This work was supported by Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (26461185 and 25460137).

HINWEIS: Diese Studie wurde von den zuständigen Ethikkommissionen genehmigt. 1. Primär Kultur der menschliche Lungen-Fibroblasten <ol><li> Sammlung von Lungengewebe: <ol><li> Erhalten menschlichen Lungengewebeproben aus dem Operationsraum unmittelbar. Sammeln Sie ca. 1 cm 3 Blocks von krebsartigen und nicht krebsartigen Lungengewebe, die nicht krebsartigen Probe so weit weg von den Tumor wie möglich gesammelt. </li><li> Aussetzung der Proben in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit 100 Einheiten / ml Penicillin, 100 ug / ml Streptomycin und 0,25 ug / ml Amphotericin B (serumfreies Medium) ergänzt. Pflegen Sie die suspendierten Proben in sterilen 50-ml-Röhrchen und übertragen an das Labor. HINWEIS: Die Fibroblasten sind hoch Migration und Proliferation im Vergleich zu anderen Zelltypen, wie Epithelzellen, Endothelzellen und glatten Muskelzellen. Der Auswuchs Verfahren nutzt diese Features von Fibroblasten und outgroFlügelzellen aus Gewebeschnitten sind reichlich in Fibroblasten. Nach mehreren Zellpassagen anderen Zelltypen nicht zu überleben und vermehren sich in DMEM mit 10% fötalem Rinderserum (FBS), wodurch gereinigte Fibroblasten-Zellkulturen. Die Zellen könnten 3-7 Passagen folgenden Primärkultur verwendet werden. </li></ol></li><li> Explantatkultur und Anlage für Zell Auswuchs: <ol><li> Führen Primärkultur von Fibroblasten mit einem zuvor berichtet Protokoll mit Modifikationen 5. </li><li> Im Labor, legen Sie die Gewebeprobe auf einer 10 cm Gewebekulturschale ohne Kulturmedium und in kleine Stücke geschnitten ~ 2-3 mm Größe mit einer sterilen Pinzette und Skalpell. Dabei verhindern, dass die trockenen Abschnitt, da sonst die Wirksamkeit der Zellauswuchs beeinträchtigt wird. </li></ol></li><li> Trennung der epithelialen Zellschicht und Bindegewebe: <ol><li> Tränken der geschnittenen Gewebeabschnitte in Kulturmedium, das 2000 PU / ml Dispase I und die Kultur für 16 Stunden bei 4 ° C. &lt;/ Li&gt; <li> Übertragen Sie die Gewebeschnitte in eine Schale, und trennen Sie die Epithelzellschicht vom benachbarten Bindegewebe. Verarbeiten Sie die Abschnitte in einer Sterilbank, um eine Kontamination von Mikroorganismen zu vermeiden. HINWEIS: Wenn der Primärkultur von Epithelzellen ist erforderlich, führen Sie Schritt 1.3. Wenn nur Fibroblasten isoliert werden sollen, lassen Sie Schritt 1.3, da die nachfolgenden Explantatkultur und Zellpassagen ungünstig für Epithelzellen, die gereinigte Fibroblasten-Populationen zu erhalten sind. </li></ol></li><li> Befestigung von Gewebeschnitten: <ol><li> Hackfleisch das Gewebe in 1 mm Stücke mit zwei Skalpelle. Wenn die Stücke nicht klein genug sind, leicht löst sie aus der Schale, und die Zellen werden nicht auf der Geschirroberfläche hinauswachsen. </li><li> Legen Sie kleine Lungengewebe Abschnitte voneinander auf einen leeren Bereich jedes Stück Umgebung aufrecht zu erhalten. Make Kratzer auf der Oberfläche der Gewebekulturschale mit einem Skalpell, um die Befestigung von Gewebeschnitten zu erleichtern. HINWEIS: Scratchingscheint auch Zellauswuchs erleichtern, wodurch Spuren entlang dem Zellen migrieren können. <ol><li> Alternativ stellen Hackfleisch Gewebestücke einzeln in jede Vertiefung einer Platte mit 6 Vertiefungen, und sie mit einem Deckglas. Befestigen Sie das Deckglas auf die Oberfläche der Platte mit Silikonfett. </li><li> Zeigen Silikonfett an zwei Punkten 1,5 cm Abstand in jedem