Name: a proximal culture method to study paracrine signaling between cells
Uploaded: 2018-08-28T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells at JoVE.com

우리는이 실험에 대 한 조직 컬렉션에 그들의 참여에 대 한 환자에 게 빚을입니다. 국방부 OCRP 난소 암 아카데미 상 (W81XWH-15-0253) 및 Anirban K. 미트 라에 콜린의 꿈 재단에서 파일럿 수상이이 연구 지원.

프로토콜은 인디애나 대학의 제도적 규제 위원회의 지침을 따릅니다.
1. 세포 준비
<ol><li>
절연 및 인간의 기본 mesothelial 세포의 문화
	<ol>
<li>격리 인간의 기본 mesothelial 세포 (HPMCs) 인간의 omentum17,18 위에서 설명한 고에 그들을 성장에서 성장 매체 [Dulbecco의 수정이 글의 중간 (DMEM) 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 포함 된 완료 페니실린-스, 1% 비 본질적인 아미노산, 및 1% 비타민] 37 ° C, 5% CO2. 참고:는 HPMCs는 100% 합류 (그림 1A)에 일반적으로 성장 된다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
난소 암 세포의 성장 조건
	<ol>
<li>37 ° C, 5% CO2에서 완전 한 성장 매체에 HeyA8 난소 암 세포 성장. 참고: 사용 HeyA8 세포 성장된 약 80% 합류 (그림 1B).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 세포 배양
<ol><li>
인접 문화 설정
	<ol>
<li>사용 Transwell 0.4 μ m (108 모/cm2) 공과 4.67 cm2 성장 지역으로 10 μ m 두께 조직 문화 처리 폴 리 카보 네이트 막으로 6 잘 플레이트에 대 한 삽입합니다. 필요한 경우, 성장 영역에 따라 시드 셀의 수를 확장 하 여 다른 삽입 크기에 대 한 최적화. 따뜻한 완벽 한 성장 매체, 트립 신, 그리고 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 37 ° c 사용 하기 전에.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
삽입을 준비 하 고
	<ol>
<li>삽입의 막의 낮은 표면에 HeyA8 셀 씨앗 소독 집게를 사용 하 여 포장에서 삽입을 제거 하 고 살 균 15 cm 문화 접시에 거꾸로 배치.</li>
		<li>그것이 거꾸로 삽입을 수용 하거나 어떤 적절 한 살 균 컨테이너와 대체 깊이 15 cm 접시를 사용 합니다. 실험에 따라 15cm 접시에 삽입의 필요한 수를 놓습니다.</li>
		<li>레이블 컨트롤 세 개 및 3 개의 실험 조건 따라 삽입의 가장자리에 표시와 함께.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
암 세포 준비
	<ol>
<li>25 c m2 플라스 크 (2 ~ 106 셀 x) 합류 점 80%에 성장 하는 HeyA8 세포 trypsinize, 40-60 s에 대 한 트립 신 (0.25%)의 1 mL를 추가 하 고 완전 한 성장 매체의 6 mL와 트립 신을 중화.</li>
		<li>실내 온도 (RT) 3 분 동안에 500 x g 에서 세포를 원심, 상쾌한, 삭제 하 고 완전 한 성장 매체의 5 mL에 셀 펠 릿 resuspend. Trypan blue 염료 제외 메서드를 사용 하 여 라이브 셀을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
암 세포를 뿌리기
	<ol>
<li>완전 한 성장 매체에 라이브 HeyA8 셀의 100000 셀/mL를 일시 중단 합니다. 신중 하 게 (지금 직면 하 고, 반전은 이후) 삽입의 하단에 완전 한 성장 매체의 800 μ에 80000 HeyA8 셀 씨.</li>
		<li>셀 삽입 (그림 1C)에 남아 있도록 돔 모양 형성 세포 씨앗 막의 센터에서 시작 하 고 천천히 pipetting 동안 동심원에서 바깥쪽으로 이동. 매체의 어떤 유출 방지 하기 위해 가장자리에서 3 m m 이상가 하지 마십시오. 참고: 시드 셀의 수는 세포의 성장 속도 실험의 기간에 따라 달라 집니다. HeyA8 셀이 인접 문화에 대 한 시드 수 최적화 했다 고 셀 3 일간의 끝에 80-90% 합칠을 될 것입니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
암 셀 첨부 파일
	<ol>
<li>15 cm 접시를 커버 하 고 신중 하 게 CO2 배양 기에 삽입을 포함 하는 접시를 이동 합니다. 그것은 매체 및이 단계에서 삽입에 셀의 드롭 방해 중요입니다. 암 세포는 삽입을 연결할 수 있도록 4 h 37 ° C에서 세포를 둡니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Mesothelial 세포 준비
	<ol>
<li>약 4 h 후 trypsinize HPMCs 1-2 분에 대 한 트립 신 (0.25%)의 2 개 mL와 75 c m2 플라스 크 (4 ~ 106 셀 x) 합류 점 100%에 성장 하 고 완전 한 성장 매체의 12 mL와 트립 신을 중화.</li>
		<li>500 x g RT에 3 분에 세포를 원심, 완전 한 성장 매체의 10 mL에 셀 펠 릿 resuspend 고 trypan blue 염료 제외 메서드를 사용 하 여 라이브 셀.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Mesothelial 세포 시드
	<ol>
<li>완전 한 성장 매체에 라이브 HPMCs의 300, 000 셀/mL를 일시 중단 합니다. 6 잘 플레이트의 각 음에 신선한 완전 한 성장 매체의 2.5 mL를 추가 합니다. 조심 스럽게 biosafety 후드에 밖으로 삽입을 포함 하는 15 cm 접시 가져. 소독 집게를 사용 하 여 삽입을 플립 하 고 완전 한 성장 매체 (그림 1C)에 낮은 표면에 부착 된 HeyA8 세포와 직 립, 그렇게 6 잘 플레이트의 우물에 두십시오.</li>
		<li>씨앗 450000 HPMCs HPMC 컨트롤에 대 한 HeyA8 셀 없이 삽입 (그림 1C) 우물의 아래 직면 하 고 표면에 연결 하는 HeyA8 세포와 삽입의 안쪽에 성장 매체의 1.5 mL 중에 일시 중지. HeyA8 컨트롤에 세포 없이 성장 매체의 1.5 mL를 추가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
성장 하는 인접 문화
	<ol>
<li>인접 문화 72 h에 대 한 37 ° C, 5% CO2 에서 CO2 인큐베이터에서 성장 하자. 필요한 경우, 매체를 다음과 같이 보충 수 있습니다.<ol>
<li>삽입의 내부에 대 한 750 µ L을 제거 하 고 신선한 완전 한 성장 매체의 750 µ L를 추가 합니다.</li>
			<li>삽입 (6 잘 플레이트)의 외부에 대 한 1 mL을 제거 하 고 신선한 완전 한 성장 매체의 1 mL를 추가 합니다. 1 mL 변경 한 번에 매체의 편의 위해 선택 되었다. 원하는, 1.25 mL은 제거 하 고 대신 대체 수 있습니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
셀을 수집
	<ol>
<li>인접 문화의 72 h 후 세포를 수집 합니다. HeyA8 셀과 HPMCs Trypsinize의 교차 오염을 방지 하기 위해이 단계에서 특별 한 주의 셀, 그들, 원심 고 교차 오염을 방지 하기 위해 멤브레인에 세포를 lysing 대신 펠 릿을 lyse.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Trypsinizing 셀
	<ol>
<li>1 x PBS와 삽입의 양쪽 모두를 씻어.</li>
		<li>새로운 우물을 삽입 전송 하 고 트립 신을 추가 합니다. 삽입의 안쪽에 트립 신 0.5 mL을 추가 하 고 trypsinize는 삽입의 낮은 표면에 부착 된 암 세포를 6 잘 플레이트 trypsin의 2 개 mL를 추가. 37 ° c.에 2 분 동안 접시를 품 어</li>
	</ol>
</li>
	<li>
중화는 트립 신
	<ol>
