이 프로토콜은 마우스의 일관된 크기와 위치의 견고한 흉부 대동맥류를 생성 할 수 있으며 뮤린 가슴에 안전하게 접근할 수있는 가이드 역할을합니다. 이 프로토콜은 다른 모델에 비해 합리적인 시간 동안 마우스에서 흉부 대동맥류를 생산하는 간단하고 일관된 방법입니다. 8-10주 된 남성 c57 블랙 6 마우스에서 적절한 수준의 체싱을 확인한 후 마우스를 오른쪽 측면 디큐비투스 위치에 놓고 오른쪽 팔을 로지프를 테이프로 테이프하여 앞발이 코와 일치하도록 합니다.
꼬리를 caudally 당겨 오른팔과 꼬리 사이의 긴장 라인을 만들어 척추의 연장을 생성하고 왼쪽 다리를 자연스러운 위치에 테이프로 놓습니다. 그런 다음 왼쪽 팔을 압연 거즈 위에 테이프로 붙인다. 절차를 시작하기 전에 클리퍼를 사용하여 왼쪽 어깨에서 왼쪽 복부까지 왼쪽 측면을 면도합니다.
면 팁 어플리케이터를 사용하여 첫 번째 베타다인 용액을 브러시한 다음 수술 부위에 70% 에탄올을 브러시합니다. 피부가 건조하면 멸균 커튼을 동물 위에 놓습니다. 헤모토락스의 중간점에서 2센티미터 측면 절개를 하고 핸드 헬드 전기카우터를 사용하여 갈비뼈가 보일 때까지 근육 층을 나눕니다.
10 x 에서 15배 배율 하에서, 갈비뼈 사이에 2밀리미터 부분을 직접 소생시키고, 소작 부분을 통해 흉막 공간으로 해부하기 위해 갈비뼈 공간에 식염수 의 젖은 미세한 면 팁 어플리케이터를 사용합니다. 식염수에 젖은, 3 x 2 밀리미터 스폰지를 흉부에 넣고 폐붕괴를 돕습니다. 그런 다음, 횡격막이 통풍구가 보이고 절개가 파라피누스 근육에서 몇 밀리미터 떨어져 날 때까지 토라코토미를 넓히기 위해 가위를 사용합니다.
대마를 노출하려면 갈비뼈 리트랙터를 흉부 절개에 넣고 폐 표면에서 스폰지를 조심스럽게 제거하십시오. 식염수로 폐를 덮고, 6-4밀리미터 스폰지로 끝을 가리키며, 끝은 장미빛과 소굴을 가리키며 스폰지에 넓고 평평한 폐 리트랙터를 놓습니다. 그런 다음, 내림차순 흉부 대동맥이 노출될 때까지 반사트랙터를 부드럽게 밀어 내고 7번 집게를 사용하여 대동맥으로부터 결합 조직과 지방의 약 5밀리미터 부분을 해부한다.
엘라스타제를 적용하려면 먼저 마이크로파이프를 사용하여 12마이크로리터의 돼지 췌장 엘라스타아제로 0.5%의 1밀리미터 스폰지를 포화시키고 대동맥의 노출된 표면에 스폰지를 놓습니다. 3~5분 후에 는 7번 의 집게를 사용하여 엘라스테아제 스폰지를 제거하고 폐 방사기를 제거합니다. 멸균 식염수의 밀리리터의 약 절반으로 가슴 구멍을 관개합니다.
폐 스폰지를 제거하고 나머지 식염수 관개를 흡수하기 위해 2-2 인치 크기의 거즈 조각을 사용합니다. 갈비뼈 리트랙터를 제거하고 세 개의 중단 된 6-oh 비 흡수 봉합사로 갈비뼈를 분해하고 봉합사를 묶지 않고 각 봉합사에 느슨한 매듭을 묶습니다. 폐를 다시 팽창 한 후 봉합사를 묶고 5 오 흡수 가능한 편조 봉합사로 근육 층을 다시 상사합니다.
