Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder R01 HD050901 a MCM e bolsa de estudos da American Cancer Society de pós-doutorado # PF-05-041-01-DDC para TG.

<ol><li> Um peixe-zebra macho será dissecado em primeiro lugar, seguido por um peixe fêmea. Antes de iniciar a dissecação, anestesiar um peixe na tricaina 0,2% e depois sacrificá-lo por incubação em água gelada por 15 minutos. </li><li> Comece acariciando levemente o peixe seco numa toalha de papel e colocá-lo em uma esteira de dissecação. Externamente, peixe-zebra tem única dorsal, nadadeiras caudais e anal e emparelhado barbatanas peitorais e pélvicas (Figura 1). <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Peixes machos adultos com barbatanas rotulados. </li><li> Pin o peixe para o tapete dissecando através da parte carnuda da cauda e na parte ventral da cavidade ocular. </li><li> Snip a pele na barriga do peixe só anterior à barbatana anal. Cortar a pele eo músculo subjacente ao longo da barriga da nadadeira anal à opérculo (o revestimento rígido sobre o gill) (Figura 2, etapa 1). <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Passos na remoção de pele e músculos da parede do corpo para expor os órgãos internos. </li><li> Em seguida, retire o opérculo ea barbatana peitoral, incluindo a cintura peitoral (na região, de espessura óssea na base da nadadeira) (Figura 2, etapa 2). Cortar a pele e músculo subjacente início de cima do agora exposto gill posteriormente ao longo do lado do peixe e, em seguida, até o fin anal (Figura 2, etapa 3). </li><li> Remova cuidadosamente a pele eo músculo subjacente do lado do peixe. Muitos dos órgãos internos são agora visíveis (Figura 3). <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Peixes machos adultos com parede do corpo e do músculo removido permitindo a visualização dos órgãos internos. </li><li> Os testículos são longas, brancas, órgãos pares que estão ligados à parede do corpo dorsal. Remover um testículo e coloque-o em um prato de PBS. Examinar os testículos com a luz refletida para visualizar os túbulos seminíferos (Figura 4), que contêm cistos com vários estágios de células germinativas em desenvolvimento de spermatagonia para espermátides (Leal et al., 2009). <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4. Dissecação de um testículo. As estruturas brancas arredondadas são os túbulos seminíferos. </li><li> Em seguida, remova o sistema gastrointestinal da cavidade do corpo do peixe. O fígado pode ser identificado pelo seu grande tamanho, morfologia lobed, cor tannish e vascularização extensiva. A vesícula biliar, um verde saco cheio de líquido translúcido, eo baço, que aparece vermelho brilhante, são encontrados dentro das vísceras. </li><li> Separar os intestinos do resto dos órgãos e esticá-la. O anterior, as regiões média e posterior do intestino são definidos pela altura das pregas epiteliais (Wallace et al., 2005). </li><li> Coloque um pedaço do intestino em PBS e observar as dobras epiteliais usando luz transmitida. </li><li> Em seguida, examine a bexiga natatória. A bexiga natatória consiste em uma câmara posterior, que é ligado ao esôfago através do ducto pneumático, e uma câmara anterior, que é conectado ao ouvido interno através do aparelho weberiano (Finney et al., 2006). </li><li> Remova e descarte a bexiga natatória. Unpin os peixes e re-pin lado ventral que até dissecar o rim, que está localizado ao longo da parede do corpo dorsal. O rim é uma estrutura translúcida rosa associados com a aorta dorsal e as células pigmentadas. O rim é dividido em cabeça, corpo e cauda regiões (Figura 5). Dissecar um pedaço do rim e colocá-lo em PBS. Separar os tecido renal para revelar os túbulos renais. <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5. Localização de cabeça, corpo e cauda renal ao longo da parede do corpo dorsal. </li><li> Dissecar um peixe fêmea. Como descrito anteriormente, euthanize o peixe em água gelada e seque antes fixando-o para o tapete de dissecação. Retire a pele do lado do peixe como se demonstrou anteriormente. O ovário é uma estrutura bilobado que é suspenso na cavidade do corpo por um mesovário vascularizada. </li><li> Remover um lobo do ovário, colocá-lo em PBS, e examiná-lo com luz transmitida. Os ovócitos podem ser separadas usando agulhas finas e depois encenado (Figura 6, Selman et al., 1993). Estágio I oócitos são aproximadamente 10 - 150 microns em tamanho e translúcido. Oócitos fase II são cerca de 150 - 350 microns em tamanho e definido pelo aparecimento de grânulos corticais. Oócitos fase III são 350-750 microns em tamanho e são opacas devido ao acúmulo de vitelo. Oócitos estágio maduro IV e V são translúcidas e geralmente não encontrados nos ovários de fêmeas que recentemente acoplado. <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig6.jpg" alt="Figura 6" /> Figura 6. Palco ao vivo I, II, III e oócitos observado sob umdissecando microscópio com luz transmitida. </li><li> Em seguida, dissecar o coração do peixe. O coração está localizado posterior e ventral à brânquia. Comece por cortar o coração e todo o tecido circundante e colocando-o em PBS. Dissecar cuidadosamente afastado o tecido que envolve o coração, tomando cuidado para não danificar o átrio delicado. </li><li> Coloque o coração dissecado em solução de Ringer para observar o batimento cardíaco. Identificar o átrio, ventrículo e bulbo arterial (Figura 7, Hu et al., 2001). <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig7.jpg" alt="Figura 7" /> Figura 7. Dissecada coração adulto. </li><li> Completar a dissecção, removendo o cérebro do peixe. Comece por Unpinning o peixe e retirar a cabeça com uma lâmina de barbear. Remover o tecido mole tanto quanto possível, a partir do lado ventral do crânio, com fórceps. Remove os olhos com uma tesoura pequena mola. Ruptura de abrir o crânio e remover o osso do lado ventral do cérebro. Agora coloque a cabeça em um prato de PBS e remover os ossos do crânio e da pele do lado dorsal do cérebro. </li><li> Identificar os bulbos olfativos, telencéfalo, habenula, tectum óptico, cerebelo e medula (Figura 8, Wullimann et al, 1996;. Schilling, 2002). <img src="/files/ftp_upload/1717/1717fig8.jpg" alt="Figura 8" /> Figura 8. Cérebro zebrafish Dissecada adulto. Vista dorsal, anterior ao topo. </li></ol>