<li>중화 하는 트립 신, 아래로, 플라스틱 그리고 다음 셀을 받아 고 레이블된 컬렉션 튜브에 그들을 전송 삽입의 내부에 완전 한 성장 매체의 1 mL를 추가 합니다. 완전 한 무력화에 대 한 완전 한 성장 매체의 추가적인 2 mL를 추가 합니다. 하지 막 세포의 교차 오염을 방지 하기 위해 pipetting 동안 피어스를 주의 한다.</li>
		<li>삽입의 하단에 있는 세포를 수집, 그 2 mL trypsin 플라스틱 추가 단계 12.2 아래쪽 표면에서 2-3 배 셀 6-잘 접시의 바닥에가. 성장 매체의 6 mL 접시의 하단에 트립 신을 무력화 하 고 레이블된 컬렉션 튜브 플레이트의 내용을 전송.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수집 하 고 세포를 lysing
	<ol>
<li>500 x g 3 분에 세포를 원심 하 고 미디어를 발음. Resuspend 및 RNA 추출에 대 한 페 놀 및 guanidine-안산-기반 세포 시 약의 0.7 mL와 함께 셀 펠 릿을 lyse. 어떤 적당 한 키트를 사용 하 여 RNA를 분리.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응
참고: 다음 단계 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응 (정량) 인접 문화 결과로 유전자 식 변화 연구를 설명 합니다.
<ol><li>정량에 대 한 RNA 샘플에서 cDNA를 준비 합니다. 해당 버퍼와 무작위 뇌관 어떤 적당 한 역전사를 사용 하 여 모든 mRNA의 반전 녹음 방송을 위해 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>Fibronectin (FN1) 및 E-cadherin (CDH1)의 mRNA 식 수준에 변화를 평가 하 고 변형 성장 인자 베타 1 (TGFβ1) glyceraldehyde 3 인산 염 효소 (GAPDH)는 내부 제어와 정량에 의해. 표준화 된 상용 유전자 표정 분석 실험 ( 재료의 표참조)를 사용 하 여 뇌관 디자인 가능 하다.</li>
	<li>HPMC 컨트롤과 인접 문화에서 성장 하는 HPMCs와 HPMCs HeyA8 컨트롤과 인접 문화에서 성장 하는 HeyA8 셀을 비교 합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Hanahan, D., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessories+to+the+crime:+functions+of+cells+recruited+to+the+tumor+microenvironment.">Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment.</a> Cancer Cell. 21 (3), 309-322 (2012).</li><li>Cupedo, T., Mebius, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+interactions+in+lymph+node+development.">Cellular interactions in lymph node development.</a> The Journal of Immunology. 174 (1), 21-25 (2005).</li><li>Suvas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Substance+P+Neuropeptide+in+Inflammation,+Wound+Healing,+and+Tissue+Homeostasis.">Role of Substance P Neuropeptide in Inflammation, Wound Healing, and Tissue Homeostasis.</a> The Journal of Immunology. 199 (5), 1543-1552 (2017).</li><li>Gnecchi, M., Danieli, P., Malpasso, G., Ciuffreda, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+Mechanisms+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Tissue+Repair.">Paracrine Mechanisms of Mesenchymal Stem Cells in Tissue Repair.</a> Methods in Molecular Biology. , 123-146 (2016).</li><li>Lionetti, V., Bianchi, G., Recchia, F. A., Ventura, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+autocrine+and+paracrine+myocardial+signals:+an+emerging+therapeutic+strategy+in+heart+failure.">Control of autocrine and paracrine myocardial signals: an emerging therapeutic strategy in heart failure.</a> Heart Failure Reviews. 15 (6), 531-542 (2010).</li><li>Nicosia, R. F., Zorzi, P., Ligresti, G., Morishita, A., Aplin, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+regulation+of+angiogenesis+by+different+cell+types+in+the+aorta+ring+model.">Paracrine regulation of angiogenesis by different cell types in the aorta ring model.</a> International Journal of Developmental Biology. 55 (4-5), 447-453 (2011).</li><li>Pattabiraman, D. R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+the+cancer+stem+cells+-+what+challenges+do+they+pose.">Tackling the cancer stem cells - what challenges do they pose.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 13 (7), 497-512 (2014).</li><li>Plaks, V., Kong, N., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cancer+stem+cell+niche:+how+essential+is+the+niche+in+regulating+stemness+of+tumor+cells.">The cancer stem cell niche: how essential is the niche in regulating stemness of tumor cells.</a> Cell Stem Cell. 16 (3), 225-238 (2015).</li><li>Elenbaas, B., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotypic+signaling+between+epithelial+tumor+cells+and+fibroblasts+in+carcinoma+formation.">Heterotypic signaling between epithelial tumor cells and fibroblasts in carcinoma formation.</a> Experimental Cell Research. 264 (1), 169-184 (2001).</li><li>Wilson, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+ligands+exhibit+functional+differences+in+models+of+paracrine+and+autocrine+signaling.">EGFR ligands exhibit functional differences in models of paracrine and autocrine signaling.</a> Growth Factors. 30 (2), 107-116 (2012).</li><li>Kopan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling.">Notch signaling.