이 프로토콜은 종양 해독 수술 후 잔류 질환의 임상 설정을 모방하는 것을 목표로하고, 따라서 우리가 수술 후 상처 치유의 맥락에서 새로운 암 치료를 테스트 할 수 있습니다. 이 기술의 장점은 상처가 입은 양과 남아있는 종양의 양을 표준화 할 수 있다는 것입니다. 이 기술은 암을 위한 새로운 처리를 확인하는 그것에 있는 전임상 연구 결과를 위해 특히 중요합니다, 그것은 연조직 육종인의 보기를 현지으로 재발한다는 것을.
이 시각적 데모는 우리가 피부 측에 부착 된 종양을 노출 할 수있는 반전 기술을 입증하는 데 중요합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 마우스에서 준비된 암세포의 피하 접종으로 이 절차를 시작합니다. 12일, 종양이 약 50평방밀리미터의 크기에 이르렀을 때, 수술 30분 전 목 덜미에서 100마이크로리터의 부프레노르핀을 피하하는 배용량 마우스를 투여하였다.
벤치 코트로 덮인 열 패드로 수술 영역을 설정하고 마취를위해 코 콘을 설정합니다. 클로레헥사딘, 면봉, 거즈, 아이 젤, 커브드 포셉 2개, 가위, 클립 어플리케이터, 클립 리무버, 클립 리필 등 손이 닿지 않도록 깨끗한 수술 장비를 준비합니다. 난방 챔버를 섭씨 37도로 데우고 회복을 위해 또 다른 열패드를 설치합니다.
이 절차에는 두 사람이 필요합니다. 도우미는 절차 중에 마우스의 호흡을 면밀히 모니터링해야 합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 마우스를 마취한 후 핀치 테스트 및 각막 반사 테스트를 수행하여 수술을 시작하기 전에 마우스가 완전히 마취되었는지 확인합니다.
눈건조증을 피하기 위해 소량의 안과 젤로 마우스의 눈을 가립니다. 클로레헥사딘으로 수술 부위를 헤핑하여 이 수술을 시작하십시오. 집게와 한 쌍의 가위를 사용하면 종양에서 3밀리미터 떨어진 등쪽 면을 따라 1센티미터 직선 절개를 합니다.
종양이 잘 치유되지 않기 때문에 종양을 직접 덮는 피부를 잘라하지 마십시오. 메스를 사용하여 종양을 자르고 핀셋을 사용하여 조각을 떠서 마십시오. 핀셋을 사용하여 종양과 복막 사이의 근막과 피하 지방 조직을 빼냅니다.
피하 종양은 일반적으로 피부 측에 부착됩니다. 핀셋을 사용하여 종양 베어링 측에 피부를 부드럽게 잡고 종양을 반전시켜 상처를 열어 외부로 볼 수 있도록 합니다. 한 쌍의 가위를 사용하여, 개구부에 가장 가까운 종양의 기지에서 시작하여 제거하는 반쪽에서 종양 캡슐을 잘라냅니다.
50% 해독 수술을 위해 종양의 중간을 가로 질러 잘라. 구부러진 집게를 사용하여 제거될 종양의 단면을 떠서 제거합니다. 디벌크 지역에서 남은 잔해를 떠서 보냅니다.
75%의 해독을 위해, 50%의 종양 해독을 수행하여 시작한 다음 종양의 나머지 50%의 절반을 잘라냅니다. 구부러진 집게를 사용하여 종양의 25 %를 떠서. 수술 부위를 닫기 위해 남은 종양을 피부 밑에 다시 놓고 집게를 사용하여 피부 플랩을 함께 당기고 상처를 따라 피부를 정렬합니다.
상처 가장자리에서 5밀리미터 의 피부를 함께 잡고 수술 클립을 사용하여 편두에 가장 가까운 측면에서 시작하여 상처를 닫습니다. 기본 조직이 노출되지 않도록 필요한 만큼 클립을 적용하십시오. 일반적으로 클립 사이에 2밀리미터 간격으로 3~4개의 클립이 적용됩니다.
마우스가 따뜻한 난방실에 넣어 회복할 수 있도록 합니다. 열 패드에 마우스의 케이지를 놓습니다. 그들은 마취에서 회복 될 때까지 가열 챔버에서 마우스를 모니터링.
그런 다음 마우스를 다시 케이지에 넣고 마우스가 더 활성화될 때까지 10 분 동안 열 패드에 케이지를 둡니다. 쥐에게 젖고 부드러운 음식을 주세요. 회복을 위해 수술 후 1 시간 마우스를 모니터링하십시오.
하루의 끝과 다음 날 아침에 다시 마우스를 모니터링하고 클립이 제자리에 남아 있는지 확인합니다. 관심의 치료에 따라 주어진 시간에 출현 또는 신아주반트 요법으로 마우스를 치료하십시오. 예를 들면, 접종 후에 15일에 항 CTLA-4의 100 마이크로그램의 100 마이크로그램의 1개의 복용량으로 마우스를 치료하십시오.
대안적으로, 접종 후, 15, 17 및 19일에 항 PD-1의 3개의 복용량으로 마우스를 치료합니다. 50 평방 밀리미터 종양의 불완전한 외과 절제술은 점선에 의해 여기에 표시되어 보조 면역 요법이없는 경우 종양의 100 % 재현 가능한 재성장을 초래합니다. 따라서, 50 평방 밀리미터의 크기로 종양 성장은 부분 해독에 이상적인 크기이다.
이 모델은 검문소 모듈, 세포독성 T 림프구 관련 단백질 4 및 프로그래밍된 사망 수용체 하나에 대한 항체를 사용하여 보조 면역 요법을 테스트하는 데 사용되었습니다. 항 CTLA-4를 가진 마우스의 처리는, 반대로 PD-1을 가진 마우스의 처리가 25%의 치료 비율을 초래한 반면, 반대로 PD-1을 가진 마우스의 치료 비율은 25%의 처리 결과로, 그것을 새로운 조합을 시험할 기회를 제공합니다, 반응 비율을 더 향상하기 위하여. 나머지 종양이 피부에 붙어 있는 것이 중요하며, 그렇지 않으면 혈액 공급이 차단되고 종양은 괴사가 됩니다.
이 절차에 따라 종양은 수술이 종양 침투 세포에 미치는 영향을 평가하기 위해 유동 세포측정과 같은 다양한 방법으로 분석될 수 있습니다. 이 마우스 모형은 상처 치유가 암 면역 요법에 어떻게 영향을 미치는지 탐구하는 것을 허용했습니다.
