 기간으로 정의 됩니다. 회전 연속 실행을 구분합니다. 궤적 방향 각도 변경 했다 회전 표시 > 45 ° (구문 파일 참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>필요에 따라 길이, 실행된 방향 및 다른 매개 변수를 실행 하는 실행된 속도 대 한 평균 값을 계산 합니다. 참고: 애벌레 궤도에서 '실행' 하 고 '중지'를 추출 하는 간단한 구문 집합이 제공 됩니다 (구문 파일 참조). 간단한 Matlab 또는 Excel 기반된 함수 '실행된 속도'에 대 한 값을 계산 실행' 길이'를 추출 된 데이터에 적용할 수 있는 등.</li>
	<li>± SEM. 의미 각 행동 메트릭에 대 한 데이터를 나타내는</li>
</ol>

<ol>
	<li>Mathew, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversity+among+sensory+receptors+in+a+Drosophila+olfactory+circuit.">Functional diversity among sensory receptors in a Drosophila olfactory circuit.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 2134-2143 (2013).</li><li>Ramaekers, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+maps+without+cellular+redundancy+at+successive+levels+of+the+Drosophila+larval+olfactory+circuit.">Glomerular maps without cellular redundancy at successive levels of the Drosophila larval olfactory circuit.</a> Current biology : CB. 15, 982-992 (2005).</li><li>Couto, A., Alenius, M., Dickson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular,+anatomical,+and+functional+organization+of+the+Drosophila+olfactory+system.">Molecular, anatomical, and functional organization of the Drosophila olfactory system.</a> Current biology : CB. 15, 1535-1547 (2005).</li><li>Kreher, S. A., Kwon, J. Y., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+basis+of+odor+coding+in+the+Drosophila+larva.">The molecular basis of odor coding in the Drosophila larva.</a> Neuron. 46, 445-456 (2005).</li><li>Kreher, S. A., Mathew, D., Kim, J., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+sensory+input+into+behavioral+output+via+an+olfactory+system.">Translation of sensory input into behavioral output via an olfactory system.</a> Neuron. 59, 110-124 (2008).</li><li>Hallem, E. A., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coding+of+odors+by+a+receptor+repertoire.">Coding of odors by a receptor repertoire.</a> Cell. 125, 143-160 (2006).</li><li>Monte, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+larval+olfactory+response+in+Drosophila+and+its+genetic+basis.">Characterization of the larval olfactory response in Drosophila and its genetic basis.</a> Behav Genet. 19, 267-283 (1989).</li><li>Gershow, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+airborne+cues+to+study+small+animal+navigation.">Controlling airborne cues to study small animal navigation.</a> Nature methods. 9, 290-296 (2012).</li><li>Klapoetke, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations.">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nature methods. 11, 338-346 (2014).</li><li>Hernandez-Nunez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse-correlation+analysis+of+navigation+dynamics+in+Drosophila+larva+using+optogenetics.">Reverse-correlation analysis of navigation dynamics in Drosophila larva using optogenetics.</a> eLife. 4, (2015).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Kabra, M., Robie, A. A., Rivera-Alba, M., Branson, S., Branson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAABA:+interactive+machine+learning+for+automatic+annotation+of+animal+behavior.">JAABA: interactive machine learning for automatic annotation of animal behavior.</a> Nature methods. 10, 64-67 (2013).</li><li>Newquist, G., Novenschi, A., Kohler, D., Mathew, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+contributions+of+Olfactory+Receptor+Neurons+in+a+Drosophila+olfactory+circuit.">Differential contributions of Olfactory Receptor Neurons in a Drosophila olfactory circuit.</a> eNeuro. 3, (2016).</li><li>Schulze, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamical+feature+extraction+at+the+sensory+periphery+guides+chemotaxis.">Dynamical feature extraction at the sensory periphery guides chemotaxis.</a> eLife. 4, (2015).</li><li>Tastekin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+Subesophageal+Zone+in+Sensorimotor+Control+of+Orientation+in+Drosophila+Larva.">Role of the Subesophageal Zone in Sensorimotor Control of Orientation in Drosophila Larva.</a> Current Biology. 25, 1448-1460 (2015).</li><li>Famiglietti, E. V., Kolb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+ON-and+OFF-center+responses+in+retinal+ganglion+cells.">Structural basis for ON-and OFF-center responses in retinal ganglion cells.</a> Science. 194, 193-195 (1976).</li><li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+thermotaxis+in+Caenorhabditis+elegans+is+mediated+by+distinct+sensorimotor+strategies+driven+by+the+AFD+thermosensory+neurons.">Bidirectional thermotaxis in Caenorhabditis elegans is mediated by distinct sensorimotor strategies driven by the AFD thermosensory neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, 2776-2781 (2014).</li><li>Berck, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+wiring+diagram+of+a+glomerular+olfactory+system.">The wiring diagram of a glomerular olfactory system.</a> eLife. 5, (2016).</li></ol>