Well mit einem sterilen Stift. Coverage der Gewebestücke erhöht die Wirksamkeit der Zell Auswuchs und Zellvermehrung nach mehreren Durchgängen. </li></ol></li></ol></li><li> Nachfolgende Explantatkultur: <ol><li> Kulturmedium hinzufügen, vorsichtig in die Schale, bevor die Gewebeschnitte austrocknen, so effizient Zellauswuchs wird zum größten Teil verloren, wenn die Proben trocknen. Stellen Sie das Medium strömen nicht zu schnell, wie die Gewebeschnitte würde abnehmen. </li><li> Kulturzellen in DMEM mit 10% FBS. Verwenden Sie ausreichend Medium nur das Gewebe zu bedecken, aber nicht zu viel, dass es ermöglicht, schwebend, als zusätzliche Auftriebs fördert Loslösung von derGericht. </li></ol></li><li> Zellpassage: <ol><li> Gehen Sie mit dem Kulturmedium mit Sorgfalt zu allen Zeiten als wiederholte Bewegungen der Kulturschale kann zur Ablösung der Gewebeschnitte führen. </li><li> Legen Sie die Kulturschalen in einem Brutschrank bei 37 ° C für 5-7 Tage. Aktualisieren Sie das Medium jeden zweiten Tag, und übernehmen die Kulturschalen minimal während des Mediums ändert. Fibroblasten entwachsen von der Kante der Gewebeschnitte in den nächsten Wochen. HINWEIS: Nach ~ 2-3 Wochen entwachsen Fibroblasten fast bis Konfluenz in Abhängigkeit von der Höhe der Oberfläche. </li><li> Waschen Sie die Zellen mit 1 × PBS und 1 ml Trypsin ich auf den Teller. </li><li> Nach Trypsinierung lösen sich die Zellen unter Verwendung von 9 ml DMEM, ergänzt mit 10% FBS. Sammeln Zellen in dem Medium in einer 10-ml-Röhrchen suspendiert, zusammen mit den Gewebeschnitten. Nach der Zentrifugation, um Zellpellets zu bilden, Resuspendieren der resultierenden Pellets in dem neuen Medium. </li><li> Seed die Zellen und Gewebeschnitte auf eine neue cultur Schüssel, an welchem ​​Punkt das Gewebe nicht an den Teller zu befestigen, während die Zellen anhaften und wachsen. Am folgenden Tag, nehmen Sie die schwimmenden Gewebestücke durch Aspiration, und ändern Sie das Medium. Angehängte Fibroblasten breiten sich mit nachfolgenden Kulturen. </li></ol></li></ol> 2. Dreidimensionale Co-Kultur der menschliche Lungen-Fibroblasten und Krebszellen <ol><li> Herstellung von Zellen und Reagenzien: <ol><li> Etwa verwenden 2 × 10 5 Epithelzellen und 2,5 x 10 5 Fibroblasten pro Vertiefung. Bereiten Kollagen Typ IA (3 mg / ml, pH 3), FBS (100%), Rekonstitutionspuffer (50 mM NaOH, 260 mM NaHCO 3, 200 mM HEPES), 5x DMEM, DMEM mit 10% FBS für Fibroblastenkultur ergänzt, und ein 3D-Co-Kulturmedium (eine 1: 1-Mischung von Fibroblastenkulturmedium und das Kulturmedium für die Krebszellen). </li><li> Kultur A549 Lungenadenokarzinomzellen, die Fibroblasten und die A549 3D Kokultur in DMEM, ergänzt mit 10% FBS. </li></ol></li><li> Kollagen-Gel formationen: <ol><li> Fibroblasten auf 10 cm Schüssel mit 1x PBS kultiviert waschen und mit 1 ml Trypsin ich auf den Teller. Nach Trypsinisierung für ~ 5 min bei 37 ° C lösen sich die Zellen unter Verwendung von 9 ml DMEM mit 10% FBS ergänzt. Sammeln Zellen in dem Medium in einer 10-ml-Röhrchen suspendiert und zentrifugieren bei 200-300 xg Zellpellets zu bilden. </li><li> Resuspendieren der resultierenden Pellets in 100% FBS bei einer Dichte von 5 × 10 5 / ml. </li><li> Bereiten Sie die Kollagen-Gel auf Eis. Kühlung der Reagenzien, Pipetten und Röhren in einem Kühlschrank vor dem folgenden Verfahren. Auch auf Eis erstarrt die Mischung zu einem gewissen Grad, und das Gesamtvolumen weniger als die Summe aller Bestandteile ist. </li><li> In jede Vertiefung, bereiten Sie