Orchiektomie und Ovariektomie bei Mäusen zur Verringerung der Sexualhormonproduktion

Zusammenfassung

Dieses Manuskript beschreibt eine konsistente Methode zur schnellen Durchführung von Überlebensorchiektomien und Ovariektomien von Nagetieren.

Zusammenfassung

Die Signalübertragung von Sexualhormonen spielt eine entscheidende Rolle in mehreren Organsystemen sowie beim Fortschreiten verschiedener Krankheiten, einschließlich neurodegenerativer Erkrankungen. Die Manipulation des Sexualhormonspiegels im murinen Modellsystem ermöglicht die Untersuchung ihrer Auswirkungen auf Organe/Gewebe und auf das Fortschreiten der Krankheit. Die Orchiektomie - die chirurgische Entfernung der Hoden - und die Ovariektomie - die chirurgische Entfernung der Eierstöcke - bieten eine Methode, um die endogenen Sexualhormone zu erschöpfen, so dass die genauen Hormonspiegel durch Medikamente oder andere Verabreichungsmethoden bereitgestellt werden können. Hier stellen wir schnelle und minimalinvasive Methoden sowohl für die Orchiektomie als auch für die Ovariektomie im murinen Modellsystem zur Reduktion von Sexualhormonen zur Verfügung. Dieses Protokoll beschreibt die chirurgische Vorbereitung und Exzision der Hoden durch den Hodensack und die Exzision der Eierstöcke über zwei Schnitte im rechten und linken seitlichen Dorsum.

Einleitung

Die Hoden und Eierstöcke sind die primären Organe, die für die Produktion von Sexualhormonen verantwortlich sind. Die Kaskade der hormonellen Kommunikation, die zur Produktion von Testosteron und Östrogen führt, ist ein gut charakterisierter Prozess, der im Hypothalamus mit der Freisetzung des Gonadotropin-Releasing-Hormons (GnRH)¹ beginnt. Die Freisetzung von GnRH bewirkt die Freisetzung des luteinisierenden Hormons (LH) und des follikelstimulierenden Hormons (FSH) aus der Hirnanhangsdrüse. Wenn diese Hormone in den Blutkreislauf gelangen, wirken sie sich dann auf andere Gewebe im Körper aus. Das primäre Ziel von LH sind die Hoden (bei Männern) und die Eierstöcke (bei Frauen)². Als Reaktion auf LH produzieren und setzen die Hoden Testosteron³ frei. In ähnlicher Weise produzieren die Eierstöcke Östrogen⁴. Während die beabsichtigte Wirkung dieser Hormone darin besteht, die Zellen und den Körper auf die Befruchtung vorzubereiten und ein funktionierendes Fortpflanzungssystem zu gewährleisten, können viele andere Körpersysteme betroffen sein.

Sexualhormone wurden mit mehreren physiologischen Funktionen in Verbindung gebracht. Zum Beispiel hilft Östrogen, die Knochenhomöostase aufrechtzuerhalten, indem es die Resorption von Knochen durch Osteoklasten verhindert. Aus diesem Grund können ovariektomierte Mausmodelle verwendet werden, um die Physiologie von Knochenerkrankungen wie Osteoporose zu untersuchen ^5,6,7. Testosteron und Östrogen sind auch Forschungsziele für viele kardiovaskuläre und neurodegenerative Erkrankungen. In jüngster Zeit wurde eine erhöhte Testosteronproduktion in Verbindung mit einer fettreichen Ernährung mit vaskulärem oxidativem Stress in Verbindung gebracht⁸. Im Gehirn haben Veränderungen der LH nach einer Ovariektomie zu Veränderungen des räumlichen Gedächtnisses geführt⁹. Die Reduktion von Östrogenen nach einer Ovariektomie ist auch zu einem Modellsystem für die Untersuchung des Zelltods im Hippocampus geworden, da dies eine Apoptose induzieren kann, die zu Gedächtnisdefiziten führt¹⁰. Testosteron hat auch eine Rolle beim Wachstum der Nieren gezeigt, sowohl in Mausmodellen als auch beim Menschen nach einer Nierentransplantation¹¹.

