This work was supported by funding from the March of Dimes FY12-133 (S.K.E.) and the National Institutes of Health R01HD037831 (S.K.E.). We would like to thank Dr. Deborah Frank for critical review of the manuscript.

HINWEIS: Alle Tierverfahren mit Leitlinien für die Pflege und Verwendung von Tieren her von den National Institutes of Health, wurde eingehalten. Alle Protokolle wurden von der Animal Studies Committee an der Washington University in St. Louis zugelassen. HINWEIS: Bestimmte Materialien und Ausrüstung für dieses Protokoll aufgelistet Materialien und Geräte-Tabelle. 1. Timed Zucht von weiblichen Mäusen <ol><li> Breed erwachsenen Weibchen zwischen zwei und sechs Monaten in einem 2 Stunden Zeitfenster mit Männern. Gezielte Züchtung h nicht so lange benötigt, wie sie im Einklang für die Gesamtheit des Versuchs gehalten wurden. </li><li> Schwangerschaft Bestätigen der Anwesenheit eines copulatory Stecker. Bestimmen Sie den Tag und die Stunde, auf dem der Stecker zunächst als Tag nach der Koitus 0 (dpc0) gesehen. Denken Sie an die bestimmte Stunde beim Start Druckmessung. </li><li> Führen Sie Operationen auf dpc8-13. Die genaue dpc auf dem Mausstamm ab. </li><li> Um festzustellen, ob eine Maus ist schwanger vor der Operation, perform Ultraschall-Bildgebung des Abdomens mit einem 40 MHz linear-Array-Sensor vor der Verabreichung von Narkose zu einem Imaging-System gekoppelt. Dies Visualisierung der Fruchtblasen zu ermöglichen. Wenn ein Ultraschallsystem nicht verfügbar ist, verwenden Sie das Gewicht der Maus. HINWEIS: Eine Gewichtszunahme von mindestens 2 g zwischen dpc0 und DPC8 und Abdomen ist ein guter Indikator für die Schwangerschaft. </li></ol> 2. Telemetrie Chirurgie Prep <ol><li> Verwenden Sie einen Autoklaven, Instrumente, Gaze, Wattestäbchen, OP-Abdeckungen und Pipettenspitzen innerhalb von 24 Stunden vor der Operation zu sterilisieren. </li><li> Sauberen Operationen mit 70% Ethanol. </li><li> Schalten Sie Heizkissen (spezialisiert für Nager) und Perle Sterilisator. </li></ol> 3. Telemetrie Chirurgie <ol><li> Für Anästhesie, verwenden 4-5% Isofluran mit einer Sauerstoffdurchflussrate von 1-2 l / min. </li><li> Warten Sie, bis die Maus Anzeichen von Betäubung und dann spritzen subkutan mit Buprenorphin (Analgetikum: 0,1 ml pro 20 g). </li><li> Rasur den Bauch der Maus von der Unterseite der Rippen nach unten in die Blase. </li><li> Bringen Sie die Maus auf dem OP-Tisch auf vorgewärmten Heizkissen, und die Augen der Maus die Abdeckung mit Augensalbe, um ein Austrocknen zu verhindern. </li><li> Beginnen steriler Technik. Setzen Sie auf sterile Handschuhe und halten Sie die Wrapper als sterile Oberfläche, auf der die Iod und Ethanol Peelings zu platzieren. </li><li> Entfernen Sie den Entfernungsmesser von der Packung oder Kochsalzlösung und mit einer sterilen Pinzette, um es auf steriler Gaze zu platzieren. <ol><li> Verwenden Sie die Spritze (durch das Telemeter Lieferanten zur Verfügung gestellt), um die Katheterspitze mit Gel zu füllen. Drücken Sie vorsichtig den Katheter zu schaffen genug Unterdruck, um das Gel in den Katheter zu ziehen. </li></ol></li><li> Legen Sie eine sterile Spitze auf der Pipette. Pipette 2 ul von chirurgischen Klebstoff und stellen Sie die Pipette auf eine sterile Oberfläche. </li><li> Zur Reinigung der Operationsstelle, wischen Sie die Fläche mit Jod und dann mit 70% Ethanol. </li><li> Schneiden Sie ein Loch in der Operationstuch gerade groß genug,für die für den Schnitt und über den Maus benötigte Fläche. </li><li> Führen Sie einen Fuß Prise (Pedal Erkennung), damit die Maus vollständig, bevor ein Einschnitt betäubt. </li><li> Machen Sie eine kleine vertikale Mittellinienschnitt. Als nächstes stellen Sie einen ähnlichen Schnitt durch die zugrunde liegenden Körperwand Muskel. </li><li> Ziehen Sie die Gebärmutter aus der Körperhöhle und suchen Sie das Uterushorn, das die meisten Jungtiere, die lebensfähig sind. <ol><li> Optional - Bei Zugabe von miRNA, injizieren viralen Vektor in Muskelschicht der Gebärmutter vor dem Einsetzen des Entfernungsmessers. </li></ol></li><li> Machen Sie einen kleinen Schnitt an der Spitze des Uterushorn mit 3 mm Schneide Frühjahr Schere. </li><li> Führen Sie den Katheter, ohne sie zu quetschen, zwischen der Gebärmutterwand und fetalen Säcke. Stecken Sie den Katheter letzten Säcke seiner versehentliches Entfernen zu reduzieren. Sicherstellen, dass die fetale Säcke werden