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 4 (10), (2012).</li><li>Singh, A. B., Sugimoto, K., Harris, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Juxtacrine+activation+of+epidermal+growth+factor+(EGF)+receptor+by+membrane-anchored+heparin-binding+EGF-like+growth+factor+protects+epithelial+cells+from+anoikis+while+maintaining+an+epithelial+phenotype.">Juxtacrine activation of epidermal growth factor (EGF) receptor by membrane-anchored heparin-binding EGF-like growth factor protects epithelial cells from anoikis while maintaining an epithelial phenotype.</a> Journal of Biological Chemistry. 282 (45), 32890-32901 (2007).</li><li>Swartz, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment+complexity:+emerging+roles+in+cancer+therapy.">Tumor microenvironment complexity: emerging roles in cancer therapy.</a> Cancer Research. 72 (10), 2473-2480 (2012).</li><li>Mitra, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+reprogram+normal+fibroblasts+into+cancer-associated+fibroblasts+in+ovarian+cancer.">MicroRNAs reprogram normal fibroblasts into cancer-associated fibroblasts in ovarian cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (12), 1100-1108 (2012).</li><li>Nieman, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+promote+ovarian+cancer+metastasis+and+provide+energy+for+rapid+tumor+growth.">Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth.</a> Nature Medicine. 17 (11), 1498-1503 (2011).</li><li>Salimian Rizi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+mediates+metabolic+coupling+of+omentum-derived+adipose+stroma+to+ovarian+and+endometrial+cancer+cells.">Nitric oxide mediates metabolic coupling of omentum-derived adipose stroma to ovarian and endometrial cancer cells.</a> Cancer Research. 75 (2), 456-471 (2015).</li><li>Mitra, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironment-induced+downregulation+of+miR-193b+drives+ovarian+cancer+metastasis.">Microenvironment-induced downregulation of miR-193b drives ovarian cancer metastasis.</a> Oncogene. 34 (48), 5923-5932 (2015).</li><li>Tomar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETS1+induction+by+the+microenvironment+promotes+ovarian+cancer+metastasis+through+focal+adhesion+kinase.">ETS1 induction by the microenvironment promotes ovarian cancer metastasis through focal adhesion kinase.</a> Cancer Letters. 414, 190-204 (2018).</li><li>Ovarian Cancer Metastasis: A Unique Mechanism of Dissemination. Tumor Metastasis Available from: <a target="_blank" href="https://www.intechopen.com/books/tumor-metastasis/ovarian-cancer-metastasis-a-unique-mechanism-of-dissemination">https://www.intechopen.com/books/tumor-metastasis/ovarian-cancer-metastasis-a-unique-mechanism-of-dissemination</a> (2016)</li><li>Iwanicki, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+spheroids+use+myosin-generated+force+to+clear+the+mesothelium.">Ovarian cancer spheroids use myosin-generated force to clear the mesothelium.</a> Cancer Discovery. 1 (2), 144-157 (2011).</li><li>Kenny, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesothelial+cells+promote+early+ovarian+cancer+metastasis+through+fibronectin+secretion.">Mesothelial cells promote early ovarian cancer metastasis through fibronectin secretion.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (10), 4614-4628 (2014).</li><li>Boelens, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+transfer+from+stromal+to+breast+cancer+cells+regulates+therapy+resistance+pathways.">Exosome transfer from stromal to breast cancer cells regulates therapy resistance pathways.</a> Cell. 159 (3), 499-513 (2014).</li><li>Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+function+of+exosomes+in+cancer.">The biology and function of exosomes in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (4), 1208-1215 (2016).</li><li>Kohlhapp, F. J., Mitra, A. K., Lengyel, E., Peter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+as+mediators+and+communicators+between+cancer+cells+and+the+tumor+microenvironment.">MicroRNAs as mediators and communicators between cancer cells and the tumor microenvironment.</a> Oncogene. 34 (48), 5857-5868 (2015).</li></ol>

