제시된 프로토콜은 구강 생물막을 제어하기 위해 천연 물에서 생리 활성 후보를 올바르게 선별하고 분석하는 데 사용됩니다. 또한 다른 생물막 연구 분야의 응용 분야에 맞게 조정할 수 있습니다. 이 대부분의 전분 스크리닝 및 분석 방법은 생리 활성 성분을 동시에 제거할 수 있게 합니다.
치과 용 충치는 파생 된 생체 막 식단, 매우 널리 퍼진 만성 질환입니다. 이 프로토콜은 생물막과 결과적으로 치과 용 충치를 제어하는 천연 제품을 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다. 먼저 수중 알코올 혼합물로 추출 용매를 준비합니다.
추출 용매의 밀리리터 당 50~100밀리그램의 농도를 샘플링하고 마이크로튜브에서 15분 간 초음파 보조 추출을 수행합니다. 추출을 세 번 반복합니다. 각 추출 단계 후, 원심분리하여 고체 잔류물을 제거하고 상체를 제거합니다.
각 추출 단계의 초월체를 결합하여 필터링합니다. 화학 분석 및 생체 분석을 위해 알리쿼트저장합니다. 분획을 위해, 초기 추출 용매를 사용하여 밀리리터 용액당 100 밀리그램을 얻기 위해 원유 추출물 샘플을 희석한다.
그런 다음 이 샘플의 1밀리리터를 흡수제 1그램, 용량6밀리리터로 조건부 고체 상 추출 카트리지로 이송합니다. 각 추출 LUN의 약 3개의 데드 볼륨을 사용하여 분획을 수행하고 LUN 조성물에 의해 1개의 분수를 수집합니다. 화학 분석 및 생체 분석을 위한 알리쿼트 저장.
진공, 질소 흐름 또는 lyophilization 하에서 용매를 제거하고 무게와 수율을 등록합니다. 최상의 용매로 건조 물질을 재구성합니다. 텍스트 원고의 수식을 사용하여 스톡 솔루션에 대한 용매 농도를 계산합니다.
혈액 천에 S.mutans UA 159의 미생물 균주를 다시 활성화하고 액체 배양 배지로 배양합니다. 동일한 배양 배지를 사용하여 초기 배양을 1~20회 희석하고 중간 로그 성장 단계에 도달할 때까지 배양한다. 생체막 저술용 1%의 자당으로 항균 분해제 및 TYE를 위해 TYEG에서 정의된 인구로 접종을 준비합니다.
항균 활성의 경우 분석을 위해 샘플의 농도를 정의하고 96웰 플레이트에 추가합니다. 텍스트 원고에 설명된 대로 각 플레이트에 컨트롤 집합을 포함합니다. TYEG를 사용하여 부피를 100 마이크로리터로 조정하고, 미생물 배양의 100 마이크로리터를 접종하고, 이산화탄소 5%에서 섭씨 37도에서 24시간 동안 플레이트를 배양합니다.
우물의 육각 검사에 의해 탁도에 따라 세균 성장을 분석한다. 특정 한천 판에 원하는 희석의 알리쿼트를 중복하여 접종하고 플레이트를 배양합니다. 인큐베이션 후 식민지 수를 수행합니다.
마이크로튜브의 하이드록샤파티트 구슬을 계량하고 살균합니다. 그런 다음 흡착 버퍼 Ab.add 500 마이크로리터를 마이크로튜브에 추가하여 타액 필름을 형성하고 분당 24회 회전으로 37도에서 배양합니다. 타액 상체를 제거하고 하류 에세이를 준비하기 위해 Ab로 구슬을 세 번 씻으시다.
500 마이크로리터의 미세리터또는 침질 이질이 있는 구슬이 들어 있는 각 마이크로튜브에 첨가하고 분당 24회 회전, 30분 동안 섭씨 37도로 배양합니다. Ab.500 마이크로리터를 각 마이크로튜브에 추가하고 비슷한 조건에서 1시간 동안 튜브를 배양하여 Ab.를 사용하여 구슬을 세 번 세척합니다. 그런 다음 Ab 버퍼로 언바운드 셀을 세 번 씻습니다.
각 샘플을 Ab 버퍼 1밀리리터로 재일시 중지하고 7와트로 30초 동안 센티미터를 반복합니다. 각 현탁액의 알리쿼트, 열배, 특정 한천 접시에 접시를 연일 희석시 합니다. 이산화탄소 5%에서 섭씨 37도에서 48시간 동안 플레이트를 배양하고 식민지를 세어보냅니다.
데이터 분석을 위해 생체 분해에 대한 원시 데이터를 스프레드시트에 입력하고, 각 처리에 의한 미생물 성장 억제의 로그를 계산하고, 미생물 성장 억제의 로그 백분율은 대조군과 비교하여 한다. 판독값의 광학 밀도를 수정하고 바이오매스 억제의 백분율을 계산합니다. 클레로단형 디테르펜과 글리코슬플라보노이드의 양에 대한 생물학적 스크리닝의 화학적 프로파일은 C.sylvestris 추출물, 즉 실베스트리스, 중급 및 언어의 3가지 품종에서 볼 수 있다.
원시 데이터를 분석한 결과, 4개의 추출물이 호의적인 반응을 보였다. 이 4개의 추출물의 크로마토그래피 데이터는 클레로단 형 디테르펜과 글리코시드 플라보노이드의 동시 존재를 보여줍니다. 또한 동일한 바이메와 다양성을 포함한다.
처리된 판자 세포의 계산된 백분율 CFU, 처리된 생물막의 % 바이오매스 및 처리된 생물막의 % CFU가 여기에서 도시됩니다. 어떤 조잡한 추출물도 타액 펠리클에 부착된 S.mutans 세포의 제거에 크게 영향을 미치지 않습니다. 글루칸 매트릭스에 대한 S.mutans 세포의 접착은 3개의 원유 추출물에 의해 약화되었다.
각 식물 종은 최적화되고 특정 화학 분석 방법이 필요하기 때문에, 최고의 용매 분획 및 분석 방법은 이전 보고서에서 선택하거나 실험 설계에 의해 정의되어야 합니다. 가장 활발한 원유 추출물과 분수로 제형을 준비하고 복잡한 모델에서 테스트하여 생물막 및 충치의 개발을 방지하는 것이 중요합니다.