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	<li>Finney, J. L., Robertson, G. N., McGee, C. A., Smith, F. M., Croll, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+Autonomic+Innervation+of+the+Swim+Bladder+in+the+Zebrafish+(Danio+rerio).">Structure and Autonomic Innervation of the Swim Bladder in the Zebrafish (Danio rerio).</a> J Comp Neurol. 495, 587-606 (2006).</li><li>Hu, N., Yost, H. J., Clark, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+morphology+and+blood+pressure+in+the+adult+zebrafish.">Cardiac morphology and blood pressure in the adult zebrafish.</a> Anat Rec. 264, 1-12 (2001).</li><li>Leal, M. C., Cardoso, E. R., N&#243;brega, R. H., Batlouni, S. R., Bogerd, J., Fran&#231;a, L. R., Schulz, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+and+stereological+evaluation+of+zebrafish+(Danio+rerio)+spermatogenesis+with+an+emphasis+on+spermatogonial+generations.">Histological and stereological evaluation of zebrafish (Danio rerio) spermatogenesis with an emphasis on spermatogonial generations.</a> Biol Reprod. 81, 177-187 (2009).</li><li>Schilling, T. F., Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphology+of+larval+and+adult+zebrafish.">The morphology of larval and adult zebrafish.</a> Zebrafish: A Practical Approach (The Practical Approach Series). , (2002).</li><li>Selman, K., Wallace, R., Sarka, A., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+oocyte+development+in+the+Zebrafish,+Brachydanio+rerio.">Stages of oocyte development in the Zebrafish, Brachydanio rerio.</a> J. Morphol. 218, 203-224 (1993).</li><li>Wallace, K. N., Akhter, S., Smith, E. M., Lorent, K., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+growth+and+differentiation+in+zebrafish.">Intestinal growth and differentiation in zebrafish.</a> Mech Dev. 122, 157-173 (2005).</li><li>Wullimann, M. F., Rupp, B., Reichert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuroanatomy of the zebrafish brain : a topological atlas. , (1996).</li></ol>

Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela University of Pennsylvania Animal Care Institucional e Comitê de uso.

Reagentes: 0,2% tricaina (etílico 3-aminobenzoato) 200 mg tricaina pó 97,9 ml de água DD ~ 1 ml 1 M Tris (pH 9) Ajustar o pH para 7,0 Tampão fosfato salino (PBS) 4,0 g NaCl 0,1 g KCl 100 ml 0,1 M PO 4 tampão, pH 7,3 150 ml dH 2 O Solução de Ringer 6.7g NaCl 0,2 g KCl 0,2 g CaCl 2 Hepes 1.2g 1 LH 2 O Ajustar o pH para 7,2 Equipamento: Prato de dissecação com esteira Microscopia Eletrônica de Ciências catalogo 70540 Vannas Primavera tesoura Multa Ferramentas Ciência catalogo 91500-09

dissection of organs from the adult zebrafish

Nos últimos 20 anos, o peixe-zebra tornou-se um organismo modelo poderoso para a compreensão do desenvolvimento de vertebrados e doença. Embora a análise experimental do embrião e larva é extensa ea morfologia tem sido bem documentada, descrições da anatomia do peixe-zebra adulto e estudos de desenvolvimento das estruturas e órgãos adultos, juntamente com técnicas para trabalhar com adultos estão faltando. Os órgãos da larva sofrer mudanças significativas em sua estrutura geral, morfologia e localização anatômica durante o larval para a transição do adulto. Externamente, a larva transparente desenvolve sua característica adulto padrão pigmentar listrada e emparelhado nadadeiras pélvicas, enquanto internamente, os órgãos submetidos a enorme crescimento e remodelação. Além disso, o primórdio gônadas bipotential desenvolve em ambos os testículos ou ovários. Este protocolo identifica muitos dos órgãos do adulto e demonstra métodos para dissecção do cérebro, gônadas, sistema gastrointestinal, coração e rim de peixe-zebra adulto. Os órgãos dissecados podem ser utilizados para hibridização in situ, imuno-histoquímica, histologia, extração de RNA, análise de proteínas, e outras técnicas moleculares. Este protocolo vai ajudar na ampliação de estudos na zebrafish para incluir a remodelação dos órgãos larval, a morfogênese de órgãos específicos para as investigações adultos e outros sistemas de órgãos do adulto.

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Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Este protocolo descreve um procedimento para identificar e dissecar os órgãos do peixe-zebra adulto.

Dissecção de Órgãos do Zebrafish Adulto

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

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Biology

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