저자는 공개 없다.

여기, 우리가 초파리 애벌레 동작 동시 optogenetic 후 각 뉴런의 활성화에 대 한 응답에서의 측정을 허용 하는 방법을 설명 합니다. 앞에서 설명한 방법1,를 추적 애벌레8 기술을 사용 하 여 다른 냄새 배달 ORNs를 활성화. 그러나, 이러한 방법은 특이성 또는 온 활성화의 시간적 패턴에 대해 제어할 수 없습니다. 우리의 방법은 온 활성화의 더 정밀 하 ...

초파리 애벌레의 환경에서 후 각 정보는 궁극적으로 애벌레 동작1,2,3,4결정만 21 기능적으로 뚜렷한 ORNs, 활동에 의해 감지입니다. 그러나, 상대적으로 작은 논리는 감각 정보를 인코딩하는이 21 ORNs의 활동에 대 한 알려져 있다. 따라서 실험적으로 측정 하는 동작을 각 애벌레 ORN의 기능적 기여 필요가 있다.
하지만 초파리 애벌레 ORNs의 전체 레 퍼 토리의 감각 응답 프로필 세부1,,45, 후 각 회로 하 고 그로 인하여 개별 ORNs의 기여에서에서 공부 하고있다 탐색 동작 크게 알려지지 않은 남아 있습니다. 애벌레 행동 연구에 어려움 공간 및 일시적으로 활성화 한 ORNs 하는 무 능력 때문에 지금까지 발생 한다. 특히 21 초파리 애벌레 ORNs의 19를 활성화 하는 odorants의 패널이 했다 최근 설명된1. 낮은 농도에서 패널에서 각 odorant 그것의 동족 온 에서만에서 생리 응답 elicits. 그러나, 기존의 행동 분석에 일반적으로 사용 되는 높은 농도에서 각 odorant 여러 ORNs1,,56생리 응답 elicits. 또한,이 패널에서 odorants volatilities 안정적인 냄새 그라디언트7,8의 형성에 의존 하는 행동 연구의 해석을 복잡 하 게 하는 다양 한 있다. 마지막으로, 자연스럽 게 발생 냄새 자극 실험실 조건 하에서 복제 하기 어려운 일시적인 구성 요소가 있다. 그것은 따라서 동시에 공간 및 시간적으로 개별 ORNs를 활성화 하는 동안 애벌레 동작을 측정할 수 있는 방법을 개발 하는 것이 중요.
여기, 우리는 앞에서 설명한 애벌레 추적 이점이 메서드 분석 실험1,8보여 줍니다. Gershow 외 에 설명 된 추적 분석 결과 동작 경기장8에서 냄새의 안정 그라디언트를 유지 하기 위해 전자 제어 밸브를 사용 합니다. 그러나, 냄새 자극 설정 구축에 관련 된 복잡 한 엔지니어링의 수준 때문에이 메서드는 다른 실험실에서 복제 어렵다. 또한, 특히 단일 ORNs를 활성화 하기 위해 odorants를 사용 하 여 관련 문제는 해결 되지 않은 남아 있습니다. 매튜 외 에 설명 된 추적 분석 결과 간단 하 게 냄새 배달 시스템을 사용 하지만 결과 냄새 그라데이션 테스트 odorant의 변동에 따라 달라 집니다1분석 결과 긴 기간에 대 한 안정적입니다. 따라서, 가벼운 자극으로 냄새 자극을 대체 하 여 우리의 방법은 특이성의 장점과 온 활성화의 정확한 시간 제어 하 고 다른 힘의 기온 변화도 냄새의 형성에 종속 되지 않습니다.
우리의 방법은 쉽게 설정 이며 연구자 초파리 애벌레 탐색의 측면을 측정 하는 데 관심이 대 한 적절 한입니다. 이 기술은 연구원은 드라이브 선택의 그들의 마음에 드는 시스템의 neuron(s)에서 CsChrimson 의 식 수는 다른 모델 시스템에 적응 될 수 있습니다. CsChrimson 채널 rhodopsin의 빨간색 이동 버전입니다. 그것은 애벌레의 phototaxis 시스템에 표시 되지 않는 파장에서 활성화 됩니다. 따라서 특이성, 안정성 및 재현성9뉴런의 활동을 조작할 수 있습니다. 계정 과목의 크기 변화에 대 한 소프트웨어를 작성 하는 사용자 정의 수정 하 여이 방법을 쉽게 다른 곤충 종의 크롤링 애벌레에 맞게 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Video camera to capture larval movement</td>
			<td style="width:296px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">CCD Camera&#160;</td>
			<td style="width:296px;">Edmund Optics</td>
			<td style="width:208px;">106215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">M52 to M55 Filter Thread Adapter</td>
			<td style="width:296px;">Edmund Optics</td>
			<td>59-446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">2&#34; Square Threaded Filter Holder for Imaging Lenses&#160;</td>
			<td style="width:296px;">Edmund Optics</td>
			<td>59-445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">RG-715, 2&#34; Sq. Longpass Filter</td>
			<td style="width:296px;">Edmund Optics</td>