저자는 공개 없다.

Paracrine juxtacrine 세포 사이 신호의 메커니즘을 이해 하는 것은 정상 조직의 항상성 및 질병 조건7,8의 더 나은 지식을 개발 필수적입니다. 대부분 paracrine 신호를 수집 하 여 연구를 실시 한 셀에서 다른 셀 형식 치료를 사용 하 여 중간 조절. 이 메서드는 고유의 단순에는 이점이 있다. 그러나, 그것 않습니다 하지 정확 하 게 정리 휴대 전화 microenvironment에 ...

암 세포와 종양 진행 성에 서 종양 microenvironment 간의 생산적인 상호 상호 작용의 역할을 잘 설립 되었습니다 그리고 암 생물학1연구의 주요 초점 되고있다. 상처 치유, 면역 반응, 신생, 줄기 세포 벽, 그리고 개발2,,34,,56 양방향 신호에의 유사한 인스턴스는 중요 한 , 7 , 8.이 모든 생물 학적 과정에 공통 주제는 셀 셀 운명, 조직 생리학, 및 질병의 진행을 결정 하는 그들의 microenvironment에서 extracellular 신호를 다양 한 방법으로 응답. 따라서, 초점 같은 셀 셀 통신에 관련 된 메커니즘의 더 나은 이해를 개발 하는 쪽으로 점점 돌았다. 이러한 상호 작용의 대부분 paracrine 또는 juxtacrine 세포 사이 신호를 포함 한다. Paracrine 신호 juxtacrine 반면9,10, 그것에 대 한 응답을 트리거하는 근처에 다른 셀에 해당 수용 체에 의해 인식 되는 한 특정 신호 요소의 분 비를 포함 한다 신호 두 셀 관련된11,12의 세포질 구성 요소 간의 직접 접촉을 해야합니다.
이러한 신호 종양 microenvironment에서 뿐만 아니라 조직 항상성에 중요 한 구성 요소입니다. 암 세포 종양 기질, 암 관련 된 섬유 아 세포 (CAFs), adipocytes13,,1415,16, 면역 세포 등의 세포에서 paracrine 및 juxtacrine 요인 으로부터 혜택을. Paracrine 신호 juxtacrine 신호 하는 것은 juxtaposed ligands 노치 신호, 또는 integrins 및 그들의 각각 사이 상호 작용 수용 체를 포함 하는 동안 성장 인자, cytokines, 발산, 등에 의해 중재 될 수 있습니다. 세포 외 기질 단백질입니다. 우리는 종양 진행 및 전이14난소 암 세포 및 CAFs 사이 상호 상호 작용의 중요성을 증명 하고있다. 마찬가지로, metastasizing 난소 암 세포 전이의 사이트 취재 mesothelial 세포와의 상호 작용을 규제 키 microRNAs 전이성 식민17, 를 승진 시키는 암 세포에 녹음 방송 요인 18.
Paracrine 신호에 대부분 연구 조건된 매체와 두 번째 셀 유형을 치료 하 한 셀 형식에서 수집 된의 사용을 포함 한다. 이 방법은 널리 이용 되는, 하는 동안 그것은 효과적으로 받는 셀의 microenvironment에 secreted 요소의 지역화 된 고 농도 레벨을 복제 하지 않습니다. 그것은 또한 재현 한 세포에 의해 생산 되는 secreted 요소의 연속 흐름의 활동에 실패 하 고 인접 셀을 받은. Paracrine 신호 secreted 요소 소스 셀 근처만 필요한 농도 고 무마 하 고 밖으로 희석 거리 증가 하는 경향이 짧은 거리에 효과적 이다. 이 지역화 된 높은 농도의 secreted 요소 수용 체 셀에 응답 필수적입니다. 또한, 응답 받는 사람 세포에 새로 분 비 요인과 저하, 바인딩, 및 받는 사람 세포와 소스 셀에서 확산에 국제화를 통해 그들의 지속적인 고갈의 균형에 의존 이기도합니다. 바른된 매체 높은 지역화 된 농도 microenvironment에 대 한 계정에 집중 될 수 있지만 그 정확 하 게 정확한 농도 복제할 수 없습니다. 또한, 그것은 생산의 자연 활동 및 관련된 요인의 고갈 모방 수 없습니다. 더 정확 하 게 복제 paracrine 신호 juxtacrine 신호 메커니즘에서에서 분리, 우리는 성장 하는 다공성 막의 어느 표면에 2 개의 세포 유형 포함 소설 인접 문화 방법의 고안 했다. 숨 구멍은 충분히 juxtacrine 상호 작용을 방지 하 고 아직 지역화 된 높은 농도에서 분 비 요인의 교류를 허용 하는 작은. 그런 식으로,이 시스템 생산의 활동 그리고 paracrine 요인의 소모를 유지합니다.

