이 비디오는 췌장 혈통을 향해 인간 치과 펄프 줄기 세포의 체외 유도를 보여줍니다. 줄기 세포는 베타 세포의 생체 래그닝을 일으키는 당뇨병 타입 I를 포함하여 많은 질병에서 대체 처리를 줍니다. 인슐린 생성 세포의 이식은 평생 을 일으키는 원인이 되기 위한 새로운 유망한 방법이 될 것입니다.
이 비디오에서는 통합 및 비 통합 유도 프로토콜을 포함하여 인슐린 생성 세포를 생성하기 위한 두 가지 접근법이 설명되어 있다. 그리고 이 부분에서 인간 치과 펄프 줄기 세포로부터 인슐린 생성 세포를 유도하기 위한 통합 프로토콜이 설명된다. 유도 프로토콜의 경우 자연 췌장 발달 과정을 혼합하기 위한 것입니다.
자연및 기능성 인슐린 생성 세포를 얻으려면. 치과 펄프 줄기 세포와 같은 중간 엽 줄기 세포로부터 인슐린 생성 세포를 생성하기 위해 다단계 유도 프로토콜이 사용됩니다. 중간 엽 줄기 세포는 단어 최종 엔데드름, 췌장 내분비, 다음 췌장 베타 세포 또는 인슐린 생산 세포 각각에 사용된다.
세포를 유도하기 위해, 3단계 유도 접근법은 백본 프로토콜로 사용된다. 통합 프로토콜은 인간의 치과 펄프 줄기 세포에 의해 필수 췌장 전사 인자 PDX-1의 이상 만료를 사용하였다. 그런 다음 PDX-1 이상 발현 된 줄기 세포는 3 단계 분화 프로토콜을 사용하여 추가로 유도될 것이다.
통합 프로토콜에 의한 췌장 분화 잠재력은 애니메이션에 설명된 비 통합 프로토콜과 비교됩니다. 이 아이디어는 인간의 연구 윤리위원회에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행되었다, 치과 학부, 환자의 통보 동의출라롱콘 대학. 이 프로토콜은 PDX-1의 만료 이상으로 시작되었습니다.
70-80%의 합류로 2~5의 부분에서 인간 치과 펄프 줄기 세포가 트랜스듀션에 사용된다. 세포는 트립시게되고 계산됩니다. 그런 다음 백만 개의 세포가 경질 용기에 앉아 하룻밤 동안 배양됩니다.
24시간 후 PDX-1 유전자를 운반하는 갓 준비된 바이러스 백신은 원하는 복합감염에 따라 배양용기에 첨가된다. 감염된 세포는 24시간 동안 인큐베이터에 보관됩니다. 그런 다음 신선한 배양 매체가 다른 48 기간 동안 변경되고 유지됩니다.
감염된 세포의 형태는 추가 유도 단계를 사용하기 전에 검사됩니다. PDX-1이 만료되는 인간 치과 펄프 줄기 세포는 첫 번째 췌장 유도 매체에서 트립티컬화 및 중단되며, 이 단계의 배지 A.In, 낮은 부착 배양 용기가 사용된다. 미디엄 A 유도 후 3일째에 발현된 인간 치과 펄프 줄기세포를 통해 PDX-1의 형태가 관찰된다.
좋은 형태를 가진 세포는 추가 유도 단계에 사용될 것입니다. 다음 단계, 제2 유도 매체, 소위 배지 B는 배양 용기에 첨가된다. PDX-1의 형태는 중간 유도 후 둘째 날에 발현된 인간 치과 펄프 줄기 세포를 통해 관찰된다.
좋은 형태를 가진 세포는 추가 유도 단계에 사용될 것입니다. 다음 단계, 제 3 유도 매체, 소위 중간 C는 배양 용기에 추가된다. 5일 후 세포 형태가 관찰된다.
세포 식민지는 추가 분석을 위해 수집됩니다. 식민지 형태 및 크기를 포함 하 여, 췌장 유전자 마커 발현 및 포도 당 자극 C-펩 티 드 분 비 또는 GSCS 분석에 관한 기능적 특성. 비통합 유도 접근법의 경우 이전에 언급된 3단계 유도 프로토콜이 사용된다.
100만 개의 세포가 중간 A에서 다시 매달려 낮은 부착 배양 용기에 앉습니다. 그런 다음 3 일 동안 배양. 형태학이 검사되고 나서, 중간 B및 C를 포함한 일련의 유도 배지가 3일과 5일째에 배양 용기에 각각 첨가된다.
10일째에, 세포 형태학이 관찰됩니다. 세포 식민지는 식민지 형태 및 크기, 췌장 유전자 마커 발현 및 포도당 자극 C-펩티드 분비 또는 GSCS 분석에 관한 기능적 특성을 포함한 추가 분석을 위해 수집된다. 두 유도 프로토콜의 결과는 두 프로토콜모두에서 비교됩니다.
인간 치과 펄프 줄기 세포는 유도의 첫날부터 구조와 같은 식민지를 형성 할 수 있습니다. 식민지 모양은 둥글고 조밀합니다. 모든 식민지는 유도 기간 내내 배양 용기에 떠 있다.
통합 유도 프로토콜의 총 식민지 수는 비 통합 유도의 결과에서 조금 더 높습니다. 식민지 크기의 백분율의 진화는 식민지 내부의 괴사 코어를 줄이는 것이 중요한 통합 유도시 중소 식민지 형성에서 유익한 추세를 보여줍니다. 췌장 유전자 마커 분석은 통합 유도 프로토콜이 MAP-A, GLUT-2, 인슐린 및 GLP-1R을 포함하여 췌장 마커의 높은 만료와 식민지를 산출한다는 것을 밝혔습니다, 측정된 인슐린 생성 세포로 분화를 건의하는.
기능 포도당 C-펩티드 분비가 중요하다. 결과는 두 유도 프로토콜이 포도당 도전에 좋은 반응으로 식민지를 산출한다는 것을 보여줍니다. 이 연구에서, 췌장 유도 프로토콜의 두 췌장 마커 만료 및 기능적 특성의 기간에 체외에서 인슐린 생산 세포를 생성할 수 있습니다., 프로토콜은 세포 형성을 생산 하는 인슐린의 더 나은 품질을 보여줍니다.
가까운 장래에 줄기 세포 기반 당뇨병 치료에 인간 치과 펄프 줄기 세포 응용 과 같은 인간 중간 엽 줄기 세포의 동향을 제안.