			<td>46-066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Electronics for optogenetic setup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Raspberry Pi 2B</td>
			<td>RASPBERRY-PI.org</td>
			<td>RPI2-MODB-V1.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">3 Channel programmable power supply</td>
			<td>newegg.com</td>
			<td>9SIA3C62037092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">8 Channel optocoupler relay</td>
			<td>amazon.com</td>
			<td>6454319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">630nm Quad-row LED strip lights</td>
			<td>environmentallights.com</td>
			<td>red3528-450-reel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:359px;">850nm LED strips</td>
			<td>environmentallights.com</td>
			<td>wp-4000K-CC5050-60x2-kit</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:359px;">Software&#160;</td>
			<td style="width:296px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:359px;">Matlab</td>
			<td>Mathworks Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:359px;">Ubuntu MATE v16.04</td>
			<td>Nubuntu</td>
			<td>https://github.com/yslo/nubuntu</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Other items</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Plexiglass black acrylic</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td style="width:208px;">MC1184848bl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Fly food and other reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Nutrifly fly food</td>
			<td style="width:296px;">Genesee Scientific</td>
			<td>66-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Agarose powder</td>
			<td style="width:296px;">Genesee Scientific</td>
			<td>20-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">22cm X 22cm square petri-dish</td>
			<td style="width:296px;">VWR Inc.</td>
			<td>25382-327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">All trans-retinal</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Flies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">UAS-IVS-CsChrimson&#160;</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>55134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:359px;">Orco-Gal4</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>26818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Or42a-Gal4</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>9970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">Or7a-Gal4</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>23907</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tracking drosophila larval behavior in response to optogenetic stimulation of olfactory neurons

