This work was supported by Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (26461185 and 25460137).

NOTA: Este estudo foi aprovado pelos Comitês de Ética apropriados. 1. cultura primária de pulmão fibroblastos humanos <ol><li> Coleta de tecido pulmonar: <ol><li> Obter amostras de tecido pulmonar humanos da sala de operação cirúrgica diretamente. Recolha cerca de 1 cm a 3 quarteirões do tecido pulmonar cancerosos e não cancerosos, com a amostra não-cancerosas recolhido o mais longe possível do tumor. </li><li> Suspender as amostras em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 100 unidades / ml de penicilina, 100 ug / ml de estreptomicina e 0,25 ng / mL de anfotericina B (meio isento de soro). Manter as amostras em suspensão na estéreis tubos de 50 ml e transferir para o laboratório. NOTA: Os fibroblastos são altamente migratório e proliferativo em comparação com outros tipos de células, tais como epiteliais, células endoteliais e do músculo liso. O método excrescência aproveita esses recursos de fibroblastos, e outgrocélulas asa de cortes de tecido são abundantes em fibroblastos. Depois de várias passagens de células, outros tipos de células não conseguem sobreviver e propagar em DMEM com 10% de soro fetal bovino (FBS), resultando em culturas de células de fibroblastos purificadas. As células podem ser usadas 3-7 passagens seguintes cultura primária. </li></ol></li><li> Cultura explante e condicionado para crescimento celular: <ol><li> Execute cultura primária de fibroblastos, utilizando um protocolo previamente notificados com modificações 5. </li><li> No laboratório, colocar a amostra de tecido em 10 cm de prato de cultura de tecidos sem meio de cultura e cortado em pequenos troços ~ 2-3 mm de tamanho usando fórceps esterilizados e bisturi. Durante este processo, evitar que a secção seca, de outro modo a eficiência da excrescência da célula é prejudicado. </li></ol></li><li> A separação da camada de células epiteliais e do tecido conjuntivo: <ol><li> Embeber as secções de tecido cortado em meio de cultura contendo 2,000 PU / ml de dispase I e cultura durante 16 horas a 4 ° C. &lt;/ Li&gt; <li> Transferem-se as secções de tecido para um prato, e separar a camada de células epiteliais do tecido conjuntivo adjacente. Processe as seções em uma bancada limpa para evitar a contaminação de microorganismos. NOTA: Se for necessário a cultura primária de células epiteliais, executar o passo 1.3. Se apenas os fibroblastos estão a ser isolado, omitir o passo 1.3 porque a cultura explante e celulares passagens subsequentes são desfavoráveis ​​para as células epiteliais, que produzem populações de fibroblastos purificados. </li></ol></li><li> Penhora de cortes de tecido: <ol><li> Picar os tecidos em um milímetro pedaços usando dois bisturis. Se as peças não são suficientemente pequenas, elas retirar mais facilmente a partir da placa, e as células irão falhar a ultrapassar na superfície do prato. </li><li> Coloque pequenas secções de tecido pulmonar afastados um do outro para manter um espaço vazio em torno de cada peça. Adicione arranhões na superfície do prato de cultura de tecido usando uma lâmina de bisturi para facilitar a ligação de secções de tecido. NOTA: CoçarTambém parece facilitar a excrescência de células, proporcionando faixas ao longo do qual as células podem migrar. <ol><li> Em alternativa, colocar as peças de tecidos picados, individualmente, em cada poço de uma placa de 6 poços, e cobri-los com uma lamela de cobertura. Fixe a tampa de deslizamento