<table><tbody><tr><td>24 mm Transwell permeable support with 0.4 &amp;micro;m Pore Polycarbonate Membrane Insert</td><td>Corning (Costar)</td><td>3412</td><td>&amp;bull; 10 &amp;micro;m thick translucent polycarbonate membrane&lt;br/&gt; &amp;bull; Treated for optimal cell attachment&lt;br/&gt; &amp;bull; Packaged 6 inserts in a 6 well plate, 4 plates per case&lt;br/&gt; &amp;bull; Membrane must be stained for cell visibility&lt;br/&gt; &amp;bull; Sterilized by gamma radiation</td></tr><tr><td>6 well plate</td><td>Corning (Falcon)</td><td>353046</td><td>Flat Bottom, TC-treated, sterile, with Lid</td></tr><tr><td>15 cm culture dish</td><td>Corning (Falcon)</td><td>353025</td><td>Sterile, TC-treated Cell Culture Dish</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning (Cellgro)</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>MEM Nonessential amino acids</td><td>Corning (Cellgro)</td><td>25-025-CI</td><td></td></tr><tr><td>MEM Vitamins</td><td>Corning (Cellgro)</td><td>25-020-CI</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Trypsin, 2.21 mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Pipets</td><td></td><td></td><td>Any make is fine</td></tr><tr><td>CO2 Incubator</td><td></td><td></td><td>Any make is fine</td></tr><tr><td>Biosafety level II cabinet</td><td></td><td></td><td>Any make is fine</td></tr><tr><td>FN1 TaqMan Gene Expression Assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Hs01549976_m1</td><td></td></tr><tr><td>TGFB1 TaqMan Gene Expression Assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Hs00998133_m1</td><td></td></tr><tr><td>CDH1 TaqMan Gene Expression Assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Hs01023895_m1</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH TaqMan Gene Expression Assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Hs99999905_m1</td><td></td></tr><tr><td>miRNeasy mini RNA isolation Kit</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td></td></tr><tr><td>High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>43-688-13</td><td></td></tr><tr><td>HeyA8 ovarian cancer cells</td><td>Obtained from Ernst Lengyel Lab, University of Chicago</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TGF&amp;beta; Neutralizing Antibody</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>MAB1835-100</td><td></td></tr></tbody></table>

a proximal culture method to study paracrine signaling between cells

세포 상호 작용은 종양 진행, 면역 반응, 신생, 개발 등 많은 생물 학적 과정에 중요 한 역할을. Paracrine 또는 juxtacrine 신호 같은 상호 작용을 중재 한다. 바른된 매체 및 coculture 연구의 사용은 이러한 두 가지 유형의 상호 작용 사이 감 별 하는 가장 일반적인 방법입니다. 그러나, paracrine 상호 작용 동안에 microenvironment에 분 비 요인의 지역화 된 높은 농도의 효과 조절된 매체에 의해 정확 하 게 지 하지 고, 따라서, 부정확 한 결론으로 이어질 수 있습니다. 이 문제를 해결 하려면 우리 paracrine 신호를 공부 하는 인접 문화 방법을 고안 했다. 두 셀 형식 0.4 µ m 모와 10 µ m 두께 폴 리카 보 네이트 막의 어느 표면에 성장 된다. 모 공 분 비 요인의 교환을 허용 하 고, 동시에 juxtacrine 신호 하는 것을 억제. 셀 수 수집 되며 paracrine 신호의 효과 결정 하기 위해 끝점에서 lysed. 분 비 요인의 지역화 된 농도 기울기에 대 한 수 있도록, 뿐만 아니라이 방법은 의무가 억제제의 사용 뿐만 아니라 문화의 연장된 기간을 포함 하는 실험 이다. 우리가 난소 암 세포와 전이의 사이트에서 발생 하더라도 mesothelial 세포 간의 상호 작용을 공부 하려면이 메서드를 사용 하 여, 하는 동안 그것은 연구자 paracrine 신호 다양 한 분야에서 연구에 대 한 어떤 두 부착 세포 유형 적응 시킬 수 있다 종양 microenvironment, 면역학, 및 개발을 포함 하 여.

Metastasizing 난소 암 세포 mesothelial 세포 전이 복 막 구멍19내 사이트에서 발생합니다. 생산적 paracrine juxtacrine 상호 작용 유도 성공적인 전이17,18,20,21 난소 암 세포의 적응 응답에 mesothelial 세포의 도움으로 . 인접 문화 방법의 효과 테스트 하려면 테스트 HeyA8 난?...