die Kollagen-Gel durch Mischen von 0,5 ml Fibroblastensuspension (2,5 x 10 5 Zellen) in FBS, 2,3 ml Typ IA Kollagen, 670 ul 5x DMEM, und 330 &amp; mgr; Rekonstitutionspuffer. Lassen Sie die Gele leicht bei Raumtemperatur eingestellt. <ol><li> Kräftig pipettieren, um eine homogene mi gewährleistenBefestigung. Vermeiden Sie Luftblasen beim Pipettieren. </li></ol></li><li> Hinzufügen der Mischung (3 ml) zu jedem Well einer 6-Well-Platte und zu ermöglichen, in den Inkubator bei 37 ° C für 30-60 min gelatinieren ohne Störung. </li></ol></li><li> Krebszellkultur auf das Kollagengel: <ol><li> Führen dreidimensionalen Co-Kultur mit einem zuvor berichtet Protokoll mit Modifikationen 6. </li><li> Resuspendieren Krebszellen in der 3D-Co-Kulturmedium (oder in DMEM mit 10% FBS bei der A549-Zellen) in einer Dichte von 1 x 10 5 / ml. </li><li> Pour 2 ml des resuspendierten Zelllösung (2 x 10 5 Zellen) auf die Oberfläche eines jeden Gels. Ändern der Zellzahl der Krebszellen oder Fibroblasten in Kokultur je nach Versuchsbedingungen. </li></ol></li><li> Gelkontraktion: <ol><li> Gele über Nacht bei 37 ° C, so dass die Krebszellen zu dem Kollagengel haften. Trennen Sie jedes Gel, und erzeugen einen &quot;schwebenden Kultur&quot; in jede Vertiefung of 6-Well-Platte. HINWEIS: Durch die Verwendung eines schwimmenden Kultur, sind verschiedene Änderungen in Gelgröße durch mechanische Spannung und Kollagenabbau, die von zellulären Wechselwirkungen zwischen co-kultivierten Krebszellen und Fibroblasten vermittelt werden induziert. </li><li> Verwenden eine abgewinkelte 21 G Nadel oder Spachtel, jedes Gel, das aus dem Rand des Bohrlochs abzutrennen. Alle 2-3 Tage, aktualisieren Sie die Vertiefungen mit 2 ml 3D-Co-Kulturmedium. Messen der Größe jedes Gel täglich für 5 Tage. </li></ol></li><li> Analyse Kollagengelen: <ol><li> Messung der Kollagengehalt von jeweils unter Verwendung von Kollagen-Quantifizierungsverfahren, wie dem Sircol Assay. Führen Transkriptom-Analyse oder quantitativer RT-PCR nach dem Sammeln von RNA aus den Gelen 5. </li></ol></li></ol> 3. Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche, Kultur und Invasion Assay <ol><li> Nach Kultivieren der Kollagengele bei 37 ° C für 5 Tage, setzen die kontrahierten Gele Luft, indem sie auf ein Sieb (70 &amp; mgr; m Porengrße) in neue 6-Well-Platten. Stellen Sie das Netz aus kommerziell erhältlichen Zellsiebe für die Durchflusszytometrie verwendet. </li><li> Vorsichtig füllen jede Vertiefung mit 11 ml 3D Co-Kulturmedium. </li><li> Positionieren Sie die Gele auf das Netz mit einem sterilen Löffel, und entfernen Sie alle verbleibenden Medium aus den Gelen. Unter dieser Bedingung, tauchen Gele in dem Medium während setzen die obere Oberfläche des Gels in die Luft. Definieren Sie diesen Kulturbedingungen wie Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche. HINWEIS: Nach 5-7 Tagen der Beibehaltung des Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche bei 37 ° C im Brutschrank migrieren invasive Krebszellen in das Gel. Je nach Zelltyp und als Ergebnis zellulärer Wechselwirkungen sind variable Grad der Zell morphologische Veränderung in den Krebszellen durch die Luft-Flüssigkeits-Schnittstelle Kultur induziert. </li><li> Für die histologische Beurteilung, beheben Sie das Gel in Formalin-Lösung über Nacht bei Raumtemperatur und in Paraffin eingebettet werden. Fleck Vertikalschnitte (4 &amp; mgr; m) mit Hämatoxylin und Eosin (H &amp; E). Führen immunhistochemische Analyse on die Abschnitte 4. </li></ol>