냄새 소스 쪽으로 이동 하는 곤충의 능력은 그들의 1 차 후 각 수용 체 신경 (ORNs)의 활동을 기반으로 합니다. Odorants 온 응답에 대 한 상당한 양의 정보를 생성 하는 동안 운전 행동 응답에 특정 ORNs의 역할 제대로 이해 남아 있습니다. 개별 ORNs, 여러 ORNs 단일 odorants, 그리고 어려움을 자연스럽 게 관찰된 시간적 변화 후 각 자극을 사용 하 여 복제에 의해 활성화 활성화 하는 odorants의 다른 volatilities 인해 발생 하는 동작 분석에 합병증 실험실에서 기존의 냄새 배달 방법입니다. 여기, 우리는 분석 초파리 애벌레 동작의 ORNs의 동시 optogenetic 자극에 응답에서 하는 프로토콜을 설명 합니다. 여기에 사용 된 optogenetic 기술 ORN 활성화의 특이성 ORN 활성화의 시간적 패턴의 정밀 하 게 제어 가능 합니다. 해당 애벌레 움직임 추적, 디지털 기록, 및 사용자 정의 작성 된 소프트웨어를 사용 하 여 분석. 가벼운 자극으로 냄새 자극을 대체 하 여이 메서드 애벌레 행동에 미치는 영향을 연구 하기 위해 개별 ORN 활성화 더 정밀 하 게 제어할 수 있습니다. 우리의 방법은 애벌레 행동에 로컬 뉴런 (LNs) 뿐만 아니라 2 차 프로젝션 뉴런 (PNs)의 영향을 공부 더 연장 될 수 있습니다. 이 방법은 따라서 후 각 회로 기능의 포괄적인 절 개 하면 그리고 어떻게 후 각 신경 활동에 대 한 보완 연구에 행동 반응 번역.

ORN 활성화의 특이성을 보여 우리의 방법 성공적으로 두 다른 온 (ORN::7a & ORN::42a)의 영향을 결정 하기 위해 적용 된 애벌레 동작 (그림 3)에 (ORNs Or7a 또는 Or42a을 표현) 활성화. 최근 연구는 개별 일치 애벌레 ORNs 기능적으로 뚜렷한1,10,13, 우리의 대표적인 데이터 표현 CsChrimson ORN::7a ?...

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Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

이 프로토콜 분석 초파리 애벌레 동시 optogenetic 그것의 후 각 신경의 자극에 대 한 응답에서의 탐색 동작 합니다. 630 nm 파장의 빛은 빨간색 이동 채널 rhodopsin 표현 개별 후 각 신경 세포를 활성화 하는 데 사용 됩니다. 애벌레의 움직임이 동시에 추적 하 고 디지털 기록, 사용자 작성 소프트웨어를 사용 하 여 분석.

초파리 애벌레 동작 Optogenetic 후 각 신경의 자극에 대 한 응답 추적

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

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Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

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7.2K 조회수.  University of Nevada. 이 프로토콜 분석 초파리 애벌레 동시 optogenetic 그것의 후 각 신경의 자극에 대 한 응답에서의 탐색 동작 합니다. 630 nm 파장의 빛은 빨간색 이동 채널 rhodopsin 표현 개별 후 각 신경 세포를 활성화 하는 데 사용 됩니다. 애벌레의 움직임이 동시에 추적 하 고 디지털 기록, 사용자 작성 소프트웨어를 사용 하 여 분석.

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Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

연구

신경과학

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of its convenient genetics and fully sequenced genome. Additionally, the larval nervous system is an ideal model system to study mechanisms of axonal transport as the larval segmental nerves contain bundles of axons with their cell bodies located within the brain and their nerve terminals ending along the length of the body. Here we describe the procedure for visualization of synaptic vesicle proteins within larval segmental nerves. If done correctly, all components of the nervous system, along with associated tissues such as muscles and NMJs, remain intact, undamaged, and ready to be visualized. 3rd instar larvae carrying various mutations are dissected, fixed, incubated with synaptic vesicle antibodies, visualized and compared to wild type larvae. This procedure can be adapted for several different synaptic or neuronal antibodies and changes in the distribution of a variety of proteins can be easily observed within larval segmental nerves.

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Drosophila melanogaster larvae provide an ideal model system to investigate the mechanisms of axonal transport within larval segmental nerves. Using this procedure, 3rd instar larvae carrying various mutations can be compared to wild type larvae.