7-10으로 피부를 닫아 5-oh 비 흡수성 봉합사. 그런 다음, 전체 recumncy까지 동물을 모니터링할 수 있습니다. 적절한 실험적 종점에서 가위를 사용하여 왼쪽 측면에서 중앙 복부까지 내체로 피부를 절개하고 복막에 들어가지 않도록 주의하십시오.
등쪽 왼쪽 측면에서 왼쪽 어깨에서 왼쪽 어깨에 피부를 절개하고 축실라를 통해 흉골까지 90도 각도로 절개를 합니다. 소생을 사용하여, 왼쪽 hemothorax를 노출마우스의 복부 측면쪽으로 피부 플랩을 해부하고 좌측 횡격막의 밑면을 노출하는 복부에서 복부에 좌측 비용 여백을 따라 복부를 입력하는 가위를 사용합니다. 다이어프램의 측면 가장 가장자리가 열리지 않으면 다이어프램을 가장 측면 가장자리에서 절개합니다.
이 구멍에 소의 끝을 놓고, 희생마진에서 시포이드 공정까지 다이어프램을 소거하고 젖은 미세 한 면 팁 어플리케이터를 사용하여 유착에서 가슴 벽에 대한 폐를 부드럽게 풀어냅니다. 폐가 방해가 되지 않도록 하는 동안, 전기 카우터를 사용하여 늑골 여백에서 첫 번째 갈비뼈, 등쪽에서 중간 축삭선까지 갈비뼈와 가슴 벽을 잘라내고 대동맥에서 적어도 2밀리미터 떨어진 곳에 있습니다. 첫 번째 리브의 우수한 여백을 따라 잘라 헤모토락스를 노출하기 위해 통풍이 잘되는 리브 케이지를 반사합니다.
폐에 리트랙터를 놓고 내측으로 당깁니다. 횡격막에 리트랙터 또는 식염수 젖은 거즈를 놓고 가능한 한 많은 대어타를 노출하기 위해 caudally 그립니다. 건조한 면 기울어진 어플리케이터를 사용하여 대동맥류및 영향을 받지 않는 단류 세그먼트에서 유착을 제거하고 비디오 마이크로메트리를 사용하여 영향을 받지 않는 제어 세그먼트의 직경과 엘라스타제 처리 동맥류의 가장 넓은 부분을 측정합니다.
대자를 수확하려면, 처리 된 세그먼트에 단지 해저 집게 를 해치기와 용기를 잡고 집게에 탈경을 잘라 가위를 사용합니다. 척수에서 대동맥을 해부하고 동맥류 조직을 제거하기 위해 처리된 세그먼트로 혈관 근위를 절단합니다. 이어서, 결핵 주사기와 바늘을 사용하여, 대동맥 루멘을 식염수로 세척하고 계획된 다운스트림 실험 분석에 따라 시료를 처리한다.
개발된 흉부 동맥류는 모양의 fusiform로 발생하며 대동맥의 처리된 부위에서만 발생합니다. 본 대표적인 비디오 미세메트리 측정에서, 대동맥 팽창은 조직 수확시 130%로 결정되었다. 실제로, 형 엘라스타제 처리된 마우스는 대조군 야생형 마우스에 비해 14일째에 관찰된 최대 팽창을 통해 3일, 7일, 14, 및 21의 후처리에서 대동맥 팽창에 현대한 증가를 나타낸다.
조직학적 분석에 따르면 야생형 동맥류에는 얇고 단편화된 엘라스틴 섬유가 있습니다. 또한 대식세포및 인터루킨 원베타 발현의 증가로 덜 매끄러운 근육 세포 염색이 있다. 뮤린 폐는 매우 섬세하며 부상은 일반적으로 치명적입니다.
가슴에 처음 들어가는 것만으로도 최대한주의를 기울여 식염수로 젖은 스폰지로 폐를 조작하십시오. 이 모델은 내림차순 흉대 대동맥류의 병인에서 인터루킨 원 베타 및 인터루킨 6의 역할을 해명하고 봉쇄가 이러한 동맥류의 비 수술 관리를 용이하게 할 수있는 방법을 설명하는 데 도움이되었습니다.