Watch this Scientific Journal Video about A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells at JoVE.com

A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

Paracrine juxtacrine 세포 상호 작용 종양 진행, 면역 반응, 신생, 개발 등 많은 생물 학적 과정에 중요 한 역할을 한다. 여기, 인접 문화 메서드 secreted 요소의 지역화 된 농도 세포에 직접 접촉을 방지 하는 동안 유지 됩니다 paracrine 신호 연구에 사용 됩니다.

Paracrine 신호 세포 사이 공부 하는 인접 문화 방법

Intercellular interactions play an important role in many biological processes, including tumor progression, immune responses, angiogenesis, and ...

a-proximal-culture-method-to-study-paracrine-signaling-between-cells

Research

JoVE Journal

Biology

9.4K 조회수.  Indiana University School of Medicine. Paracrine juxtacrine 세포 상호 작용 종양 진행, 면역 반응, 신생, 개발 등 많은 생물 학적 과정에 중요 한 역할을 한다. 여기, 인접 문화 메서드 secreted 요소의 지역화 된 농도 세포에 직접 접촉을 방지 하는 동안 유지 됩니다 paracrine 신호 연구에 사용 됩니다.

비디오: A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells

A Mimic of the Tumor Microenvironment: A Simple Method for Generating Enriched Cell Populations and Investigating Intercellular Communication

Understanding the early heterotypic interactions between cancer cells and the surrounding non-cancerous stroma is important in elucidating the events leading to stromal activation and establishment of the tumor microenvironment (TME). Several in vitro and in vivo models of the TME have been developed; however, in general these models do not readily permit isolation of individual cell populations, under non-perturbing conditions, for further study. To circumvent this difficulty, we have employed an in vitro TME model using a cell growth substrate consisting of a permeable microporous membrane insert that permits simple generation of highly enriched cell populations grown intimately, yet separately, on either side of the insert&#39;s membrane for extended co-culture times. Through use of this model, we are capable of generating greatly enriched cancer-associated fibroblast (CAF) populations from normal diploid human fibroblasts following co-culture (120 hr) with highly metastatic human breast carcinoma cells, without the use of fluorescent tagging and/or cell sorting. Additionally, by modulating the pore-size of the insert, we can control for the mode of intercellular communication (e.g., gap-junction communication, secreted factors) between the two heterotypic cell populations, which permits investigation of the mechanisms underlying the development of the TME, including the role of gap-junction permeability. This model serves as a valuable tool in enhancing our understanding of the initial events leading to cancer-stroma initiation, the early evolution of the TME, and the modulating effect of the stroma on the responses of cancer cells to therapeutic agents.

We adapted a permeable microporous membrane insert to mimic the tumor microenvironment (TME). The model consists of a mixed cell culture, allows simplified generation of highly enriched individual cell populations without using fluorescent tagging or cell sorting, and permits studying intercellular communication within the TME under normal or stress conditions.

종양 미세 환경의 모방 : 세포 간 통신을 농축 세포 인구를 생성 및 조사를위한 간단한 방법

Understanding the early heterotypic interactions between cancer cells and the surrounding non-cancerous stroma is important in elucidating the events ...

연구

암 연구학

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor environment and cell-cell interactions. Identification of cancer and stem cell interactions, including changes in extracellular environment, physical interactions, and secreted factors, might enable the discovery of new therapy options. We combine known co-culture techniques to create a model system for mesenchymal stem cells (MSCs) and cancer cell interactions. In the current study, dental pulp stem cells (DPSCs) and PC-3 prostate cancer cell interactions were examined by direct and indirect co-culture techniques. Condition medium (CM) obtained from DPSCs and 0.4 &#181;m pore sized trans-well membranes were used to study paracrine activity. Co-culture of different cell types together was performed to study direct cell-cell interaction. The results revealed that CM increased cell proliferation and decreased apoptosis in prostate cancer cell cultures. Both CM and trans-well system increased cell migration capacity of PC-3 cells. Cells stained with different membrane dyes were seeded into the same culture vessels, and DPSCs participated in a self-organized structure with PC-3 cells under this direct co-culture condition. Overall, the results indicated that co-culture techniques could be useful for cancer and MSC interactions as a model system.

We provide protocols for evaluation of mesenchymal stem cells isolated from dental pulp and prostate cancer cell interactions based on direct and indirect co-culture methods. Condition medium and trans-well membranes are suitable to analyze indirect paracrine activity. Seeding differentially stained cells together is an appropriate model for direct cell-cell interaction.

펄프 조직 문화와 공동 암 세포와 그들의 상호 작용을 공부 하에서 중간 엽 줄기 세포 분리

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Studying the Effects of Tumor-Secreted Paracrine Ligands on Macrophage Activation using Co-Culture with Permeable Membrane Supports

Tumor-derived paracrine signaling is an overlooked component of local immunosuppression and can lead to a permissive environment for continued cancer growth and metastasis. Paracrine signals can involve cell-cell contact between different cell types, such as PD-L1 expressed on the surface of tumors interacting directly with PD-1 on the surface of T cells, or the secretion of ligands by a tumor cell to affect an immune cell. Here we describe a co-culture method to interrogate the effects of tumor-secreted ligands on immune cell (macrophage) activation. This straightforward procedure utilizes commercially available 0.4 &#181;m polycarbonate membrane permeable supports and standard tissue culture plates. In the process described, macrophages are cultured in the upper chamber and tumor cells in the lower chamber. The presence of the 0.4 &#181;m barrier allows for the study of intercellular signaling without the confounding variable of physical contact, because the two cell types share the same medium and exposure to paracrine ligands. This approach can be combined with others, such as genetic alterations of the macrophage (e.g., isolation from genetic knock-out mice) or tumor (e.g., CRISPR-mediated alterations) to study the role of specific secreted factors and receptors. The approach also lends itself to standard molecular biological analyses such as quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) or Western blot analysis, without the need for flow sorting to separate the two cell populations. Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) can similarly be utilized to measure secreted ligands to better understand the dynamic interaction of cell signaling in the multiple cell type context. Duration of co-culture can also be varied for the study of temporally regulated events. This co-culture method is a robust tool that facilitates the study of tumor-secreted signals in the immune context.

