염화물 염화물은 현재 안전 제한 이하의 농도에서 다이어트와 같은 다른 요인에 의한 간 손상을 악화시다. 따라서 평균 모집단의 사용 매개 변수를 재평가해야 합니다. 이 기술의 주요 장점은 동물에게 최소한의 스트레스를 유발하면서 인간의 노출을 밀접하게 모방하는 만성 비 침습적 흡입 프로토콜을 사용한다는 것입니다.
절차를 시연하는 것은 안나 랭, 포스트 닥터, 그리고 레지나 Schnegelberger, 대학원생, 모두 내 실험실에서 될 것입니다. 흡입 실험이 시작되기 1 주일 전에 모든 실험 동물의 무게를 측정하고 케이지 당 제공되는 저지방 또는 고지방 다이어트 식품의 양을 무게. 음식과 물 광고 리비툼을 제공 하 여 각 노출 그룹에 대 한 일반 차우를 저지방 또는 고지방 다이어트 차우로 대체, 적절 하 게.
각 먹이 일의 끝에 나머지 음식을 무게와 동물의 건강이 유지되도록 실험 을 통해 마우스를 모니터링. 염화물 흡입 노출 시스템을 설정하려면 각 유량 측정 장치에 들어가기 전에 실험 및 제어 챔버 모두에서 희석공기가 고효율 미립자 공기 및 활성 탄화, 건조 및 압력 조절되었는지 확인합니다. 온도 및 상대 습도가 실험 및 제어 챔버 내에서 모니터링되는지 확인하고, 챔버 배기는 HEPA 필터, 이산화탄소 프로브 및 활성 탄필터를 통과한 후, 마우스가 허용 가능한 환기를 받고 있는지 확인하기 위해 화학 후드의 배기 영역으로 들어가기 전에 전달된다.
사용자 지정 소프트웨어를 사용하여 흡입 노출 중에 관심 있는 환경 변수를 변경, 모니터링 및 기록할 수 있습니다. 흡입 노출을 위해 챔버를 준비하려면 실험 및 제어 챔버의 모든 공기 흐름을 끄는 것으로 시작합니다. 각 챔버 도어를 열고 흡수성 침구 소재를 배설물 팬 위에 올려 놓습니다.
이어서, 흡수성 물질을 적시어 노출 기간 동안 약 40~60%의 상대 습도의 쾌적한 습도를 제공하고 실험챔버에서 염화물의 원하는 노출 수준을 설정한다. 챔버가 준비되면, 흡입 챔버 케이지 랙 내에서 개별 케이지로 마우스를 전송, 각 마우스가 챔버 내에서 균일하게 노출되도록 매일 랙 내에서 각 마우스의 배치를 무작위. 그런 다음 각 케이지 랙을 각 챔버에 넣고 챔버 도어를 닫습니다.
흡입 노출 실험을 수행하기 위해, 비닐 염화물 가스 탱크의 밸브가 열린 위치에 있는지 확인하고 실험 챔버의 희석 흐름을 분당 25 리터로 설정합니다. 제어 챔버의 로타미터가 분당 25리터로 설정되어 있는지 확인하고 모든 센서가 올바르게 작동하고 실험 및 제어 챔버 모두에서 예상 결과를 표시하고 있는지 확인합니다. 노출 전반에 걸쳐, 노출 시간, 희석흐름, 염화물 흐름, 온도, 습도, 챔버 압력, 이산화탄소 수준 및 실험 챔버의 이론적 염화 비닐 농도를 모니터링 및 기록한다.
제어실의 온도와 습도도 표시, 그래프 및 기록되어 있는지 확인합니다. 각 노출을 통해 약 절반정도, 비닐 염화물 검출기 튜브와 퇴각 튜브에 유리 팁을 깨고 검출기 튜브 펌프에 비닐 염화물 검출기 튜브의 흐름 끝을 부착. 짧은 튜브를 사용하여 비닐 염화물 검출기 튜브의 끝에 있는 흐름을 pretreat 튜브의 흐름에 부착하고 퇴각 끝에 있는 흐름에 짧은 튜브를 부착합니다.