nicht durch die Einfügung gestört. </li><li> Pipettieren chirurgischen Klebstoff auf die Stelle des Telemeter Einführen des Katheters an den u anhaftenterine Horn und zu verhindern, dass der Katheter herausrutschen aus dem Uterushorn. Warten Sie einige Sekunden, damit der Kleber starr zu werden, und dann vorsichtig die Gebärmutter wieder in die Körperhöhle. </li><li> Platzieren Sie den Entfernungsmesser in der Körperhöhle an der gegenüberliegenden Seite des Kathetereinführungsstelle. </li><li> Naht der Körperhöhle mit 6,0 resorbierbaren Fäden verschlossen. Zunächst führen Sie eine Handtasche Stich und dann drei Minuten vor vier einzelnen Stichen. </li><li> Naht der Haut durch Verwendung der gleichen Technik, aber mit 6-0 nicht-resorbierbares Nahtmaterial. </li><li> Swab Dibucain (aktuelles Analgetikum) Salbe über die Einschnittstelle. </li><li> Injizieren von 0,3 bis 0,4 ml steriler Kochsalzlösung subkutan zu helfen rehydrieren das Tier. </li><li> Überwachen Sie das Tier nach der Operation, bis sie hellwach. Die Maus Stellen Sie keine wieder in seinem Käfig, bis sie sich frei halten den Kopf über den Tisch, wie bestimmte Arten von Betten kann eine stark narkotisierten Maus zu ersticken ist. Für eine Maus, die für 30-45 min narkotisiert wurde, sollte man erwarten, the Maus, die von 1 Stunde und 15 Minuten hellwach zu sein. </li><li> Wenn die Durchführung einer zusätzlichen Operationen, wischen Instrumente mit 70% Ethanol und Perlen sterilisieren vor der Wiederverwendung. </li></ol> 4. Post-Chirurgie Recovery- <ol><li> Überwachen Sie täglich nach der Operation Fortschritt in einem Protokoll. Katalog Gewichtszunahme und Verlust und achten Sie auf Lethargie, Blutungen oder unvollständigen Verschluss des chirurgischen Einschnitt. <ol><li> Führen Sie die Maus weich Mäusefutter (~ die Konsistenz Apfelmus) oder spezielle Recovery-Diätkost. </li><li> Untersuchen Sie die Nähte und sicherzustellen, dass sie nicht herausgezogen, aber versuchen Sie nicht, die Maus, übermäßig zu behandeln. </li></ol></li></ol> 5. Telemetrie Recording <ol><li> Am Tag der Zinsen erfolgt (mindestens zwei bis drei Tage, nachdem die Maus von der Operation erholt), legen Sie einen Magneten in der Nähe der Maus auf die Telemeter einzuschalten. Sie mit der Maus Käfig auf den Empfänger. Das Licht auf dem Empfänger schaltet sich, wenn der Entfernungsmesser aktiviert ist. </li><li> Kalibrieren Sie brandneue Teleme<html> ter mit herstellerspezifischen Kalibrierungen zur Verfügung gestellt. Wiederverwendet Telemeter Kalibrierung Spezifikationen werden in der Software gehalten werden. </li><li> Innerhalb der Software, starten Sie die Aufnahme durch Rechtsklick auf &quot;Tier&quot; und klicken Sie auf &quot;Start Probenahme, kontinuierliche&quot;, die Abtastung mit Raten von bis zu 500 Hz ermöglicht. Achten Sie darauf, die Software gesetzt, um zu speichern und zu verfolgen. HINWEIS: Wenn die Abtastrate Maussymbol wird grün werden Drücke aufgezeichnet. Stören Sie die Maus während der Geburt kann zu unterbrechen oder zu ändern Arbeit, so vorsichtig zu beobachten. </li><li> Nach der Lieferung oder Zeitraum von Interesse, wenn die Aufzeichnung durch einen Rechtsklick auf &quot;Tier&quot; und wählen Sie &quot;Stopp-Aufnahmen, die alle&quot;. Verwenden Sie einen Magneten zum Ausschalten Telemeter die Batterie zu schonen, da die Telemeter Batterie wird in der Regel nur für 1,5 Monate kontinuierliche Aufzeichnung dauern. </li><li> Euthanize der Maus durch CO 2 Überdosis und Wiederherstellung der Telemeter. Welpen werden durch Enthauptung getötet. </li></ol>tle &quot;&gt; 6. Tele Sterilisation <ol><li> Setzen Sie den Entfernungsmesser in einer Lösung von 1% Enzymreinigungsmittel in VE-Wasser über Nacht bei Raumtemperatur. </li><li> Spülen Sie den Entfernungsmesser in VE-Wasser und entfernen Sie alle Gewebe und Klebstoff, wobei Sie darauf achten, den Katheter nicht zu drücken. </li><li> Inkubieren der Entfernungsmesser in 2% Glutaraldehyd für 24 h bei Raumtemperatur bis zu sterilisieren. </li><li> Spülen Sie den Entfernungsmesser mit steriler Kochsalzlösung und speichern sie in steriler Kochsalzlösung bis zum nächsten Implantation oder zurück zu Hersteller geschickt renoviert werden werden. Entfernungsmesser sollte renoviert werden, wenn Gewebe im Inneren des Katheters nach der Sterilisation entfernt. Typischerweise Entfernungsmesser 4-5 Male zuvor brauchen, saniert werden. </li></ol>