para a superfície da placa usando graxa de silicone. </li><li> Coloque graxa de silicone em dois pontos 1.5 cm de distância em cada poço, utilizando um pino estéril. Cobertura de pedaços de tecido aumenta a eficácia do crescimento de células e propagação de células após diversas passagens. </li></ol></li></ol></li><li> Subsequente cultura explante: <ol><li> Adicionar cuidadosamente meio de cultura para o prato antes de as secções de tecido de secar, como crescimento celular eficaz é perdido para a maior parte, se as amostras secarem. Não despeje o meio muito rapidamente como as secções de tecido seria separar. </li><li> Células de cultura em DMEM com 10% de FBS. Use médio suficiente apenas para cobrir o tecido, mas não muito que ele permite flutuante, como flutuabilidade adicional promove a separação doprato. </li></ol></li><li> Passagem Cell: <ol><li> Lidar com o meio de cultura com cuidado em todos os momentos como movimentos repetidos da placa de cultura pode levar ao descolamento dos cortes de tecido. </li><li> Colocar as placas de cultura numa incubadora a 37 ° C durante 5-7 dias. Atualizar o meio todos os dias, e lidar com as placas de cultura minimamente durante as médias alterações. Os fibroblastos superar a partir da borda das secções de tecido ao longo das próximas semanas. NOTA: ~ Após 2-3 semanas, os fibroblastos superando quase atingem confluência, dependendo da quantidade de área de superfície. </li><li> Lavar as células com PBS 1x, e adicionar 1 ml de tripsina I do prato. </li><li> Após tripsinização, separar as células utilizando 9 ml de DMEM suplementado com FBS a 10%. Recolher as células em suspensão no meio de um tubo de 10 ml, juntamente com as secções de tecido. A seguir à centrifugação para formar sedimentos celulares, ressuspender as peletes resultantes em meio novo. </li><li> Semente as células e os cortes de tecido para um novo culture prato, altura em que os tecidos não conseguem anexar ao prato, enquanto as células aderir e crescer. No dia seguinte, retire os pedaços de tecido flutuantes por aspiração, e mudar o meio. Fibroblastos anexados propagar com culturas subsequentes. </li></ol></li></ol> 2. tridimensional Co-cultura de fibroblastos humanos pulmão e células cancerosas <ol><li> Preparação de células e reagentes: <ol><li> Aproximadamente usar 2 x 10 5 células epiteliais e 2,5 x 10 5 fibroblastos por poço. Prepare o colagénio tipo IA (3 mg / ml, pH 3), FBS (100%), tampão de reconstituição (NaOH 50 mM, 260 mM de NaHCO3, 200 mM de HEPES), 5x de DMEM, meio DMEM suplementado com FBS a 10% para a cultura de fibroblastos, e um meio de co-cultura em 3D (uma mistura 1: 1 de meio de cultura de fibroblastos e meio de cultura para as células cancerosas). </li><li> Células de adenocarcinoma do pulmão A549, a cultura, os fibroblastos e a co-cultura 3D A549 em DMEM suplementado com FBS a 10%. </li></ol></li><li> O colagénio em gel de formação: <ol><li> Lavar fibroblastos em cultura em placa de 10 cm com 1x PBS, e adicionar 1 ml de tripsina I do prato. Após tripsinização durante ~ 5 min a 37 ° C, separar as células utilizando 9 mL de DMEM suplementado com FBS a 10%. Recolher as células em suspensão no meio num tubo de 10 ml e centrifugar para a 200-300 xg para formar sedimentos celulares. </li><li> Ressuspender as peletes resultantes em 100% de FBS a uma densidade de 5 x 10 5 / ml. </li><li> Prepare o gel de colagénio em gelo. Arrefecer os reagentes, pipetas e tubos no frigorífico antes do procedimento seguinte. Mesmo em gelo, a mistura solidifica, em