호흡 영역 근처의 샘플링 포트 중 하나에서 플러그를 제거하고 pretreat 튜브 의 끝에있는 흐름에서 샘플링 포트에 튜브를 부착합니다. 전체 위치에서, 검출기 튜브 펌프의 피스톤에 손잡이를 전체 아웃 위치로 확장하여 챔버에서 샘플링 된 가스 100 밀리리터를 비닐 염화물 검출기 튜브로 끌어 당깁니다. 90초 후에 핸들을 다시 밀어 넣습니다.
마지막 가스 샘플을 얻은 후 챔버의 샘플링 포트에서 튜브를 제거하고 플러그를 포트에 다시 삽입합니다. 비닐 염화물 검출기 튜브의 색상 변화를 검사하여 챔버 내의 염화물 농도를 확인하고 이론적 값에 비해 검출기 튜브 판독값을 기록한다. 노출 중에 문제가 발생하면 비닐 염화물 흐름을 0으로 설정하고 희석 흐름을 최대 값으로 늘려 챔버를 신속하게 제거합니다.
노출 지속 시간이 도달하면 소프트웨어가 자동으로 비닐 염화물 흐름을 끕니다. 그런 다음 15분 안전 타이머가 실험 챔버에서 비닐 염화물을 치우는 기간을 카운트다운하기 시작합니다. 동물을 제거하는 것이 안전하면 확인을 클릭하십시오.
노출 기간이 끝나면 비닐 염화물 가스 탱크 밸브 스톱콕을 닫힌 위치로 돌리고 노출 챔버의 모든 공기 흐름을 끕니다. 제어실을 통해 공기가 흐르지 않고 각 챔버에서 문을 제거할 때까지 로타미터를 켭니다. 챔버에서 케이지 랙을 제거하고 라미나르 흐름 후드 아래 자신의 홈 케이지로 마우스를 다시 전송합니다.
그런 다음, 기관 건강 및 안전 규정에 따라 배설물 팬에서 폐기물을 처분하고 챔버 도어, 팬, 노출 랙 및 챔버를 청소하십시오. 여기서, 주간 체중과 12주 실험의 격주 음식 소비가 표시됩니다. 모든 마우스는 이 연구 과정을 통해 체중을 얻었습니다.
그러나, 고지방 식이군에서 마우스가 저지방 식이군에서 쥐에 비해 더 많은 무게를 얻었지만, 염화비닐에 노출된 쥐는 각각대조군에서 마우스보다 더 많은 체중을 얻지 못했다. 음식 소비는 또한 그룹 사이에서 다르지 않았습니다. 이러한 대표자 에서 H&E 염색 간 섹션의 사진 현미경, 비닐 염화 비닐은 저지방 다이어트 그룹에 있는 아무 과장된 병리학 적인 변경을 일으키지 않았습니다.
고지방 다이어트 공급 크게 증가 steatosis, 비닐 염화물 노출에 의해 더 악화되었다. 더욱이, 고지방 식이군에서 염화비닐에 노출되어 염증성 포시가 발생하였다. 저지방 다이어트 동물에서는 염화비닐이 트랜스아미나아제 수준을 증가시키지 않았고, 고지방 식단만으로도 트랜스아미나아제 발현이 약간 증가하여 염화비닐에 노출된 고지방 식이군에서 관찰되는 효과가 크게 향상되었다.
또한, 고지방 식단은 간에서 체중 비율을 크게 증가시켰지만 염화물 염화물은 이 효과에 크게 영향을 미치지 않았습니다. 이 프로토콜을 구현할 때, 항상 적절한 안전 예방 조치를 취하여 인간이 비닐 염화물에 실수로 노출하는 것을 피하십시오. 이 절차는 동물 건강, 복지 및 장기 손상에 미치는 영향을 비닐 염화 비닐의 단기, 장기 및 누적 효과에 대한 질문에 대답 할 수 있습니다.
이러한 연구는 환경 및 직업 위험 평가 분야에 영향을 미칩니다. 예를 들어, 우리 그룹은 이제 염화 비닐과 다이어트 사이의 기계적 상호 작용을 연구합니다.
