Orchiectomia murina e ovariectomia per ridurre la produzione di ormoni sessuali

Riepilogo

Questo manoscritto descrive un modo coerente per eseguire rapidamente orchiectomie e ovariectomie di sopravvivenza nei roditori.

Abstract

La segnalazione degli ormoni sessuali svolge un ruolo fondamentale in più sistemi di organi e nella progressione di varie malattie, comprese le malattie neurodegenerative. La manipolazione dei livelli di ormoni sessuali nel sistema modello murino consente di studiare il loro impatto su organi/tessuti e all'interno della progressione della malattia. L'orchiectomia - la rimozione chirurgica dei testicoli - e l'ovariectomia - la rimozione chirurgica delle ovaie - forniscono un metodo per esaurire gli ormoni sessuali endogeni in modo che i livelli ormonali precisi possano essere forniti attraverso farmaci o altri metodi di somministrazione. Qui, forniamo metodi rapidi e minimamente invasivi sia per l'orchiectomia che per l'ovariectomia nel sistema modello murino per la riduzione degli ormoni sessuali. Questo protocollo descrive in dettaglio la preparazione chirurgica e l'escissione dei testicoli attraverso il sacco scrotale e l'escissione delle ovaie tramite due incisioni nel dorso laterale destro e sinistro.

Introduzione

I testicoli e le ovaie sono i principali organi responsabili della produzione di ormoni sessuali. La cascata di comunicazione ormonale che porta alla produzione di testosterone ed estrogeni è un processo ben caratterizzato che inizia nell'ipotalamo con il rilascio dell'ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH)¹. Il rilascio di GnRH provoca il rilascio dell'ormone luteinizzante (LH) e dell'ormone follicolo-stimolante (FSH) dalla ghiandola pituitaria. Quando questi ormoni entrano nel flusso sanguigno, influenzano altri tessuti del corpo. Il bersaglio primario dell'LH sono i testicoli (nei maschi) e le ovaie (nelle femmine)². In risposta all'LH, i testicoli producono e rilasciano testosterone³. Allo stesso modo, le ovaie producono estrogeni⁴. Mentre gli effetti previsti di questi ormoni sono quelli di preparare le cellule e il corpo per la fecondazione e garantire un sistema riproduttivo funzionante, molti altri sistemi corporei possono essere influenzati.

Gli ormoni sessuali sono stati collegati a diverse funzioni fisiologiche. Ad esempio, gli estrogeni aiutano a mantenere l'omeostasi ossea impedendo il riassorbimento dell'osso da parte degli osteoclasti. Per questo motivo, i modelli murini ovariectomizzati possono essere utilizzati per studiare la fisiologia di malattie ossee come l'osteoporosi ^5,6,7. Il testosterone e gli estrogeni sono anche obiettivi di ricerca per molte malattie cardiovascolari e neurodegenerative. Recentemente, l'elevata produzione di testosterone abbinata a una dieta ricca di grassi è stata collegata allo stress ossidativo vascolare⁸. Nel cervello, i cambiamenti nell'LH dopo l'ovariectomia hanno causato alterazioni nella memoria spaziale⁹. La riduzione degli estrogeni dopo l'ovariectomia è diventata anche un sistema modello per lo studio della morte cellulare nell'ippocampo, in quanto ciò può indurre apoptosi, con conseguenti deficit di memoria¹⁰. Il testosterone ha anche mostrato un ruolo nella crescita dei reni sia nei modelli murini che negli esseri umani dopo il trapianto di rene¹¹.