Die Erstellung eines hormonarmen Mausmodells ermöglicht die Untersuchung von Sexualhormonen und ihren Hormonkaskaden bei verschiedenen Krankheiten oder Geweben. Dies kann durch eine operative Entfernung der Hoden (Orchiektomie) oder der Eierstöcke (Ovariektomie) erreicht werden. Dieses Verfahren kann bei Mäusen jeden Stammes durchgeführt werden, wenn sie bereits im Entwöhnungsalter (einundzwanzig Tage) oder im Erwachsenenalter sind. Die Ovariektomie wird bei weiblichen Mäusen durchgeführt, während die Orchiektomie bei männlichen Mäusen durchgeführt wird. Durch die Entfernung dieser Organe kann der Östrogen- und Testosteronspiegel und viele ihrer Derivate, wie z. B. Progesteron, stark gesenkt werden^12,13. Der Prozess der Durchführung von Orchiektomien oder Ovariektomien bei Mäusen kann mit der richtigen Technik schnell und minimalinvasiv sein. Die schnelle Exzision dieser Organe auf sichere und effiziente Weise kann eine schnelle chirurgische Behandlung ermöglichen und gleichzeitig die Anzahl der Mäuse minimal halten, da sie bei korrekter Durchführung eine Überlebensrate von 100 % aufweist. Hier beschreiben wir ein Protokoll für die schnelle Entfernung der Hoden und Eierstöcke und demonstrieren die richtige postoperative Überwachung, damit die Forscher diese Operation schnell und sicher durchführen können. Wir fügen auch visuelle Beispiele der Geschlechtsorgane und des umgebenden Gewebes hinzu, um dem Chirurgen bei der Durchführung dieses Eingriffs anatomische Orientierungspunkte zu liefern.

Protokoll

Alle Tierversuche wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der UTSW genehmigt (APN#2019-102840).