3 애벌레 Segmental 신경의 시각화 차 Instar Drosophila 애벌레 준비

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells in the walls of the lateral ventricle give rise to neuroblasts that migrate for several millimeters along the rostral migratory stream (RMS) to reach and incorporate into the olfactory bulb. To study the different steps and the impact of adult-born neuron integration into preexisting olfactory circuits, it is necessary to selectively label and manipulate the activity of this specific population of neurons. The recent development of optogenetic technologies offers the opportunity to use light to precisely activate this specific cohort of neurons without affecting surrounding neurons4,5. Here, we present a series of procedures to virally express Channelrhodopsin2(ChR2)-YFP in a temporally restricted cohort of neuroblasts in the RMS before they reach the olfactory bulb and become adult-born neurons. In addition, we show how to implant and calibrate a miniature LED for chronic in vivo stimulation of ChR2-expressing neurons.

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Adult-born neurons of the olfactory bulb can be optogenetically controlled using Channelrhodopsin2-expressing lentiviral injection in the rostral migratory stream and chronic photostimulation with an implanted miniature LED.

만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 Optogenetic의 자극

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

분석의 방법 Drosophila 행동

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In the following we describe the methodological details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with genetic interference, provides a handle to analyze the neuronal and molecular fundamentals of specifically associative learning in a simple larval brain.
Organisms can use past experience to adjust present behavior. Such acquisition of behavioral potential can be defined as learning, and the physical bases of these potentials as memory traces1-4. Neuroscientists try to understand how these processes are organized in terms of molecular and neuronal changes in the brain by using a variety of methods in model organisms ranging from insects to vertebrates5,6. For such endeavors it is helpful to use model systems that are simple and experimentally accessible. The Drosophila larva has turned out to satisfy these demands based on the availability of robust behavioral assays, the existence of a variety of transgenic techniques and the elementary organization of the nervous system comprising only about 10,000 neurons (albeit with some concessions: cognitive limitations, few behavioral options, and richness of experience questionable)7-10.
Drosophila larvae can form associations between odors and appetitive gustatory reinforcement like sugar11-14. In a standard assay, established in the lab of B. Gerber, animals receive a two-odor reciprocal training: A first group of larvae is exposed to an odor A together with a gustatory reinforcer (sugar reward) and is subsequently exposed to an odor B without reinforcement 9. Meanwhile a second group of larvae receives reciprocal training while experiencing odor A without reinforcement and subsequently being exposed to odor B with reinforcement (sugar reward). In the following both groups are tested for their preference between the two odors. Relatively higher preferences for the rewarded odor reflect associative learning - presented as a performance index (PI). The conclusion regarding the associative nature of the performance index is compelling, because apart from the contingency between odors and tastants, other parameters, such as odor and reward exposure, passage of time and handling do not differ between the two groups9.

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are able to associate odor stimuli with gustatory reward. Here we describe a simple behavioral paradigm that allows the analysis of appetitive associative olfactory learning.

에 Appetitive 연관 강한 학습<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the elucidation of the molecular mechanisms involved in cognitive diseases1-7. Learning and memory can be assayed in larvae to study the effect of neurodevelopmental genes8-10 and in flies to measure the contribution of adult plasticity genes1-7. Furthermore, the short lifespan of Drosophila facilitates the analysis of genes mediating age-related memory impairment5,11-13. The availability of many inducible promoters that subdivide the Drosophila nervous system makes it possible to determine when and where a gene of interest is required for normal memory as well as relay of different aspects of the reinforcement signal3,4,14,16.
Studying memory in adult Drosophila allows for a detailed analysis of the behavior and circuitry involved and a measurement of long-term memory15-17. The length of the adult stage accommodates longer-term genetic, behavioral, dietary and pharmacological manipulations of memory, in addition to determining the effect of aging and neurodegenerative disease on memory3-6,11-13,15-21.
Classical conditioning is induced by the simultaneous presentation of a neutral odor cue (conditioned stimulus, CS+) and a reinforcement stimulus, e.g., an electric shock or sucrose, (unconditioned stimulus, US), that become associated with one another by the animal1,16. A second conditioned stimulus (CS-) is subsequently presented without the US. During the testing phase, Drosophila are simultaneously presented with CS+ and CS- odors. After the Drosophila are provided time to choose between the odors, the distribution of the animals is recorded. This procedure allows associative aversive or appetitive conditioning to be reliably measured without a bias introduced by the innate preference for either of the conditioned stimuli. Various control experiments are also performed to test whether all genotypes respond normally to odor and reinforcement alone.

