Orquiectomia murina e ooforectomia para reduzir a produção de hormônios sexuais

Resumo

Este manuscrito descreve uma maneira consistente de realizar rapidamente orquiectomias e ovariectomias de roedores de sobrevivência.

Resumo

A sinalização de hormônios sexuais desempenha um papel crítico em vários sistemas de órgãos, bem como na progressão de várias doenças, incluindo doenças neurodegenerativas. A manipulação dos níveis de hormônios sexuais no sistema modelo murino permite o estudo de seu impacto em órgãos/tecidos e na progressão da doença. Orquiectomia - a remoção cirúrgica dos testículos - e ovariectomia - a remoção cirúrgica dos ovários - fornecem um método para esgotar os hormônios sexuais endógenos para que os níveis hormonais precisos possam ser fornecidos através de drogas ou outros métodos de entrega. Aqui, fornecemos métodos rápidos e minimamente invasivos para orquiectomia e ooforectomia no sistema modelo murino para a redução de hormônios sexuais. Este protocolo detalha o preparo cirúrgico e a excisão dos testículos através do saco escrotal, e a excisão dos ovários através de duas incisões no dorso lateral direito e esquerdo.

Introdução

Os testículos e ovários são os principais órgãos responsáveis pela produção de hormônios sexuais. A cascata de comunicação hormonal que leva à produção de testosterona e estrógeno é um processo bem caracterizado que se inicia no hipotálamo com a liberação do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH)¹. A liberação de GnRH causa a liberação de hormônio luteinizante (LH) e hormônio folículo-estimulante (FSH) da glândula pituitária. Como esses hormônios entram na corrente sanguínea, eles então afetam outros tecidos do corpo. O alvo primário do LH são os testículos (no sexo masculino) e os ovários (no sexo feminino)². Em re....

Protocolo

Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da UTSW (APN#2019-102840).

1. Orquiectomia murina

1. Prepare um campo de trabalho asséptico e certifique-se de que os instrumentos cirúrgicos necessários foram esterilizados e estão prontamente disponíveis. Siga práticas assépticas para cirurgia de sobrevivência de roedores.
2. Registrar o peso do camundongo macho e administrar o método de anestesia preferido de acordo com as diretrizes institucionais. Nesse protocolo, isoflurano a 2% foi administrado por vaporizador de precisão para manutenção da anestesia....

Resultados

O procedimento aqui apresentado é realizado em camundongos de um a três meses de idade no fundo C57BL/6J. Camundongos machos pesavam 16-28 g, e camundongos fêmeas pesavam 14-24 g no momento do procedimento. Este procedimento foi otimizado para ser aplicável em camundongos de várias idades, desde o desmame até a idade adulta.

A orquiectomia cirúrgica envolve uma única incisão cutânea no saco escrotal ventral, como mostra a Figura 1A. Ambos os testículos .......

Discussão

A remoção cirúrgica de testículos e ovários permite estudar a fisiologia murina sob privação hormonal controlada. Essa técnica é importante para vários campos da ciência, incluindo neurodegeneração, metabolismo mineral, saúde cardiovascular e reprodutiva 15,16,17,18,19,20,21. A.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
1mL Syringe	BD	309659
30G 1/2" Needle	BD	305106
AutoClip System	Fine Science Tools	12020-00
Betadine Solution	Fisher Scientific	NC0158124
Cotton-Tipped Applicators	Fisher Scientific	10-000-692
Double -ended Micro Spatula	Fine Science Tools	10091-12
Galilean Loupes	Fine Science Tools	28050-30	Optional, can provide better clarity during procedure
Gauze Sponges, 4"x4"	Fisher Scientific	13-761-52
Graefe Forceps	Fine Science Tools	11150-10
High Temp Cautery Kit	Fine Science Tools	18010-00	Using the fine tip attachment
Needle Holders	Fine Science Tools	12001-13
PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN	Covetrus	29242	4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best
Rodent Warming pad	Kent Scientific	RT-0515
Sterile Alcohol Prep Pads	Fisher Scientific	22-363-750
Straight Locking Micro Needle Holders	Fine Science Tools	12060-01
Surgical Scissors	Fine Science Tools	140-60-09
Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge	Fine Science Tools	15000-08
Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream	Amazon	N/A
Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue	Amazon	#9861-900