La creazione di un modello murino privo di ormoni consente lo studio degli ormoni sessuali e delle loro cascate ormonali su varie malattie o tessuti. Ciò può essere ottenuto mediante rimozione chirurgica dei testicoli (orchiectomia) o delle ovaie (ovariectomia). Questa procedura può essere eseguita in topi di qualsiasi ceppo quando sono giovani come l'età dello svezzamento (ventuno giorni) o qualsiasi età adulta. L'ovariectomia viene eseguita nei topi femmine, mentre l'orchiectomia viene eseguita nei topi maschi. Rimuovendo questi organi, i livelli di estrogeni e testosterone e molti dei loro derivati, come il progesterone, possono essere notevolmente ridotti^12,13. Il processo di esecuzione di orchiectomie o ovariectomie nei topi può essere rapido e minimamente invasivo con la tecnica appropriata. L'escissione rapida di questi organi in modo sicuro ed efficiente può consentire una rapida elaborazione chirurgica mantenendo il numero di topi al minimo avendo un tasso di sopravvivenza del 100% se eseguita correttamente. Qui, descriviamo in dettaglio un protocollo per l'escissione rapida dei testicoli e delle ovaie e dimostriamo il corretto monitoraggio post-chirurgico per consentire ai ricercatori di eseguire questo intervento chirurgico in modo rapido e sicuro. Includiamo anche esempi visivi degli organi sessuali e dei tessuti circostanti per fornire al chirurgo punti di riferimento anatomici durante l'esecuzione di questa procedura.

Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso l'UTSW (APN#2019-102840).