Here, we present a method using permeable membrane supports to facilitate the study of non-contact paracrine signaling used by tumor cells to suppress the immune response. The system is amenable to studying the role of tumor-secreted factors in dampening macrophage activation.

투과성 멤브레인 지지대를 이용한 공동 배양을 이용한 대식세포 활성화에 대한 종양 분비 파라크린 리간드의 효과 연구

Tumor-derived paracrine signaling is an overlooked component of local immunosuppression and can lead to a permissive environment for continued cancer ...

A Co-Culture Method to Study Neurite Outgrowth in Response to Dental Pulp Paracrine Signals

Tooth innervation allows teeth to sense pressure, temperature and inflammation, all of which are crucial to the use and maintenance of the tooth organ. Without sensory innervation, daily oral activities would cause irreparable damage. Despite its importance, the roles of innervation in tooth development and maintenance have been largely overlooked. Several studies have demonstrated that DP cells secrete extracellular matrix proteins and paracrine signals to attract and guide TG axons into and throughout the tooth. However, few studies have provided detailed insight into the crosstalk between the DP mesenchyme and neuronal afferents. To address this gap in knowledge, researchers have begun to utilize co-cultures and a variety of techniques to investigate these interactions. Here, we demonstrate the multiple steps involved in co-culturing primary DP cells with TG neurons dispersed on an overlying transwell filter with large diameter pores to allow axonal growth through the pores. Primary DP cells with the gene of interest flanked by loxP sites were utilized to facilitate gene deletion using an Adenovirus-Cre-GFP recombinase system. Using TG neurons from the Thy1-YFP mouse allowed for precise afferent imaging, with expression well above background levels by confocal microscopy. The DP responses can be investigated via protein or RNA collection and analysis, or alternatively, through immunofluorescent staining of DP cells plated on removable glass coverslips. Media can be analyzed using techniques such as proteomic analyses, although this will require albumin depletion due to the presence of fetal bovine serum in the media. This protocol provides a simple method that can be manipulated to study the morphological, genetic, and cytoskeletal responses of TG neurons and DP cells in response to the controlled environment of a co-culture assay.

We describe the isolation, dispersion and plating of dental pulp (DP) primary cells with trigeminal (TG) neurons cultured atop overlying transwell filters. Cellular responses of DP cells can be analyzed with immunofluorescence or RNA/protein analysis. Immunofluorescence of neuronal markers with confocal microscopy permits the analysis of neurite outgrowth responses.

치과 펄프 파라크린 신호에 대한 응답으로 노이라이트 의 성장을 연구하는 공동 문화 방법

Tooth innervation allows teeth to sense pressure, temperature and inflammation, all of which are crucial to the use and maintenance of the tooth organ. ...

발생학

Modeling Paracrine Noncanonical Wnt Signaling In Vitro

Noncanonical Wnt signaling regulates intracellular actin filament organization and polarized migration of progenitor cells during embryogenesis. This process requires complex and coordinated paracrine interactions between signal-sending and signal-receiving cells. Given that these interactions can occur between various types of cells from different lineages, in vivo evaluation of cell-specific defects can be challenging. The present study describes a highly reproducible method to evaluate paracrine noncanonical Wnt signaling in vitro. This protocol was designed with the ability to (1) conduct functional and molecular assessments of noncanonical Wnt signaling between any two cell types of interest; (2) dissect the role of signal-sending versus signal-receiving molecules in the noncanonical Wnt signaling pathway; and (3) perform phenotypic rescue experiments with standard molecular or pharmacologic approaches.
This protocol was used to evaluate neural crest cell (NCC)-mediated noncanonical Wnt signaling in myoblasts. The presence of NCCs is associated with an increased number of phalloidin-positive cytoplasmic filopodia and lamellipodia in myoblasts and improved myoblast migration in a wound-healing assay. The Wnt5a-ROR2 axis was identified as a crucial noncanonical Wnt signaling pathway between NCC and second heart field (SHF) cardiomyoblast progenitors. In conclusion, this is a highly tractable protocol to study paracrine noncanonical Wnt signaling mechanisms in vitro.

Modeling Paracrine Noncanonical Wnt Signaling In Vitro

The present study outlines a highly reproducible and tractable method to study paracrine noncanonical Wnt signaling events in vitro. This protocol was applied to evaluate the impact of paracrine Wnt5a signaling in murine neural crest cells and myoblasts.

체외에서 파라크린 비정규 Wnt 신호 전달 모델링

Noncanonical Wnt signaling regulates intracellular actin filament organization and polarized migration of progenitor cells during embryogenesis. This ...