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The authors have nothing to disclose.

Untersuchungen der Kontraktilität des Myometriums wurden auf ex vivo Messungen der Muskelspannung verlassen. Diese Methode kann für die Frühphasen-Test von neu entwickelten Uterotonika die nicht verabreicht werden, um Tiere leben werden. Jedoch sind in vivo Ansätze notwendig längs des Fortschreitens der Arbeit zu verstehen. Die in-vivo-Messungen dienen mehreren Zwecken. Erstens können sie Einfang eines vollständigeres Bild der Veränderungen des Uteruskontraktionsmuster über die Dauer ...

Frühgeburt ist die häufigste Ursache für perinatale Morbidität und Mortalität in den entwickelten Ländern; es ist für 50% der perinatalen Morbidität und 75% Perinatalsterblichkeit 1,2 verantwortlich. Frühgeburt Arbeit ist vielfältig und kann idiopathisch. Obwohl viel Forschung über die molekularen und elektrischen Bahnen Umwandlung des Myometriums von einem Ruhe Gewebe in eine Kontraktions eine entstanden, bleibt die genaue Pathophysiologie der Frühgeborenen Arbeit schwer. Endokrinen, entzündlichen und Genregulation haben zu vorzeitigen Wehen 3,4 in Verbindung gebracht worden. Jedoch ethische Bedenken beschränken die Möglichkeiten, die Forschung über die Mechanismen der vorzeitigen Wehen bei Menschen führen. Angesichts dieser Einschränkungen haben viele Forscher an Mäuse als Modellsystem, mit dem die Physiologie der Geburt untersuchen gedreht. Mäuse haben kurze Schwangerschaften Dauer ca. 3 Wochen und kann leicht genetisch manipuliert werden. Darüber hinaus haben mehrere genetische Mausmodellewurde entwickelt, um die Signalwege, die für Arbeits 5 zu bestimmen. Trotz wichtigsten Unterschiede zwischen Maus und Mensch Geburt, Mäusen und Menschen teilen viele der gleichen Mechanismen, die für die Arbeit wesentlich sind, einschließlich intrauterine Entzündung und Infektion 6. So dienen Mäuse als ein unschätzbares Werkzeug für die Untersuchung der Uterusaktivität. Bis heute der Goldstandard Uteruskontraktilität bei Mäusen zu messen war ex vivo isometrische Spannung Aufnahmen; dies ist jedoch begrenzt auf einen Schwangerschaftszeitpunkt pro Versuch und erfordert die Entfernung der Gebärmutter von seiner physiologischen Umgebung. Ein weiterer wichtiger Faktor ist die große Anzahl von Tieren, die für diese Untersuchungen erforderlich. Schließlich ist diese Methode nicht für Langzeitstudien untersucht Einleitung der Wehen und Früh Pathophysiologie ermöglichen. Jüngste Fortschritte in der radiometrischen Telemetriegeräte zur arteriellen Druck zu studieren gemacht ändert 7 an Mäusen und intrauterine Druck bei Ratten 8 warf die Frage auf, ob die gleiche Technologie verwendet werden, um Veränderungen in der intrauterine Druck bei Mäusen während der Schwangerschaft zu untersuchen. Nach anfänglichen Fehlersuche wurde eine Methode erfolgreich an Arbeits Induktion und Progression in einer Maus messen entwickelt. Diese in vivo-Vorgehensweise kann der Übergang von der Niederdruck-Zustand des Ruhe Uterus mit dem Hochdruckzustand anzeigt kraft Wehen messen. Dieses Verfahren wurde auch in der Lage, erhebliche Druckunterschiede zwischen den transgenen Mäusen mit geschwächtem Geburt und Wildtyp-Mäusen zu erkennen, was die physiologische Wirkung der Genexpression 9. Dieses Protokoll stellt eine Echtzeit-in vivo-Verfahren, um die Mausuterusdruck während der Schwangerschaft zu studieren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:105px;">Company</td>
			<td style="width:147px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:207px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Surgical Glue</td>
			<td style="width:105px;">3M Vetbond</td>
			<td style="width:147px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Adhesive--stored in Drierite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">J212H</td>
			<td>Vicryl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Non-absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">8706H</td>
			<td>Prolene</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water Jacket Blanket + Heating Pad</td>
			<td style="width:105px;">Gaymer</td>
			<td style="width:147px;">T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC</td>
			<td>Specialized for rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bead sterilizer</td>
			<td style="width:105px;">Keller</td>
			<td style="width:147px;">Z378577</td>
			<td>Steri 250 Sterilizer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Disecting Microscope</td>
			<td style="width:105px;">Nikon</td>
			<td style="width:147px;">SMZ754</td>
			<td>Fibre optic gooseneck external light source</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:245px;">Sterile Surgical Gloves--Latex&#160;</td>
			<td style="width:105px;">Cardinal Health Triflex</td>
			<td style="width:147px;">2D7253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">270-0135-001</td>
			<td style="width:207px;">TA11PA-C10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Telemeter Reciever</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">272-6001-001</td>
			<td style="width:207px;">RPC-1</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">271-0147-141</td>
			<td>Analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Diet Recovery Gel</td>
			<td style="width:105px;">Clear H2O</td>
			<td style="width:147px;">72-01-5022</td>
			<td>Purified Soft Diet for Rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tergazyme</td>
			<td style="width:105px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z273287</td>
			<td>Enzyme detergent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrauterine telemetry to measure mouse contractile pressure in vivo