certa medida, e o volume total é menor do que a soma de todos os constituintes. </li><li> Em cada poço, preparar o gel de colagénio por mistura de 0,5 ml de suspensão de fibroblastos (2,5 x 10 5 células) em FBS, 2,3 ml de colagénio do tipo IA, 670 ul de DMEM 5x, e 330 ul de tampão de reconstituição. Permitir que os geles para definir facilmente à temperatura ambiente. <ol><li> Vigorosamente pipeta de modo que a mi homogéneaxture. Evite a criação de bolhas durante o processo de pipetagem. </li></ol></li><li> Adicionar a mistura de (3 ml) a cada poço de uma placa de 6 poços e deixa-se gelatinizar na incubadora a 37 ° C, sem perturbação durante 30-60 min. </li></ol></li><li> Cultura de células do cancro no gel de colagénio: <ol><li> Execute co-cultura tridimensional usando um protocolo previamente notificados com modificações 6. </li><li> Ressuspender as células cancerosas em meio de co-cultura em 3D (ou em DMEM com FBS a 10%, no caso de células A549) a uma densidade de 1 x 10 5 / ml. </li><li> Pour 2 ml da solução de células ressuspenso (2 x 10 5 células) sobre a superfície de cada gel. Modifique o número de células de células cancerosas ou fibroblastos em co-cultura, dependendo das condições experimentais. </li></ol></li><li> Contração gel: <ol><li> Incubar géis noite a 37 ° C de modo que as células cancerosas podem aderir ao gel de colagénio. Separe cada gel, e gerar uma &quot;cultura flutuante &#39;em cada poço of a placa de 6 poços. NOTA: Ao utilizar uma cultura flutuante, várias modificações no tamanho de gel são induzidas por tensão mecânica e degradação do colagénio, que são mediados por interacção celular entre as células cancerosas e fibroblastos co-cultivadas. </li><li> Utilize uma agulha G 21 angular ou pequena espátula para separar cada um gel a partir do bordo do poço. A cada 2-3 dias, atualizar os poços com 2 ml de meio 3D co-cultura. Medir o tamanho de cada gel todos os dias durante 5 dias. </li></ol></li><li> Análise de géis de colagénio: <ol><li> Meça o conteúdo de colágeno de cada gel, utilizando métodos de quantificação de colágeno, tais como o ensaio Sircol. Realizar análise do transcriptoma ou RT-PCR quantitativo após a recolha de RNA a partir dos géis 5. </li></ol></li></ol> Cultura da Interface e Invasion Ensaio 3. Air-líquido <ol><li> Após cultura das géis de colagénio a 37 ° C durante 5 dias, expor os géis contraídos para o ar, colocando-os sobre uma malha (70 de tamanho de poro) no novo 6-placas de poços. Faça a malha a partir de filtros celulares disponíveis comercialmente usados ​​para citometria de fluxo. </li><li> Suavemente encher cada poço com 11 ml de 3D meio de co-cultura. </li><li> Posicionar os géis para a malha usando uma colher esterilizada, e remover qualquer meio remanescente dos géis. Nesta condição, submergir em geles a forma enquanto expor a superfície superior do gel de ar. Definir essa condição cultura como interface de ar líquido. NOTA: Depois de 5-7 dias de manutenção da cultura de interface ar-líquido, a 37 ° C na incubadora, as células cancerosas invasivas migrar para dentro do gel. Dependendo do tipo de célula e, como resultado de interacções celulares, graus variáveis ​​de alterações morfológicas em células, as células cancerosas são induzidas pela cultura de interface ar-líquido. </li><li> Para a avaliação histológica, fixar o gel em formol durante a noite a temperatura ambiente e incorporar em parafina. Mancha seções verticais (4 mm) com HE (H &amp; E). Realizar análise imuno-histoquímica on as seções 4. </li></ol>

