Comece ligando o instrumento e selecionando o processo de transdução de células T na interface da tela sensível ao toque. Clique em Executar para iniciar o procedimento e siga as instruções fornecidas na tela. Na tela de entrada do perímetro, insira as iniciais do operador conjunto de tubos, número do lote e data de validade.
Em seguida, selecione o processo completo na tela de configuração do processo. Agora, escolha dois frascos de reagente de seleção para o método de seleção CD4, CD8. Instale o conjunto de tubulação, garantindo que todas as conexões de isca estejam bem ajustadas e conclua os testes de integridade superior e inferior seguindo as instruções na tela sensível ao toque.
Agora, conecte os sacos de amortecimento do meio e do processamento de acordo com a orientação na tela e inicie o escorvamento automático do conjunto de tubos. Quando a tela do produto da célula de transferência aparecer, transfira o produto de célula T descongelado para um saco de transferência de 150 mililitros e solde-o estéril para o saco de aplicação do conjunto de tubos. Em seguida, use uma bolsa de controle de qualidade para obter uma amostra da bolsa de aplicação e realize uma contagem de células usando um analisador hematológico.
Conecte os frascos de reagentes CD4 e CD8 ao conjunto de tubos e inicie o processo de seleção para enriquecimento de células T. Após o enriquecimento, retirar uma amostra das células selecionadas da bolsa de controle de qualidade dos sacos de reaplicação. Insira a concentração de células desejada e o número inicial.
Agora, conecte um frasco do reagente de ativação de acordo com as instruções na tela. Em seguida, ajuste a concentração de dióxido de carbono para 5% e a temperatura da câmara de cultura para 39 graus Celsius. Estabeleça a matriz de atividades usando o protocolo de alimentação aprimorado como ponto de partida e modifique etapas individuais para seu protocolo otimizado específico.
Nesse caso, definir o tempo de atividade de transdução para 24 horas após a semeadura e a lavagem da cultura para 48 horas após a transdução. Defina o tempo de ativação do agitador para começar 30 minutos após iniciar a lavagem da cultura. Exclua todas as atividades de troca de sacos médios e de troca de sacos de lixo, pois eles não são mais necessários.
Em seguida, pressione OK na tela para iniciar o cultivo. Permita que o instrumento bombeie automaticamente o volume necessário do saco de reaplicação para a câmara de cultura. Descongelar e preparar o volume vetorial calculado em um saco reagente de 20 mililitros com um meio frio para atingir um volume final de 10 mililitros.
Ajuste a matriz de atividade para definir o tempo de transdução para dois minutos no futuro e pressione OK para iniciar a atividade de transdução. Solda estéril o saco vetorial no conjunto de tubos seguindo as instruções na tela. Modificar a matriz de atividade de acordo com o tempo real de início da transdução com a lavagem da cultura programada 48 horas após a transdução.
Programe o tempo de ativação do agitador para 30 minutos após a lavagem da cultura. Por fim, garanta que a troca de mídia ocorra no período da tarde, às 14h do sexto dia. Pressione o botão de amostra e siga as instruções na tela para adquirir uma amostra de controle de qualidade da cultura ativa.
Divida a amostra em três alíquotas de um mililitro para várias análises. Prepare o tampão final da formulação, guardando uma porção para a preparação do crioprotetor posteriormente. Em seguida, ajuste a matriz de atividades, definindo o fim da cultura para dois minutos no futuro.
Anexe o tampão de formulação final ao conjunto de tubos e inicie a colheita. Sele e remova o saco de célula alvo. Este saco contém as células T CAR prontas para perfusão ou criopreservação.
RT execuções do ensaio clínico foi de 46%Isso indica que o processo de TCT efetivamente promoveu a expansão celular. A viabilidade celular do produto final foi de 88 a 94% e a pureza das células T CD3 foi de 89 a 93%Endotoxina, micoplasma, esterilidade, lentivírus competente em replicação e células leucêmicas residuais não foram detectáveis.