1. Orchiectomia murina

1. Preparare un campo di lavoro asettico e assicurarsi che gli strumenti chirurgici necessari siano stati sterilizzati e siano prontamente disponibili. Seguire pratiche asettiche per la chirurgia di sopravvivenza dei roditori.
2. Registrare il peso del topo maschio e somministrare il metodo di anestesia preferito secondo le linee guida istituzionali. In questo protocollo, l'isoflurano al 2% è stato somministrato tramite un vaporizzatore di precisione per mantenere l'anestesia. Prima della procedura, somministrare antidolorifici secondo le linee guida istituzionali. In questo protocollo, 1,0 mg/kg di Buprenorfina SR e 5 mg/kg di Meloxicam sono stati somministrati per via sottocutanea.
3. Una volta che il topo è sotto anestesia, copri gli occhi dell'animale con gel oculare lubrificante per evitare la formazione di lesioni agli occhi, disseccamento corneale o ulcera.
4. Prima di procedere, assicurarsi che il piano di anestesia sia corretto eseguendo un test di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi.
5. Preparare l'area chirurgica dell'animale prima di posizionarlo sul campo operatorio asettico e drappeggiato.
   1. Quindi, radere le aree inguinale e scrotale del topo usando un paio di tosatrici.
      NOTA: La rasatura del basso addome superiore al pene consentirà una migliore visualizzazione durante l'intervento.
   2. Utilizzando un applicatore di cotone nastrato, applicare uno strato sottile di crema depilatoria (vedi Tabella dei materiali) sulla pelle dell'animale, coprendo lo scroto e l'area circostante appena rasata. Attendere 30 s e rimuovere la crema con un pezzo di garza pulita.
   3. Usa spugne di garza imbevute di etanolo al 70% per rimuovere eventuali residui di crema e peli dall'area.
      NOTA: Il 70% di etanolo in questa fase aiuta nella rimozione completa della crema depilatoria. La preparazione antisettica del sito chirurgico viene eseguita nella fase 1.8.
6. Trasferire il topo nell'area chirurgica e assicurarsi che sia disponibile una fonte di calore per mantenere la temperatura corporea dell'animale durante l'operazione. Posizionare l'animale in posizione supina su un telo chirurgico e utilizzare del nastro adesivo morbido per far aderire le zampe del topo al tappetino chirurgico.
7. Se i testicoli salgono nell'addome, palpare con cura l'addome per far scendere i testicoli. Usa una mano guantata per applicare una leggera pressione di rotolamento verso il basso sull'addome.
   NOTA: È più facile eseguire questo intervento chirurgico con un endoscopio di dissezione o utilizzando un paio di lenti per un maggiore ingrandimento. Se si esegue questa operazione sotto un endoscopio di dissezione, prenditi un momento per posizionare lo scroto del topo sotto il campo visivo dell'endoscopio. È possibile utilizzare un nastro morbido per far aderire le zampe o l'addome del topo al campo operatorio per garantire che rimanga nella posizione corretta.
8. Strofinare la pelle con lo scrub chirurgico Betadine (o uno scrub antisettico simile per la preparazione della pelle), seguito da uno scrub alcolico al 70% almeno tre volte per garantire una corretta disinfezione della pelle. Per ogni scrub, strofinare con un movimento radiale verso l'esterno, in modo che il centro del sito di incisione venga strofinato per primo e terminando con il bordo esterno dell'area chirurgica rasata che viene strofinato per ultimo.
9. A questo punto, indossare guanti chirurgici sterili. Per le fasi successive della procedura, utilizzare tecniche asettiche. Coprire il topo con un telo chirurgico sterile con una piccola incisione (tagliata a circa 0,5-1 pollice quadrato per adattarsi al sito chirurgico) sopra l'animale per coprire il corpo con il materiale del telo.
10. Crea un'incisione ventrale sulla linea mediana nello scroto di circa 1 cm -1,5 cm di lunghezza utilizzando una lama per bisturi chirurgico o strumenti simili seguendo le linee guida istituzionali approvate per il benessere degli animali.
11. Afferrando il bordo tagliato della pelle, utilizzare uno strumento con punta smussata per separare la pelle dal tessuto sottostante. Prenditi del tempo per farlo sui bordi laterali, superiori e inferiori dell'incisione.
12. Isolare un testicolo usando la spatola e la pinza per spostare l'incisione nella pelle da centrare su uno dei testicoli. Se questo è difficile, torna alla 1.11 e separa ulteriormente la pelle dagli strati sottostanti.
13. Prendi un paio di pinze curve e posizionale su entrambi i lati del testicolo. Applicare una leggera pressione verso il basso per esteriorizzare il testicolo. Afferra lo strato sottile e trasparente di muscolo che si trova sopra il testicolo usando una pinza. Questo è il muscolo cremastere. La verifica del corretto strato muscolare viene effettuata osservando questo strato e la sua circolazione, muovendosi indipendentemente dal testicolo sottostante.
    NOTA: L'identificazione del tessuto corretto è confermata dalla sua trasparenza e dalla capacità di muoversi indipendentemente dai tessuti sottostanti.