<ol>
	<li>Strell, C., Rundqvist, H., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts-a+key+host+cell+type+in+tumor+initiation,+progression,+and+metastasis.">Fibroblasts-a key host cell type in tumor initiation, progression, and metastasis.</a> Ups. J. Med. Sci. 117 (2), 187-195 (2012).</li><li>Augsten, M., H&#228;ggl&#246;f, C., Pe&#241;a, C., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+digest+on+the+role+of+the+tumor+microenvironment+in+gastrointestinal+cancers.">A digest on the role of the tumor microenvironment in gastrointestinal cancers.</a> Cancer Microenviron. 3 (1), 167-176 (2010).</li><li>Augsten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-Associated+Fibroblasts+as+Another+Polarized+Cell+Type+of+the+Tumor+Microenvironment.">Cancer-Associated Fibroblasts as Another Polarized Cell Type of the Tumor Microenvironment.</a> Front. Oncol. 4, 62 (2014).</li><li>Horie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+lung+cancer-associated+fibroblasts+in+three-dimensional+in+vitro+co-culture+model.">Characterization of human lung cancer-associated fibroblasts in three-dimensional in vitro co-culture model.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 423 (1), 158-163 (2012).</li><li>Ohshima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;+signaling+in+gingival+fibroblast-epithelial+interaction.">TGF-&#946; signaling in gingival fibroblast-epithelial interaction.</a> J. Dent. Res. 89 (11), 1315-1321 (2010).</li><li>Ikebe, D., Wang, B., Suzuki, H., Kato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+keratinocyte+stratification+by+a+dominant+negative+JunB+mutant+without+blocking+cell+proliferation.">Suppression of keratinocyte stratification by a dominant negative JunB mutant without blocking cell proliferation.</a> Genes Cells. 12 (2), 197-207 (2007).</li><li>Orimo, A., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+in+cancer:+a+novel+tumor-promoting+cell+type.">Stromal fibroblasts in cancer: a novel tumor-promoting cell type.</a> Cell Cycle. 5 (15), 1597-1601 (2006).</li><li>Paulsson, J., Micke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+relevance+of+cancer-associated+fibroblasts+in+human+cancer.">Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer.</a> Semin. Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).</li><li>Navab, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+gene-expression+signature+of+carcinoma-associated+fibroblasts+in+non-small+cell+lung+cancer.">Prognostic gene-expression signature of carcinoma-associated fibroblasts in non-small cell lung cancer.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108 (17), 7160-7165 (2011).</li><li>Herrera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+heterogeneity+of+cancer-associated+fibroblasts+from+human+colon+tumors+shows+specific+prognostic+gene+expression+signature.">Functional heterogeneity of cancer-associated fibroblasts from human colon tumors shows specific prognostic gene expression signature.</a> Clin. Cancer Res. 19 (21), 5914-5926 (2013).</li><li>H&#228;ggl&#246;f, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+PDGFRbeta+expression+in+prostate+tumors+and+non-malignant+prostate+tissue+predicts+prostate+cancer+survival.">Stromal PDGFRbeta expression in prostate tumors and non-malignant prostate tissue predicts prostate cancer survival.</a> PLoS One. 5 (5), e10747 (2010).</li><li>Saito, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forkhead+box+F1+regulates+tumor-promoting+properties+of+cancer-associated+fibroblasts+in+lung+cancer.">Forkhead box F1 regulates tumor-promoting properties of cancer-associated fibroblasts in lung cancer.</a> Cancer Res. 70 (7), 2644-2654 (2010).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 6 (5), 392-401 (2006).</li><li>Calvo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+and+YAP-dependent+matrix+remodelling+is+required+for+the+generation+and+maintenance+of+cancer-associated+fibroblasts.">Mechanotransduction and YAP-dependent matrix remodelling is required for the generation and maintenance of cancer-associated fibroblasts.</a> Nat. Cell Biol. 15 (6), 637-646 (2013).</li><li>Horie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histamine+induces+human+lung+fibroblast-mediated+collagen+gel+contraction+via+histamine+H1+receptor.">Histamine induces human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction via histamine H1 receptor.</a> Exp. Lung Res. 40 (5), 222-236 (2014).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