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

The method to measure adult Drosophila associative memory is described. The assay is based on the ability of the fly to associate an odor presented with a negative reinforcer (electric shock) and then recall this information at a later time, allowing memory to be measured.

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Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

A growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive manipulation of the neural activity of specific neurons in Drosophila melanogaster1. Chief among these are optogenetic tools, which enable the activation or silencing of specific neurons in the intact and freely moving animal using bright light. Channelrhodopsin (ChR2) is a light-activated cation channel that, when activated by blue light, causes depolarization of neurons that express it. ChR2 has been effective for identifying neurons critical for specific behaviors, such as CO2 avoidance, proboscis extension and giant-fiber mediated startle response2-4. However, as the intense light sources used to stimulate ChR2 also stimulate photoreceptors, these optogenetic techniques have not previously been used in the visual system. Here, we combine an optogenetic approach with a mutation that impairs phototransduction to demonstrate that activation of a cluster of loom-sensitive neurons in the fly's optic lobe, Foma-1 neurons, can drive an escape behavior used to avoid collision. We used a null allele of a critical component of the phototransduction cascade, phospholipase C-&beta;, encoded by the norpA gene, to render the flies blind and also use the Gal4-UAS transcriptional activator system to drive expression of ChR2 in the Foma-1 neurons. Individual flies are placed on a small platform surrounded by blue LEDs. When the LEDs are illuminated, the flies quickly take-off into flight, in a manner similar to visually driven loom-escape behavior. We believe that this technique can be easily adapted to examine other behaviors in freely moving flies.

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Genetically encoded optogenetic tools enable noninvasive manipulation of specific neurons in the Drosophila brain. Such tools can identify neurons whose activation is sufficient to elicit or suppress particular behaviors. Here we present a method for activating Channelrhodopsin2 that is expressed in targeted neurons in freely walking flies.

의 이스케이프 문제의 Optogenetic의 자극<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

에있는 후각 수용체 뉴런의 전체 마운트 Immunolabeling<em&gt; 초파리</em&gt; 안테나

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

설치류 중추 신경계의 생체 Optogenetic 자극

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Optogenetic Stimulation of the Auditory Nerve

Direct electrical stimulation of spiral ganglion neurons (SGNs) by cochlear implants (CIs) enables open speech comprehension in the majority of implanted deaf subjects1-6. Nonetheless, sound coding with current CIs has poor frequency and intensity resolution due to broad current spread from each electrode contact activating a large number of SGNs along the tonotopic axis of the cochlea7-9. Optical stimulation is proposed as an alternative to electrical stimulation that promises spatially more confined activation of SGNs and, hence, higher frequency resolution of coding. In recent years, direct infrared illumination of&#160;the cochlea has been used to evoke responses in the auditory nerve10. Nevertheless it requires higher energies than electrical stimulation10,11 and uncertainty remains as to the underlying mechanism12. Here we describe a method based on optogenetics to stimulate SGNs with low intensity blue light, using transgenic mice with neuronal expression of channelrhodopsin 2 (ChR2)13 or virus-mediated expression of the ChR2-variant CatCh14. We used micro-light emitting diodes (&#181;LEDs) and fiber-coupled lasers to stimulate ChR2-expressing SGNs through a small artificial opening (cochleostomy) or the round window. We assayed the responses by scalp recordings of light-evoked potentials (optogenetic auditory brainstem response: oABR) or by microelectrode recordings from the auditory pathway and compared them with acoustic and electrical stimulation.

Cochlear implants (CIs) enable hearing by direct electrical stimulation of the auditory nerve. However, poor frequency and intensity resolution limits the quality of hearing with CIs. Here we describe optogenetic stimulation of the auditory nerve in mice as an alternative strategy for auditory research and developing future CIs.

청각 신경의 자극 Optogenetic

Direct electrical stimulation of spiral ganglion neurons (SGNs) by cochlear implants (CIs) enables open speech comprehension in the majority of implanted ...