    1. Manipolare il tessuto muscolare usando le pinze fino a quando l'apice del muscolo non viene afferrato. Questa dovrebbe essere la porzione più bassa, con i testicoli e la cauda epididimo situati al di sotto.
14. Afferrare il muscolo cremastere con una pinza e allontanarsi delicatamente dai testicoli e dall'epididimo. Crea un'incisione di 0,5 cm attraverso il muscolo cremastere del primo testicolo al suo apice usando un piccolo paio di forbici a molla Vannas.
15. Posizionare un morsetto di bloccaggio sul bordo posteriore del muscolo cremastere tagliato. Utilizzare un paio di emostatici stretti o un paio di micro portaaghi bloccabili. Una volta che il tessuto è stato bloccato, appoggiare delicatamente lo strumento sul lato laterale del mouse per mantenere il tessuto bloccato durante le seguenti fasi procedurali.
16. Utilizzare una pinza per afferrare il bordo superiore dell'incisione eseguita al punto 1.14. Mentre le due estremità del muscolo cremastere vengono retratte, utilizzare un altro paio di pinze per raggiungere l'interno della cavità e afferrare delicatamente il testicolo.
    1. Tiralo verso l'esterno attraverso il foro nel muscolo. Fare attenzione a verificare la presenza di eventuali segni di vasi sanguigni intaccati e sangue nel campo chirurgico.
    2. Il testicolo, l'epididimo, il cordone spermatico attaccato e il vaso sanguigno saranno evidenti quando i tessuti sono correttamente esternalizzati.
    3. Vicino all'estremità caudale-dorsale dell'epididimo e del testicolo, c'è un punto fibroso di attacco del testicolo al muscolo cremastere. Arrotolare lateralmente il tessuto esteriorizzato per individuare questo punto di inserimento. Recidere questo per evitare danni al muscolo e consentire un ulteriore isolamento e visualizzazione dei tessuti. Usa due paia di pinze per eseguire una tecnica di morsetto e strappo.
17. Cerca il tessuto adiposo intorno al testicolo dal cuscinetto adiposo inguinale. Usa un paio di pinze per afferrare il cuscinetto adiposo e tira delicatamente per esteriorizzarlo.
    1. Non afferrare il vaso sanguigno che viaggia lungo il cuscinetto adiposo, poiché tirarlo può portare a emorragie.
18. Individua il funicolo spermatico, i vasi sanguigni e il cuscinetto adiposo rimanente che è prossimale ai tessuti esteriori e usa un paio di emostatici per bloccarlo. Mantenendo una leggera tensione sul testicolo distale, cauterizzare il funicolo spermatico e i vasi sanguigni distali alla pinza emostatica.
    1. Una volta completato, rilasciare lentamente il morsetto prossimale all'estremità cauterizzata e verificare la presenza di segni di sanguinamento. Se presente, ripetere questo passaggio. È utile utilizzare un paio di pinze per mantenere una leggera tensione sull'estremità distale del tessuto da cauterizzare.
19. Lasciare che il moncone reciso del funicolo spermatico si ritragga nel corpo. Afferra le due estremità tagliate del muscolo cremastere e uniscile. Valutare la dimensione del taglio nel tessuto e chiudere il tessuto utilizzando punti di sutura riassorbibili 4-0 o 5-0. A seconda delle dimensioni dell'incisione, saranno necessarie 1 o 2 suture. Tagliare le estremità della sutura a 0,5 cm usando le forbici da sutura.
20. Ripetere i passaggi 1.13-1.20 sull'altro lato dello scroto per rimuovere il secondo testicolo.
21. Preparati a chiudere l'incisione cutanea.
    1. Garantire una buona emostasi di entrambi i monconi di tessuto. Una scarsa emostasi si tradurrà in sanguinamento residuo nel campo chirurgico. In tal caso, individuare l'emorragia e cauterizzare. Ciò viene evitato con una lenta e attenta manipolazione dei tessuti con strumenti contundenti.
    2. Se si vede sangue in campo chirurgico, utilizzare un applicatore sterilizzato con punta di cotone per asciugare l'area per una migliore visualizzazione. Utilizzare una siringa per far gocciolare la soluzione salina sull'area per irrigare il sangue o il fluido lontano dal campo operatorio.
22. Avvicina i due lati dell'incisione cutanea per prepararla alla chiusura. Assicurarsi che le estremità suturate delle incisioni cremasteri non sporgano nell'incisione cutanea. Se necessario, tagliare ulteriormente le estremità della sutura.
23. Chiudi la pelle.
    1. Se si utilizzano clip per ferite, utilizzare una pinza per estroflacciare la pelle e allontanarla dal tessuto sottostante. Posizionare una clip per ferita centrata sull'incisione. Controlla che la pelle sia ben tagliata. Se l'incisione è leggermente troppo grande per essere chiusa sufficientemente da una clip per ferita, è possibile applicare la colla cutanea chirurgica alle porzioni superiore e inferiore dell'incisione.
    2. Se si utilizzano punti di sutura, posizionare il numero necessario di punti di sutura attraverso la pelle, senza afferrare il tessuto sottostante. Questo tipo di incisione richiederà 2-3 suture singole interrotte utilizzando materiale di sutura non assorbibile 4-0.
24. Pulire delicatamente la pelle intorno al sito chirurgico con soluzione fisiologica e un applicatore sterilizzato con punta di cotone per rimuovere il sangue secco o lo scrub antisettico residuo.