<ol>
	<li>Strell, C., Rundqvist, H., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts-a+key+host+cell+type+in+tumor+initiation,+progression,+and+metastasis.">Fibroblasts-a key host cell type in tumor initiation, progression, and metastasis.</a> Ups. J. Med. Sci. 117 (2), 187-195 (2012).</li><li>Augsten, M., H&#228;ggl&#246;f, C., Pe&#241;a, C., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+digest+on+the+role+of+the+tumor+microenvironment+in+gastrointestinal+cancers.">A digest on the role of the tumor microenvironment in gastrointestinal cancers.</a> Cancer Microenviron. 3 (1), 167-176 (2010).</li><li>Augsten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-Associated+Fibroblasts+as+Another+Polarized+Cell+Type+of+the+Tumor+Microenvironment.">Cancer-Associated Fibroblasts as Another Polarized Cell Type of the Tumor Microenvironment.</a> Front. 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Res. 89 (11), 1315-1321 (2010).</li><li>Ikebe, D., Wang, B., Suzuki, H., Kato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+keratinocyte+stratification+by+a+dominant+negative+JunB+mutant+without+blocking+cell+proliferation.">Suppression of keratinocyte stratification by a dominant negative JunB mutant without blocking cell proliferation.</a> Genes Cells. 12 (2), 197-207 (2007).</li><li>Orimo, A., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+in+cancer:+a+novel+tumor-promoting+cell+type.">Stromal fibroblasts in cancer: a novel tumor-promoting cell type.</a> Cell Cycle. 5 (15), 1597-1601 (2006).</li><li>Paulsson, J., Micke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+relevance+of+cancer-associated+fibroblasts+in+human+cancer.">Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer.</a> Semin. Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).</li><li>Navab, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+gene-expression+signature+of+carcinoma-associated+fibroblasts+in+non-small+cell+lung+cancer.">Prognostic gene-expression signature of carcinoma-associated fibroblasts in non-small cell lung cancer.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108 (17), 7160-7165 (2011).</li><li>Herrera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+heterogeneity+of+cancer-associated+fibroblasts+from+human+colon+tumors+shows+specific+prognostic+gene+expression+signature.">Functional heterogeneity of cancer-associated fibroblasts from human colon tumors shows specific prognostic gene expression signature.</a> Clin. Cancer Res. 19 (21), 5914-5926 (2013).</li><li>H&#228;ggl&#246;f, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+PDGFRbeta+expression+in+prostate+tumors+and+non-malignant+prostate+tissue+predicts+prostate+cancer+survival.">Stromal PDGFRbeta expression in prostate tumors and non-malignant prostate tissue predicts prostate cancer survival.</a> PLoS One. 5 (5), e10747 (2010).</li><li>Saito, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forkhead+box+F1+regulates+tumor-promoting+properties+of+cancer-associated+fibroblasts+in+lung+cancer.">Forkhead box F1 regulates tumor-promoting properties of cancer-associated fibroblasts in lung cancer.</a> Cancer Res. 70 (7), 2644-2654 (2010).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 6 (5), 392-401 (2006).</li><li>Calvo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+and+YAP-dependent+matrix+remodelling+is+required+for+the+generation+and+maintenance+of+cancer-associated+fibroblasts.">Mechanotransduction and YAP-dependent matrix remodelling is required for the generation and maintenance of cancer-associated fibroblasts.</a> Nat. Cell Biol. 15 (6), 637-646 (2013).</li><li>Horie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histamine+induces+human+lung+fibroblast-mediated+collagen+gel+contraction+via+histamine+H1+receptor.">Histamine induces human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction via histamine H1 receptor.</a> Exp. Lung Res. 40 (5), 222-236 (2014).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