1. Orchiektomie bei Mäusen

1. Bereiten Sie ein aseptisches Arbeitsfeld vor und stellen Sie sicher, dass die erforderlichen chirurgischen Instrumente sterilisiert wurden und leicht verfügbar sind. Befolgen Sie aseptische Praktiken für die Überlebenschirurgie von Nagetieren.
2. Erfassen Sie das Gewicht der männlichen Maus und verabreichen Sie die bevorzugte Anästhesiemethode gemäß den institutionellen Richtlinien. In diesem Protokoll wurden 2% Isofluran über einen Präzisionsverdampfer verabreicht, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten. Verabreichen Sie vor dem Eingriff Schmerzmittel gemäß den institutionellen Leitlinien. In diesem Protokoll wurden 1,0 mg/kg Buprenorphin SR und 5 mg/kg Meloxicam subkutan verabreicht.
3. Sobald die Maus unter Narkose ist, bedecken Sie die Augen des Tieres mit befeuchtendem Augengel, um die Bildung von Augenverletzungen, Hornhautaustrocknung oder Geschwüren zu vermeiden.
4. Bevor Sie fortfahren, stellen Sie sicher, dass die Anästhesie richtig ist, indem Sie einen Zehenkneiftest durchführen.
5. Bereiten Sie den Operationsbereich des Tieres vor, bevor Sie ihn auf das aseptische, drapierte Operationsfeld legen.
   1. Als nächstes rasierst du den Leisten- und Hodensackbereich der Maus mit einer Haarschneidemaschine.
      HINWEIS: Die Rasur des Unterbauchs oberhalb des Penis ermöglicht eine bessere Visualisierung während der Operation.
   2. Tragen Sie mit einem mit Watte abgeklebten Applikator eine dünne Schicht Enthaarungscreme (siehe Materialtabelle) auf die Haut des Tieres auf und bedecken Sie den Hodensack und die Umgebung, die gerade rasiert wurde. Warten Sie 30 s und entfernen Sie die Creme mit einem Stück sauberer Gaze.
   3. Verwenden Sie 70 % mit Ethanol getränkte Mullschwämme, um die restliche Creme und die Haare von der Stelle abzuwischen.
      HINWEIS: 70% Ethanol in diesem Schritt soll die vollständige Entfernung der Enthaarungscreme unterstützen. Die antiseptische Vorbereitung des Operationsfeldes erfolgt in Schritt 1.8.
6. Bringen Sie die Maus in den Operationsbereich und stellen Sie sicher, dass eine Wärmequelle zur Verfügung steht, um die Körpertemperatur des Tieres während der Operation aufrechtzuerhalten. Legen Sie das Tier in Rückenlage auf ein OP-Tuch und kleben Sie die Füße der Maus mit weichem Klebeband auf die OP-Matte.
7. Wenn die Hoden in den Bauch aufsteigen, tasten Sie den Bauch vorsichtig ab, damit die Hoden absinken. Verwenden Sie eine behandschuhte Hand, um sanften Rolldruck nach unten auf den Bauch auszuüben.
   HINWEIS: Es ist einfacher, diese Operation unter einem Seziergerät oder mit einer Lupenbrille für eine verbesserte Vergrößerung durchzuführen. Wenn Sie dies unter einem Dissektionsfernrohr durchführen, nehmen Sie sich einen Moment Zeit, um den Hodensack der Maus unter dem Sichtfeld des Oszilloskops zu positionieren. Ein weiches Klebeband kann verwendet werden, um die Beine oder den Bauch der Maus auf das Operationsfeld zu kleben, um sicherzustellen, dass sie an der richtigen Stelle bleibt.
8. Schrubben Sie die Haut mit einem chirurgischen Peeling von Betadine (oder einem ähnlichen antiseptischen Hautpräparat), gefolgt von einem Peeling mit 70 % Alkohol mindestens dreimal, um eine ordnungsgemäße Hautdesinfektion zu gewährleisten. Schrubben Sie bei jedem Peeling in einer radialen Bewegung nach außen, so dass die Mitte der Inzisionsstelle zuerst geschrubbt wird und der äußere Rand des rasierten Operationsbereichs zuletzt geschrubbt wird.