A Co-culture Method to Investigate the Crosstalk Between X-ray Irradiated Caco-2 Cells and PBMC

The protocol adopted in this work aims at unraveling how X-rays perturb the functioning of the intestinal barrier, focusing on the interplay between colorectal tumor cells and the immune system. Colorectal carcinoma is among the most common type of cancer, typically treated by surgery, chemotherapy, and radiotherapy. Advantages of radiotherapy in targeting the tumor are well known. However, even limited exposures of healthy tissues are of great concern, particularly regarding the effects on the intestinal barrier and the immune system. The adopted setup allows to study the interplay between two cell populations in a condition more similar to the physiological one, when compared to normal cell cultures. For this purpose, we resort to different techniques and we used an in vitro co-culture model, based on Caco-2 cells differentiated as a monolayer and PBMC, sharing the same culture medium. This protocol has been developed to focus on both macroscopic effects, i.e. cell viability and Trans-Epithelial Electrical Resistance (TEER), and, through western blot, molecular alterations, i.e. the activation of inflammatory pathway in immune cells and the tight junction protein expression in Caco-2 cells. Initial evaluation of radiation effects on Caco-2 cell viability was assessed via the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and Trypan blue assays, while TEER was measured at fixed time intervals through an ohmmeter specifically designed for co-culture systems. In this way, the effects due to radiation, the presence of Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC), and eventually their synergistic effect, can be demonstrated. Through these complementary techniques, we observed a high radio-resistance of Caco-2 within the range of 2 - 10 Gy of X-rays and an increased Caco-2 monolayer permeability when PBMCs were added. In particular, PBMC presence was found to be associated with the variation in the tight junction scaffold proteins expression.

We present a protocol to investigate the crosstalk between X-ray-irradiated Caco-2 and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). The protocol starts with Caco-2 irradiation and set-up of the co-culture with PBMC; subsequently, trans-epithelial electrical resistance is measured regularly over 48 h and western blot performed in both Caco-2 and PBMC.

X-선 사이 누화를 조사 하는 공동 문화 방법을 반구 Caco-2 셀 및 PBMC

The protocol adopted in this work aims at unraveling how X-rays perturb the functioning of the intestinal barrier, focusing on the interplay between ...

면역학 및 감염병학

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

저항 동맥의 세포 문화 모델

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

의학

An Innovative 3D-Printed Insert Designed to Enable Straightforward 2D and 3D Cell Cultures

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of conditioned media remains time-consuming and far from physiological and pathological conditions. Although a few models of co-culture are commercially available, they remain restricted to specific assays and are mostly for two types of cells. 
Here, 3D-printed inserts are used that are compatible with numerous functional assays. The insert allows the separation of one well of a 6-well plate into four compartments. A wide range of combinations can be set. Moreover, windows are designed in each wall of the compartments so that potential intercellular communication between every compartment is possible in the culture medium in a volume-dependent manner. For example, paracrine intercellular communication can be studied between four cell types in monolayer, in 3D (spheroids), or by combining both. In addition, a mix of different cell types can be seeded in the same compartment in 2D or 3D (organoids) format. The absence of a bottom in the 3D-printed inserts allows the usual culture conditions on the plate, possible coating on the plate containing the insert, and direct visualization by optical microscopy. The multiple compartments provide the possibility to collect different cell types independently or to use, in each compartment, different reagents for RNA or protein extraction. In this study, a detailed methodology is provided to use the new 3D-printed insert as a co-culture system. To demonstrate several capacities of this flexible and simple model, previously published functional assays of cell communication were performed in the new 3D-printed inserts and were demonstrated to be reproducible. The 3D-printed inserts and the conventional cell culture using conditioned media led to similar results. In conclusion, the 3D-printed insert is a simple device that can be adapted to numerous models of co-cultures with adherent cell types.

In this paper, a newly designed 3D-printed insert is presented as a model of co-culture and validated through the study of the paracrine intercellular communication between endothelial cells and keratinocytes.

간단한 2D 및 3D 세포 배양이 가능하도록 설계된 혁신적인 3D 프린팅 인서트

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of ...

생물학

3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction

Source: Espinoza-S&#225;nchez, et al. <a href="https://www.jove.com/v/56589/analyzing-communication-between-monocytes-primary-breast-cancer-cells">Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract (ECME)-based Three-dimensional System.</a> J. Vis. Exp. (2018).
This video describes the 3D co-culture of breast cancer cells with monocytes to study their interaction in an extracellular matrix extract (ECME) based environment. This method helps in studying specific features such as collagen degradation, immune cell recruitment, and cell invasion.

직접 상호작용을 통한 3D 공동 배양: 암세포와 단핵구의 상호작용을 연구하기 위한 공동 배양

Source: Espinoza-S&#225;nchez, et al. Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Breast Cancer

In vitro studies

Proximal Culture System: An In Vitro Culture Technique to  Study Paracrine Signaling Between Cells

Source: Dasari, S. et al. <a href="https://www.jove.com/t/58144">A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop a proximal co-culture model of ovarian cancer cells and primary human mesothelial cells. This physiologically relevant model allows the study of paracrine signaling, where the localized concentrations of the secreted factors are maintained while preventing direct cellular contact.

근위 배양 시스템: 세포 간의 부분비 신호 전달을 연구하기 위한 체외 배양 기술

Source: Dasari, S. et al. A Proximal Culture Method to Study Paracrine Signaling Between Cells.&#160;J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop a ...