FAC formam um dos principais componentes da MEC células cancerosas e não apenas fornecer um andaime para o tumor, mas também participar activamente no desenvolvimento do tumor 7. As evidências acumuladas desvenda o impacto da FAC ou suas moléculas relacionadas à eventual prognóstico, com destaque para os papéis críticos de progressão do tumor CAF mediada 8. No estudo anterior, foram empregados método consequência de isolar FAC pulmonares 4. Nesta ...

Cancer tissue can be perceived as a type of organ, which evolves through close interactions between the cancer and the tumor stromal microenvironment, composed of cancer-associated fibroblasts (CAFs), immune cells, tumor vessels and the extracellular matrix (ECM). CAFs are the major source of soluble factors (cytokines, growth factors and chemokines) that exert mitogenic, pro-migratory and pro-invasive effects on cancer cells. They also stimulate tumor vessel formation and recruit precursor cells, such as bone marrow-derived cells (BMDC). Activated CAFs are involved in the production and remodeling of the ECM, thereby promoting the growth and spread of cancer cells1. CAFs also provide a niche that facilitates tumor cell colonization and metastasis and are capable of conferring stem cell phenotypes onto neighboring cancer cells. Pathological observations suggest that stromal reactions or fibrotic changes in cancer tissues are indicative of a poor prognosis. Recent studies have also demonstrated that tumor stromal features, such as the gene signature, can predict patient prognosis. Furthermore, CAF-derived factors can modulate sensitivity to chemotherapy, highlighting the role of CAFs in determining drug sensitivity and resistance2.
As CAFs play a multifaceted role in the promotion of tumor progression through signaling pathways that mediate interactions between CAFs and different cell types within the tumor microenvironment, they have attracted increasing attention as novel targets for cancer therapies. The heterogeneity of the cell populations within the cancer microenvironment presents an obstacle for targeting CAFs. Several markers for CAFs have been proposed, such as &#945;-smooth muscle actin (&#945;-SMA), fibroblast activation protein (FAP), and fibroblast specific proten-1 (FSP-1: also called S100A4); however, these molecular markers are not specific for distinguishing CAFs from other cells present in non-cancerous tissues3. Therefore, further studies are needed to obtain more knowledge about the specific properties of CAFs. To this end, it is informative to characterize primary cultured CAFs compared with patient-matched normal fibroblasts.
Recently, analyses on patient-derived CAFs have been reported in several cancer types, revealing unique gene expression patterns and cell behaviors compared with fibroblasts derived from non-cancerous tissues. Using isolated CAFs from human lung cancer tissues, we developed a three-dimensional co-culture method, enabling us to evaluate the properties of lung CAFs. In this model, we investigated the effects of the CAFs on lung cancer cell invasion, proliferation and collagen gel contraction, which experimentally recapitulated the tumor-promoting roles of lung CAFs4.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1035">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:267px;">Name</td>
			<td style="width:297px;">Company</td>
			<td style="width:471px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">DMEM</td>
			<td style="width:297px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:471px;">D5796</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">FBS</td>
			<td style="width:297px;">GIBCO</td>
			<td style="width:471px;">10437</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Collagen type IA</td>
			<td style="width:297px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td style="width:471px;">CELL-1A</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Reconstitution buffer</td>
			<td style="width:297px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td style="width:471px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cover slip</td>
			<td style="width:297px;">NUNC</td>
			<td style="width:471px;">174934</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Silicone grease</td>
			<td style="width:297px;">Dow Corning Toray</td>
			<td style="width:471px;">High vacuum grease</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Dispase I</td>
			<td style="width:297px;">WAKO</td>
			<td style="width:471px;">386-02271</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">6-well plate</td>
			<td style="width:297px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:471px;">353046</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cell strainer (70 &#956;m)</td>
			<td style="width:297px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:471px;">352350</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional co-culture model for tumor-stromal interaction

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal cells. The tumor microenvironment is comprised of a variety of cell types, such as fibroblasts, immune cells, vascular endothelial cells, pericytes and bone-marrow-derived cells, embedded in the extracellular matrix (ECM). Cancer-associated fibroblasts (CAFs) have a pro-tumorigenic role through the secretion of soluble factors, angiogenesis and ECM remodeling. The experimental models for cancer cell survival, proliferation, migration, and invasion have mostly relied on two-dimensional monocellular and monolayer tissue cultures or Boyden chamber assays. However, these experiments do not precisely reflect the physiological or pathological conditions in a diseased organ. To gain a better understanding of tumor stromal or tumor matrix interactions, multicellular and three-dimensional cultures provide more powerful tools for investigating intercellular communication and ECM-dependent modulation of cancer cell behavior. As a platform for this type of study, we present an experimental model in which cancer cells are cultured on collagen gels embedded with primary cultures of CAFs.

Este método de co-cultura, imitando o microambiente tumoral, é uma ferramenta útil para pesquisar as interacções entre as células cancerosas e fibroblastos embebidos no gel de colagénio. No estudo anterior, os três parâmetros foram avaliados neste modelo experimental: contração gel de colágeno, a invasão das células do câncer e alteração morfológica. Proliferação de células cancerosas também foi estimado usando Ki67 immunostaining 4. Amostras de tecido pulmonar foram colhidos a partir de...

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Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.

Tridimensional modelo de co-cultura para Interaction Tumor estromal-

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

three-dimensional-co-culture-model-for-tumor-stromal-interaction

Research

JoVE Journal

Medicine

17.2K visualizações.  The University of Tokyo. Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.