9. Ziehen Sie zu diesem Zeitpunkt sterile OP-Handschuhe an. Verwenden Sie für die nächsten Schritte des Verfahrens aseptische Techniken. Bedecken Sie die Maus mit einem sterilen chirurgischen Tuch mit einem kleinen Einschnitt (auf etwa 0,5-1 Zoll im Quadrat geschnitten, um über die Operationsstelle zu passen) über dem Tier, um den Körper mit dem Abdeckmaterial zu bedecken.
10. Legen Sie einen ventralen Mittellinienschnitt im Hodensack von ca. 1 cm bis 1,5 cm Länge mit einer chirurgischen Skalpellklinge oder ähnlichen Instrumenten an, die den von Ihnen genehmigten institutionellen Tierschutzrichtlinien entsprechen.
11. Greife den Schnittrand der Haut und trenne die Haut mit einem stumpfen Instrument vom darunterliegenden Gewebe. Nehmen Sie sich Zeit, um dies an den lateralen, oberen und unteren Rändern des Einschnitts zu tun.
12. Isolieren Sie einen Hoden, indem Sie den Spatel und die Pinzette verwenden, um den Einschnitt in der Haut so zu bewegen, dass er auf einem der Hoden zentriert wird. Wenn dies schwierig ist, gehen Sie zurück zu 1.11 und trennen Sie die Haut weiter von den darunterliegenden Schichten.
13. Nimm eine gebogene Pinzette und lege sie auf beide Seiten des Hodens. Üben Sie einen sanften Druck nach unten aus, um den Hoden nach außen zu drücken. Greife die dünne, durchsichtige Muskelschicht, die sich auf dem Hoden befindet, mit einer Pinzette. Das ist der Cremaster-Muskel. Die Überprüfung der korrekten Muskelschicht erfolgt durch die Beobachtung dieser Schicht und ihrer Durchblutung, die sich unabhängig vom darunter liegenden Hoden bewegt.
    HINWEIS: Die Identifizierung des korrekten Gewebes wird durch seine Transparenz und seine Fähigkeit, sich unabhängig vom darunter liegenden Gewebe zu bewegen, bestätigt.
    1. Manipulieren Sie das Muskelgewebe mit einer Pinzette, bis der Scheitelpunkt des Muskels erfasst ist. Dies sollte der unterste Teil sein, darunter befinden sich die Hoden und der Nebenhoden der Cauda.
14. Fassen Sie den Cremaster-Muskel mit einer Pinzette und bewegen Sie sich vorsichtig von den Hoden und Nebenhoden weg. Machen Sie einen 0,5 cm langen Schnitt durch den Cremaster-Muskel des ersten Hodens an seiner Spitze mit einer kleinen Vannas-Federschere.
15. Platzieren Sie eine Verriegelungsklemme an der hinteren Kante des geschnittenen Cremaster-Muskels. Verwenden Sie ein schmales Paar Hämostaten oder ein Paar verriegelnde Mikronadelhalter. Sobald das Gewebe geklemmt ist, legen Sie das Instrument vorsichtig auf die seitliche Seite der Maus, um das Gewebe während der folgenden Verfahrensschritte festzuhalten.
16. Greife mit einer Pinzette den oberen Rand des in Schritt 1.14 vorgenommenen Schnitts. Während die beiden Enden des Cremaster-Muskels zurückgezogen werden, greifen Sie mit einer weiteren Pinzette in den Hohlraum und fassen Sie den Hoden vorsichtig an.
    1. Ziehe es durch das Loch im Muskel nach außen. Achten Sie darauf, auf Anzeichen von eingekerbten Blutgefäßen und Blut im Operationsfeld zu achten.
    2. Der Hoden, die Nebenhoden, der anhaftende Samenstrang und das Blutgefäß werden sichtbar, wenn das Gewebe richtig externalisiert wird.
    3. In der Nähe des kaudal-dorsalen Endes des Nebenhodens und des Hodens befindet sich ein fibröser Ansatzpunkt des Hodens am Cremaster-Muskel. Rollen Sie das äußere Gewebe seitlich, um diesen Einstichpunkt zu finden. Trennen Sie diese, um eine Schädigung des Muskels zu vermeiden und eine weitere Isolierung und Visualisierung des Gewebes zu ermöglichen. Verwende zwei Pinzettenpaare, um eine Klemm- und Reißtechnik durchzuführen.