CAF bilden eine wichtige Komponente der ECM Krebszellen umgibt, und nicht nur ein Gerüst für den Tumor, sondern auch aktiv in Tumorentwicklung 7 beteiligen. Immer mehr deutet entwirrt die Auswirkungen der CAF oder die entsprechenden Moleküle auf der eventuelle Prognose, Hervorhebung der kritischen Rolle der CAF-vermittelte Tumorprogression 8. In der vorangegangenen Studie beschäftigten wir Auswuchs Methode zur Lungen CAF 4 zu isolieren. In diesem Experime...

Cancer tissue can be perceived as a type of organ, which evolves through close interactions between the cancer and the tumor stromal microenvironment, composed of cancer-associated fibroblasts (CAFs), immune cells, tumor vessels and the extracellular matrix (ECM). CAFs are the major source of soluble factors (cytokines, growth factors and chemokines) that exert mitogenic, pro-migratory and pro-invasive effects on cancer cells. They also stimulate tumor vessel formation and recruit precursor cells, such as bone marrow-derived cells (BMDC). Activated CAFs are involved in the production and remodeling of the ECM, thereby promoting the growth and spread of cancer cells1. CAFs also provide a niche that facilitates tumor cell colonization and metastasis and are capable of conferring stem cell phenotypes onto neighboring cancer cells. Pathological observations suggest that stromal reactions or fibrotic changes in cancer tissues are indicative of a poor prognosis. Recent studies have also demonstrated that tumor stromal features, such as the gene signature, can predict patient prognosis. Furthermore, CAF-derived factors can modulate sensitivity to chemotherapy, highlighting the role of CAFs in determining drug sensitivity and resistance2.
As CAFs play a multifaceted role in the promotion of tumor progression through signaling pathways that mediate interactions between CAFs and different cell types within the tumor microenvironment, they have attracted increasing attention as novel targets for cancer therapies. The heterogeneity of the cell populations within the cancer microenvironment presents an obstacle for targeting CAFs. Several markers for CAFs have been proposed, such as &#945;-smooth muscle actin (&#945;-SMA), fibroblast activation protein (FAP), and fibroblast specific proten-1 (FSP-1: also called S100A4); however, these molecular markers are not specific for distinguishing CAFs from other cells present in non-cancerous tissues3. Therefore, further studies are needed to obtain more knowledge about the specific properties of CAFs. To this end, it is informative to characterize primary cultured CAFs compared with patient-matched normal fibroblasts.
Recently, analyses on patient-derived CAFs have been reported in several cancer types, revealing unique gene expression patterns and cell behaviors compared with fibroblasts derived from non-cancerous tissues. Using isolated CAFs from human lung cancer tissues, we developed a three-dimensional co-culture method, enabling us to evaluate the properties of lung CAFs. In this model, we investigated the effects of the CAFs on lung cancer cell invasion, proliferation and collagen gel contraction, which experimentally recapitulated the tumor-promoting roles of lung CAFs4.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1035">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:267px;">Name</td>
			<td style="width:297px;">Company</td>
			<td style="width:471px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">DMEM</td>
			<td style="width:297px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:471px;">D5796</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">FBS</td>
			<td style="width:297px;">GIBCO</td>
			<td style="width:471px;">10437</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Collagen type IA</td>
			<td style="width:297px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td style="width:471px;">CELL-1A</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Reconstitution buffer</td>
			<td style="width:297px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td style="width:471px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cover slip</td>
			<td style="width:297px;">NUNC</td>
			<td style="width:471px;">174934</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Silicone grease</td>
			<td style="width:297px;">Dow Corning Toray</td>
			<td style="width:471px;">High vacuum grease</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Dispase I</td>
			<td style="width:297px;">WAKO</td>
			<td style="width:471px;">386-02271</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">6-well plate</td>
			<td style="width:297px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:471px;">353046</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cell strainer (70 &#956;m)</td>
			<td style="width:297px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:471px;">352350</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional co-culture model for tumor-stromal interaction