2. Ovariectomia murina

1. Preparare un campo di lavoro asettico e assicurarsi che gli strumenti chirurgici necessari siano stati sterilizzati e siano prontamente disponibili. Seguire pratiche asettiche per la chirurgia di sopravvivenza dei roditori.
2. Registrare il peso della femmina di topo e somministrare il metodo di anestesia preferito in base alle linee guida istituzionali. In questo protocollo, l'isoflurano al 2% è stato somministrato tramite un vaporizzatore di precisione per mantenere l'anestesia. Prima della procedura, somministrare farmaci antidolorifici secondo le linee guida istituzionali. In questo protocollo, 1,0 mg/kg di Buprenorfina SR e 5 mg/kg di Meloxicam sono stati somministrati per via sottocutanea.
3. Somministrare gel lubrificante per gli occhi sugli occhi dell'animale per evitare la formazione di lesioni oculari, disseccamento corneale o ulcera. Assicurarsi che sia disponibile una fonte di calore per mantenere la temperatura corporea dell'animale durante l'operazione. Assicurarsi che il piano di anestesia sia corretto controllando la risposta al pizzicamento delle dita dei piedi.
4. Preparare l'area chirurgica dell'animale prima di posizionarlo nel campo operatorio.
   1. Radere delicatamente il pelo sulla regione dorsolaterale del dorso dell'animale usando un paio di tagliacapelli. Rimuovi i peli dalla regione sopra il bordo superiore dei fianchi e sotto il bordo inferiore della gabbia toracica, così come le aree tra questi punti di riferimento.
   2. Usando un applicatore con punta di cotone, applica uno strato di crema depilatoria sulla pelle dell'animale, coprendo l'area appena rasata. Attendere 30 s e rimuovere la crema con un pezzo di garza, rimuovendo i peli fini che rimangono.
   3. Utilizzare una spugna di garza imbevuta di etanolo al 70% per rimuovere eventuali residui di crema e capelli dall'area chirurgica.
      NOTA: L'etanolo al 70% in questa fase aiuta a rimuovere completamente la crema depilatoria. La preparazione antisettica del sito chirurgico viene eseguita nella fase 2.5.
5. Posizionare l'animale in posizione laterale (per l'incisione per rimuovere un'ovaia alla volta) nel campo operatorio e assicurarsi che sia disponibile una fonte di calore. Strofinare l'area operatoria con lo scrub chirurgico Betadine (o uno scrub antisettico simile per la preparazione della pelle), seguito da alcol al 70% almeno tre volte per garantire una corretta disinfezione della pelle. Per ogni scrub, strofinare con un movimento radiale verso l'esterno, in modo che il centro dell'incisione venga strofinato per primo e il bordo esterno dell'area chirurgica rasata venga strofinato per ultimo.
6. A questo punto, indossare guanti chirurgici sterili. Per le fasi successive della procedura, utilizzare tecniche asettiche. Posizionare un telo chirurgico con una piccola incisione (tagliare un quadrato di circa 0,5-1 pollice nel telo per adattarlo al sito chirurgico) sull'animale in modo che il corpo sia coperto da un telo.
7. Individuare la posizione ideale per l'incisione chirurgica trovando il punto intermedio tra i fianchi e le costole del topo (vedere la Figura 2). Afferrare la pelle con una pinza e praticare un'incisione di 1,0 cm nella pelle in questa posizione.
8. Utilizzare uno strumento con punta smussata (sonda, spatola chirurgica o emostatici con punta smussata) per separare la pelle dal tessuto muscolare sottostante. Prenditi del tempo per farlo sui bordi laterali, superiori e inferiori dell'incisione.