17. Suchen Sie nach Fettgewebe um den Hoden herum aus dem Leistenfettpolster. Greife mit einer Pinzette nach dem Fettpolster und ziehe es vorsichtig, um es nach außen zu drücken.
    1. Greifen Sie nicht nach dem Blutgefäß, das entlang des Fettpolsters verläuft, da das Ziehen daran zu Blutungen führen kann.
18. Lokalisieren Sie den Samenstrang, die Blutgefäße und das verbleibende Fettpolster, das sich in der Nähe des äußeren Gewebes befindet, und verwenden Sie ein Paar Hämostaten, um es zu klemmen. Halten Sie eine leichte Spannung auf dem distalen Hoden aufrecht und kauterisieren Sie den Samenstrang und die Blutgefäße distal der Hämosteklemme.
    1. Sobald Sie fertig sind, lösen Sie die Klemme langsam proximal zum kauterisierten Ende und prüfen Sie, ob es Anzeichen von Blutungen gibt. Falls vorhanden, wiederholen Sie diesen Schritt. Es ist hilfreich, eine Pinzette zu verwenden, um eine sanfte Spannung auf das distale Ende des zu kauterisierenden Gewebes zu halten.
19. Lassen Sie den abgetrennten Stumpf des Samenstrangs wieder in den Körper zurückziehen. Greife die beiden abgeschnittenen Enden des Cremaster-Muskels und führe sie zusammen. Beurteilen Sie die Größe des Schnitts im Gewebe und verschließen Sie das Gewebe mit resorbierbaren 4-0- oder 5-0-Nähten. Je nach Schnittgröße sind 1 oder 2 Nähte erforderlich. Kürzen Sie die Nahtenden mit einer Nahtschere auf 0,5 cm.
20. Wiederholen Sie die Schritte 1.13-1.20 auf der anderen Seite des Hodensacks, um den zweiten Hoden zu entfernen.
21. Bereiten Sie sich darauf vor, den Hautschnitt zu schließen.
    1. Sorgen Sie für eine gute Blutstillung beider Gewebestümpfe. Eine schlechte Hämostase führt zu Restblutungen im Operationsfeld. Wenn dies der Fall ist, lokalisieren Sie die Blutung und kauterisieren Sie. Dies wird durch langsame und vorsichtige Manipulation des Gewebes mit stumpfen Instrumenten vermieden.
    2. Wenn Blut im Operationsfeld zu sehen ist, verwenden Sie einen sterilisierten Applikator mit Wattespitze, um den Bereich für eine bessere Visualisierung zu trocknen. Verwenden Sie eine Spritze, um Kochsalzlösung auf den Bereich zu tropfen, um Blut oder Flüssigkeit vom Operationsfeld weg zu spülen.
22. Ziehen Sie die beiden Seiten des Hautschnitts zusammen, um ihn für den Verschluss vorzubereiten. Stellen Sie sicher, dass die vernähten Enden der Cremaster-Einschnitte nicht in den Hautschnitt hineinragen. Bei Bedarf werden die Enden der Naht weiter gekürzt.
23. Schließen Sie die Haut.
    1. Wenn Sie Wundklammern verwenden, verwenden Sie eine Pinzette, um die Haut abzuschneiden und vom darunter liegenden Gewebe wegzuziehen. Platzieren Sie eine Wundklammer mittig über dem Einschnitt. Prüfen Sie, ob die Haut gut geschnitten ist. Wenn der Schnitt etwas zu groß ist, als dass eine Wundklammer ihn ausreichend schließen könnte, kann chirurgischer Hautkleber auf den oberen und unteren Teil des Schnitts aufgetragen werden.
    2. Wenn Sie Nähte verwenden, führen Sie die erforderliche Anzahl von Nähten durch die Haut, ohne das darunter liegende Gewebe zu greifen. Diese Art der Inzision erfordert 2-3 einzelne unterbrochene Nähte mit 4-0 nicht resorbierbarem Nahtmaterial.
24. Reinigen Sie die Haut um die Operationsstelle herum vorsichtig mit Kochsalzlösung und einem sterilisierten Applikator mit Wattespitze, um getrocknetes Blut oder antiseptisches Peeling zu entfernen.