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal cells. The tumor microenvironment is comprised of a variety of cell types, such as fibroblasts, immune cells, vascular endothelial cells, pericytes and bone-marrow-derived cells, embedded in the extracellular matrix (ECM). Cancer-associated fibroblasts (CAFs) have a pro-tumorigenic role through the secretion of soluble factors, angiogenesis and ECM remodeling. The experimental models for cancer cell survival, proliferation, migration, and invasion have mostly relied on two-dimensional monocellular and monolayer tissue cultures or Boyden chamber assays. However, these experiments do not precisely reflect the physiological or pathological conditions in a diseased organ. To gain a better understanding of tumor stromal or tumor matrix interactions, multicellular and three-dimensional cultures provide more powerful tools for investigating intercellular communication and ECM-dependent modulation of cancer cell behavior. As a platform for this type of study, we present an experimental model in which cancer cells are cultured on collagen gels embedded with primary cultures of CAFs.

Diese Co-Kulturverfahren, imitiert der Tumor-Mikroumgebung ist ein nützliches Werkzeug, um die Wechselwirkungen zwischen den Krebszellen und Fibroblasten in Kollagengele eingebettet untersuchen. Kollagengel Kontraktion, Invasion von Krebszellen und morphologische Veränderungen: In der früheren Studie wurden drei Parameter in diesem experimentellen Modell bewertet. Krebszellproliferation wurde ebenfalls mit Ki67 Immunfärbung 4 geschätzt. Lungengewebeproben wurden von krebsartigen und nicht-krebsartigen Ab...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction at JoVE.com

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.

Dreidimensionale Co-Kultur-Modell für Tumor-Stroma-Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

three-dimensional-co-culture-model-for-tumor-stromal-interaction

Research

JoVE Journal

Medicine

17.2K Aufrufe.  The University of Tokyo. Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.