9. Localizzare la parete muscolare dorsolaterale dell'addome. Se necessario, rimuovere il tessuto adiposo che si trova tra la pelle e gli strati muscolari. Nei topi maturi, questo tessuto adiposo è più prominente. Sposta questo tessuto adiposo verso l'estremità caudale del topo, esponendo la parete muscolare.
   1. Il tessuto adiposo si differenzia dalla parete addominale per colore: il tessuto adiposo appare bianco pallido e si trova più superficiale, mentre la parete addominale appare rosa e si trova più in profondità del tessuto adiposo.
10. Afferrare la parete addominale con una pinza a dente di ratto e praticare un'incisione di 0,5 cm.
11. Afferra un bordo di questa incisione con un paio di pinze, usa un secondo paio per raggiungere l'interno della cavità del corpo e trova l'ovaio, il corno uterino e il cuscinetto adiposo. Tirare delicatamente attraverso l'incisione nella parete muscolare per separare il muscolo dal tessuto sottostante ed esteriorizzarlo. Individua la transizione tra il corno uterino e l'ovaio.
12. Recidere l'ovaio eseguendo una tecnica di schiacciamento e lacerazione.
    1. Posizionare una pinza sull'estremità distale del corno uterino e posizionare la seconda pinza appena distale rispetto alla prima. Applicando una pressione decisa con entrambi i morsetti, allontanare quello più distale dal corpo, strappando la connessione tra di loro. Per ridurre al minimo il sanguinamento e il danno tissutale, tenere fermo il morsetto prossimale durante questo processo e fare attenzione a non allontanarlo dal corpo.
    2. In alternativa, utilizzare un cauterizzazione. Utilizzare un paio di pinze o emostatici per bloccare il corno uterino appena prossimale al punto di cauterizzazione desiderato. Usa uno strumento di cauterizzazione per recidere i tessuti.
13. Rilasciare delicatamente e lentamente il morsetto prossimale e verificare la presenza di segni di sanguinamento.
14. Lascia che il moncone del tessuto si ritiri nella cavità del corpo. Afferrare la parete addominale e tirare delicatamente verso l'alto. Non forzare il moncone di tessuto verso l'interno, poiché ciò aumenta la probabilità di sanguinamento.
15. Individua i bordi dell'incisione nella parete muscolare e uniscili per prepararti a suturarla.
16. Posizionare 1-2 punti di sutura singoli interrotti nella parete muscolare addominale utilizzando materiale di sutura riassorbibile 4-0. Tagliare le estremità della sutura a 0,5 cm usando le forbici da sutura.
17. Chiudere l'incisione lasciando che la pelle ritorni al suo naturale stato di riposo e poi estrarla verso l'alto, facendo attenzione a non afferrare il tessuto sottostante o le estremità del materiale di sutura. Posiziona 1-2 clip per ferite sulla pelle estroflessa. In base alle linee guida istituzionali, la pelle può anche essere chiusa utilizzando materiale di sutura 4-0 non assorbibile.
18. Per rimuovere l'altra ovaia, cambia la posizione del mouse in modo che l'altro lato laterale sia rivolto verso l'alto. Prestare attenzione quando si cambia la posizione del mouse in modo da non esercitare troppa pressione sulla pelle ferita dal passaggio 2.17.
19. Su questo lato, ripetere i passaggi da 2.5 a 2.17.
20. Pulire delicatamente la pelle intorno al sito chirurgico con soluzione fisiologica e un applicatore sterilizzato con punta di cotone per rimuovere il sangue secco o lo scrub antisettico residuo.