2. Maus-Ovariektomie

1. Bereiten Sie ein aseptisches Arbeitsfeld vor und stellen Sie sicher, dass die erforderlichen chirurgischen Instrumente sterilisiert wurden und leicht verfügbar sind. Befolgen Sie aseptische Praktiken für die Überlebenschirurgie von Nagetieren.
2. Erfassen Sie das Gewicht der weiblichen Maus und verabreichen Sie die bevorzugte Anästhesiemethode gemäß den Richtlinien Ihrer Einrichtung. In diesem Protokoll wurden 2% Isofluran über einen Präzisionsverdampfer verabreicht, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten. Verabreichen Sie vor dem Eingriff Schmerzmittel gemäß den Richtlinien Ihrer Einrichtung. In diesem Protokoll wurden 1,0 mg/kg Buprenorphin SR und 5 mg/kg Meloxicam subkutan verabreicht.
3. Verabreichen Sie befeuchtetes Augengel auf die Augen des Tieres, um die Bildung von Augenverletzungen, Hornhautaustrocknung oder Geschwüren zu vermeiden. Stellen Sie sicher, dass eine Wärmequelle zur Verfügung steht, um die Körpertemperatur des Tieres während der Operation aufrechtzuerhalten. Stellen Sie die richtige Anästhesieebene sicher, indem Sie auf eine Zehenklemmreaktion achten.
4. Bereiten Sie den Operationsbereich des Tieres vor, bevor Sie es in das Operationsfeld legen.
   1. Rasieren Sie die Haare im dorsolateralen Bereich des Rückens des Tieres vorsichtig mit einer Haarschneidemaschine. Entfernen Sie Haare aus dem Bereich oberhalb des oberen Rand der Hüften und unterhalb des unteren Randes des Brustkorbs sowie aus den Bereichen zwischen diesen Orientierungspunkten.
   2. Tragen Sie mit einem Applikator mit Wattespitze eine Schicht Enthaarungscreme auf die Haut des Tieres auf und bedecken Sie den Bereich, der gerade rasiert wurde. Warten Sie 30 Sekunden und entfernen Sie die Creme mit einem Stück Gaze, um die verbleibenden feinen Härchen zu entfernen.
   3. Verwenden Sie einen mit 70 % Ethanol getränkten Mullschwamm, um restliche Creme und Haare aus dem Operationsbereich zu wischen.
      HINWEIS: 70% Ethanol in diesem Schritt soll helfen, die Enthaarungscreme vollständig zu entfernen. Die antiseptische Vorbereitung des Operationsfeldes wird in Schritt 2.5 durchgeführt.
5. Legen Sie das Tier in die Seitenlage (für den Schnitt, um einen Eierstock nach dem anderen zu entfernen) in das Operationsfeld und stellen Sie sicher, dass eine Wärmequelle zur Verfügung steht. Schrubben Sie den Operationsbereich mit dem chirurgischen Peeling Betadine (oder einem ähnlichen antiseptischen Hautpräparat), gefolgt von 70%igem Alkohol mindestens dreimal, um eine ordnungsgemäße Hautdesinfektion zu gewährleisten. Schrubben Sie bei jedem Peeling in einer radialen Bewegung nach außen, so dass die Mitte des Einschnitts zuerst geschrubbt wird und der äußere Rand des rasierten Operationsbereichs zuletzt geschrubbt wird.
6. Ziehen Sie zu diesem Zeitpunkt sterile OP-Handschuhe an. Verwenden Sie für die nächsten Schritte des Verfahrens aseptische Techniken. Legen Sie ein OP-Tuch mit einem kleinen Einschnitt (schneiden Sie ein etwa 0,5-1 Zoll großes Quadrat in das Tuch, damit es in die Operationsstelle passt) über das Tier, so dass der Körper mit Abdeckmaterial bedeckt ist.
7. Finden Sie die ideale Stelle für den chirurgischen Schnitt, indem Sie den halben Punkt zwischen den Hüften und Rippen der Maus finden (siehe Abbildung 2). Fassen Sie die Haut mit einer Pinzette an und machen Sie an dieser Stelle einen 1,0 cm langen Schnitt in die Haut.
8. Verwenden Sie ein Instrument mit stumpfer Spitze (Sonde, chirurgischer Spatel oder Hämostaten mit stumpfer Spitze), um die Haut vom darunter liegenden Muskelgewebe zu trennen. Nehmen Sie sich Zeit, um dies an den lateralen, oberen und unteren Rändern des Einschnitts zu tun.
