Para começar, limpe o local de trabalho e os materiais com solução de remoção de etanol e RNase a 70%. Prepare recentemente o tampão de lise, o tampão de diluição de lise, o tampão de lise 0,1 x e lave o tampão e mantenha os tampões no gelo. Centrífugas de balde oscilante pré-frio a quatro graus Celsius.
Centrifugar a suspensão da célula progenitora cardíaca em uma centrífuga de balde oscilante. Retire delicadamente todo o sobrenadante sem tocar no fundo do tubo. Adicione 100 microlitros de tampão de lise 0,1 x resfriado à suspensão celular e misture pipetando 10 vezes.
Após cinco minutos de incubação no gelo, adicione um mililitro de tampão de lavagem refrigerado e misture. Após centrifugar a suspensão, retire o sobrenadante e repita mais duas lavagens com tampão de lavagem refrigerado. Preparar o tampão de núcleo diluído.
Depois de ressuspender os núcleos no tampão de núcleos, coloque a solução estoque de núcleos no gelo. Quando a qualidade dos núcleos isolados foi avaliada pela avaliação da morfologia da membrana nuclear, os núcleos isolados mostraram-se lisos e uniformemente redondos sob microscopia de campo claro, indicando um processo de isolamento efetivo.