Eine komplexe Integration von molekularen und elektrischen Signalen benötigt wird, um einen Ruhe Uterus in eine Kontraktionsorgan am Ende der Schwangerschaft verändern. Trotz der Erkennung von Schlüsselregulatoren der Uteruskontraktilität dieses Verfahren ist immer noch nicht vollständig verstanden. Transgene Mäuse bieten eine ideale Modell, in dem auf die Geburt zu studieren. Bisher war die einzige Möglichkeit, um die Kontraktilität des Uterus bei der Maus zu untersuchen ex vivo isometrischen Spannung Aufnahmen, die aus mehreren Gründen nicht optimal sind. Der Uterus wird aus seiner physiologischen Umgebung entfernt werden, ist eine begrenzte Zeit während der Untersuchung möglich ist, und die Mäuse geopfert werden muß. Die jüngste Entwicklung der radiometrischen Telemetrie für Längs-, Echtzeitmessungen von in vivo intrauterine Druck in Mäusen erlaubt. Hier ist die Implantation einer intrauterinen Telemeter auf Druckänderungen in der Gebärmutter der Maus aus der Mitte der Schwangerschaft bis zur Geburt zu messen beschrieben. Durch den Vergleich Unterschiede in Pressemen zwischen Wildtyp und transgenen Mäusen kann die physiologische Wirkung eines Gens von Interesse weiter erläutert. Diese Technik sollte die Entwicklung von Therapeutika zur myometrische Erkrankungen während der Schwangerschaft zu behandeln, einschließlich vorzeitige Wehen zu beschleunigen.

Echtzeit in vivo intrauterine Druck kann durch Verwendung einer telemetrischen Erfassungssystem aufgezeichnet. Druckentnahme gepaart mit gleichzeitiger Videoaufzeichnung der Maus wurde verwendet, um den genauen Zeitpunkt der Lieferung der einzelnen Welpen zu erfassen und korrelieren Lieferzeit auf die intrauterine Druck der Mutter. Alle Datenpunkte können dann in der Aufzeichnungs aufgetragen, um einen Druck-gegen-Zeit-Kurve (Figur 1A) zu erzeugen. Diese Grafik zeigt die Punkte während der Sc...

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Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Intrauterine Telemetrie zur Maus Kontraktionsdruck messen<em&gt; In-vivo-</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

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