9. Lokalisieren Sie die dorsolaterale Muskelwand des Bauches. Entfernen Sie bei Bedarf Fettgewebe, das zwischen den Haut- und Muskelschichten liegt. Bei reifen Mäusen ist dieses Fettgewebe stärker ausgeprägt. Bewegen Sie dieses Fettgewebe in Richtung des kaudalen Endes der Maus und legen Sie die Muskelwand frei.
   1. Fettgewebe wird farblich von der Bauchdecke unterschieden: Fettgewebe erscheint blassweiß und liegt oberflächlicher, während die Bauchdecke rosa erscheint und tiefer liegt als das Fettgewebe.
10. Fassen Sie die Bauchdecke mit einer Rattenzahnzange an und machen Sie einen 0,5 cm langen Schnitt hinein.
11. Greife einen Rand dieses Einschnitts mit einer Pinzette, greife mit einem zweiten Paar in die Körperhöhle und finde den Eierstock, das Gebärmutterhorn und das Fettpolster. Ziehen Sie diese vorsichtig durch den Einschnitt in der Muskelwand, um den Muskel vom darunter liegenden Gewebe zu trennen und nach außen zu drücken. Lokalisieren Sie den Übergang zwischen dem Gebärmutterhorn und dem Eierstock.
12. Durchtrennen Sie den Eierstock, indem Sie eine Quetsch- und Reißtechnik durchführen.
    1. Platzieren Sie eine Klemme am distalen Ende des Gebärmutterhorns und platzieren Sie die zweite Klemme direkt distal zur ersten. Üben Sie mit beiden Klemmen festen Druck aus und bewegen Sie die weiter entfernte vom Körper weg, wodurch die Verbindung zwischen ihnen abgerissen wird. Um Blutungen und Gewebeschäden zu minimieren, halten Sie die proximale Klemme während dieses Vorgangs stationär und achten Sie darauf, sie nicht auch noch vom Körper wegzuziehen.
    2. Alternativ können Sie auch einen Kauter verwenden. Verwenden Sie eine Pinzette oder ein Hämostat, um das Gebärmutterhorn genau proximal zum gewünschten Kauterpunkt zu klemmen. Verwende ein Kauterwerkzeug, um das Gewebe zu durchtrennen.
13. Lösen Sie vorsichtig und langsam die proximale Klemme und prüfen Sie, ob es Anzeichen von Blutungen gibt.
14. Lassen Sie den Gewebestumpf sich in die Körperhöhle zurückziehen. Greife die Bauchdecke und ziehe sie sanft nach oben. Drücken Sie den Gewebestumpf nicht nach innen, da dies die Wahrscheinlichkeit von Blutungen erhöht.
15. Lokalisieren Sie die Ränder des Einschnitts in der Muskelwand und bringen Sie sie zusammen, um die Naht vorzubereiten.
16. Legen Sie 1-2 einzelne unterbrochene Nähte mit 4-0 resorbierbarem Nahtmaterial in die Bauchmuskelwand. Kürzen Sie die Nahtenden mit einer Nahtschere auf 0,5 cm.
17. Schließen Sie den Einschnitt, indem Sie die Haut in ihren natürlichen Ruhezustand zurückkehren lassen und ihn dann nach oben klappen, wobei Sie darauf achten müssen, dass Sie nicht das darunter liegende Gewebe oder die Enden des Nahtmaterials greifen. Platzieren Sie 1-2 Wundklammern auf der umgestülpten Haut. Basierend auf Ihren institutionellen Richtlinien kann die Haut auch mit 4-0 nicht resorbierbarem Nahtmaterial verschlossen werden.
18. Um den anderen Eierstock zu entfernen, ändern Sie die Position der Maus so, dass die andere seitliche Seite nach oben zeigt. Seien Sie vorsichtig, wenn Sie die Position der Maus wechseln, um nicht zu viel Druck auf die abgeklippte Haut aus Schritt 2.17 auszuüben.
19. Wiederholen Sie auf dieser Seite die Schritte 2.5 - 2.17.
20. Reinigen Sie die Haut um die Operationsstelle herum vorsichtig mit Kochsalzlösung und einem sterilisierten Applikator mit Wattespitze, um getrocknetes Blut oder antiseptisches Peeling zu entfernen.