3. Cure post-operatorie

1. Secondo le linee guida istituzionali, somministrare farmaci antidolorifici fino a 72 ore dopo l'operazione. Documentare la procedura chirurgica degli animali, annotando la data, l'ora, l'anestetico e l'analgesico utilizzati. In questo caso, la buprenorfina a lento rilascio e il meloxicam vengono somministrati prima dell'intervento.
2. Al termine dell'intervento chirurgico, trasferirli in una gabbia pulita foderata con un tovagliolo di carta asciutto. Posiziona questa gabbia per 2/3 su una fonte di calore, lasciando l'altro 1/3 della gabbia fuori dal fuoco. Non mettere i topi insieme in una gabbia fino a quando non si sono ripresi dall'anestesia.
3. Lascia che l'animale riacquisti la capacità di camminare liberamente intorno alla gabbia prima di rimetterlo in una gabbia pulita con una normale lettiera per animali. In questo momento, i topi possono essere alloggiati insieme se tutti si sono ripresi dall'anestesia.
4. Per i primi giorni dopo l'intervento, assicurarsi che il cibo umido e l'acqua siano facilmente accessibili. Metti del cibo inumidito sul fondo della gabbia. Controllare frequentemente il sito chirurgico del topo e cercare eventuali segni di infezione o sanguinamento.
5. Dopo l'intervento chirurgico, assicurarsi che i topi siano alloggiati da soli o con altri animali che hanno subito la stessa procedura contemporaneamente. Un topo che si sta riprendendo da un intervento chirurgico situato nella stessa gabbia di uno senza intervento chirurgico può introdurre un pericolo e dovrebbe essere evitato.
6. Per i topi che hanno subito un'ovariectomia e hanno clip per ferite sui lati dorsolaterali della schiena, rimuovere eventuali habitat di igloo di roditori dalla gabbia per ridurre la possibilità che la clip della ferita del topo rimanga impigliata nell'igloo durante la prima settimana di guarigione.
7. Continuare a monitorare l'animale per segni di infezione, dolore o complicazioni chirurgiche ogni 12 ore fino alle prime 72 ore del tempo di guarigione.
8. Rimuovere le clip della ferita utilizzando uno strumento per la rimozione della clip della ferita 10-14 giorni dopo l'intervento chirurgico.

Risultati

La procedura qui presentata viene eseguita in topi di età compresa tra uno e tre mesi nel background C57BL/6J. I topi maschi pesavano 16-28 g e i topi femmine pesavano 14-24 g al momento della procedura. Questa procedura è stata ottimizzata per essere applicabile a topi di molte età, dallo svezzamento fino all'età adulta.

L'orchiectomia chirurgica comporta una singola incisione cutanea nel sacco scrotale ventrale, come illustrato nella Figura 1A. Entrambi i te...

Discussione

L'asportazione chirurgica dei testicoli e delle ovaie consente di studiare la fisiologia murina in condizioni di deprivazione ormonale controllata. Questa tecnica è importante per molti campi della scienza, tra cui la neurodegenerazione, il metabolismo minerale, la salute cardiovascolare e riproduttiva 15,16,17,18,19,20,21.<...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
1mL Syringe	BD	309659
30G 1/2" Needle	BD	305106
AutoClip System	Fine Science Tools	12020-00
Betadine Solution	Fisher Scientific	NC0158124
Cotton-Tipped Applicators	Fisher Scientific	10-000-692
Double -ended Micro Spatula	Fine Science Tools	10091-12
Galilean Loupes	Fine Science Tools	28050-30	Optional, can provide better clarity during procedure
Gauze Sponges, 4"x4"	Fisher Scientific	13-761-52
Graefe Forceps	Fine Science Tools	11150-10
High Temp Cautery Kit	Fine Science Tools	18010-00	Using the fine tip attachment
Needle Holders	Fine Science Tools	12001-13
PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN	Covetrus	29242	4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best
Rodent Warming pad	Kent Scientific	RT-0515
Sterile Alcohol Prep Pads	Fisher Scientific	22-363-750
Straight Locking Micro Needle Holders	Fine Science Tools	12060-01
Surgical Scissors	Fine Science Tools	140-60-09
Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge	Fine Science Tools	15000-08
Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream	Amazon	N/A
Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue	Amazon	#9861-900