3. Nachsorge

1. Verabreichen Sie gemäß den Richtlinien Ihrer Institution bis zu 72 Stunden nach der Operation Schmerzmittel. Dokumentieren Sie den chirurgischen Eingriff der Tiere und notieren Sie das Datum, die Uhrzeit, das verwendete Anästhetikum und das verwendete Analgetikum. Hier werden Buprenorphin mit langsamer Freisetzung und Meloxicam präoperativ verabreicht.
2. Nach Abschluss der Operation werden die Tiere in einen sauberen Käfig gebracht, der mit einem trockenen Papiertuch ausgelegt ist. Stellen Sie diesen Käfig zu 2/3 auf eine Wärmequelle und lassen Sie die anderen 1/3 des Käfigs von der Hitze aus. Setzen Sie Mäuse nicht zusammen in einen Käfig, bis sie sich von der Narkose erholt haben.
3. Erlaube dem Tier, sich wieder frei im Käfig zu bewegen, bevor du es wieder in einen sauberen Käfig mit normaler Einstreu setzt. Zu diesem Zeitpunkt können Mäuse zusammen untergebracht werden, wenn sich alle von der Narkose erholt haben.
4. Stellen Sie in den ersten Tagen nach der Operation sicher, dass feuchte Nahrung und Wasser leicht zugänglich sind. Lege etwas angefeuchtetes Futter auf den Boden des Käfigs. Kontrollieren Sie regelmäßig die Operationsstelle der Maus und suchen Sie nach Anzeichen von Infektionen oder Blutungen.
5. Stellen Sie nach der Operation sicher, dass die Mäuse entweder allein oder mit anderen Tieren untergebracht werden, die sich gleichzeitig dem gleichen Eingriff unterzogen haben. Eine Maus, die sich von einer Operation erholt und sich im selben Käfig wie eine Maus ohne Operation befindet, kann eine Gefahr darstellen und sollte vermieden werden.
6. Bei Mäusen, die sich einer Ovariektomie unterzogen haben und Wundklammern an den dorsolateralen Seiten des Rückens haben, entfernen Sie alle Nagetier-Iglu-Habitate aus dem Käfig, um die Wahrscheinlichkeit zu verringern, dass sich die Wundklammer der Maus in der ersten Woche der Heilung am Iglu verfängt.
7. Überwachen Sie das Tier alle 12 Stunden während der ersten 72 Stunden der Heilungszeit auf Anzeichen von Infektionen, Schmerzen oder chirurgischen Komplikationen.
8. Entfernen Sie die Wundklammern 10-14 Tage nach der Operation mit einem Wundclip-Entferner.

Ergebnisse

Das hier vorgestellte Verfahren wird an ein bis drei Monate alten Mäusen im C57BL/6J-Hintergrund durchgeführt. Männliche Mäuse wogen zum Zeitpunkt des Eingriffs 16-28 g und weibliche Mäuse 14-24 g. Dieses Verfahren wurde so optimiert, dass es für Mäuse unterschiedlichen Alters von der Entwöhnung bis zum Erwachsenenalter anwendbar ist.

Bei der chirurgischen Orchiektomie wird ein einzelner Hautschnitt im ventralen Hodensack durchgeführt, wie in Abbildung 1A...

Diskussion

Die chirurgische Entfernung von Hoden und Eierstöcken ermöglicht es, die Physiologie von Mäusen unter kontrolliertem Hormonentzug zu untersuchen. Diese Technik ist für viele Bereiche der Wissenschaft wichtig, darunter Neurodegeneration, Mineralstoffwechsel, Herz-Kreislauf und reproduktive Gesundheit 15,16,17,18,19,20,21.<...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
1mL Syringe	BD	309659
30G 1/2" Needle	BD	305106
AutoClip System	Fine Science Tools	12020-00
Betadine Solution	Fisher Scientific	NC0158124
Cotton-Tipped Applicators	Fisher Scientific	10-000-692
Double -ended Micro Spatula	Fine Science Tools	10091-12
Galilean Loupes	Fine Science Tools	28050-30	Optional, can provide better clarity during procedure
Gauze Sponges, 4"x4"	Fisher Scientific	13-761-52
Graefe Forceps	Fine Science Tools	11150-10
High Temp Cautery Kit	Fine Science Tools	18010-00	Using the fine tip attachment
Needle Holders	Fine Science Tools	12001-13
PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN	Covetrus	29242	4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best
Rodent Warming pad	Kent Scientific	RT-0515
Sterile Alcohol Prep Pads	Fisher Scientific	22-363-750
Straight Locking Micro Needle Holders	Fine Science Tools	12060-01
Surgical Scissors	Fine Science Tools	140-60-09
Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge	Fine Science Tools	15000-08
Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream	Amazon	N/A
Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue	Amazon	#9861-900