This work was supported by funding from the March of Dimes FY12-133 (S.K.E.) and the National Institutes of Health R01HD037831 (S.K.E.). We would like to thank Dr. Deborah Frank for critical review of the manuscript.

NOTE: Toutes les procédures d&#39;animaux conformes aux lignes directrices pour les soins et l&#39;utilisation des animaux énoncées par les National Institutes of Health. Tous les protocoles ont été approuvés par le Comité des études animales de l&#39;Université Washington à St. Louis. REMARQUE: matériaux et équipements spécifiques pour ce protocole sont répertoriés Matériaux et table Équipement. 1. Elevage Timed de souris femelles <ol><li> Race femelles adultes entre deux et six mois dans une fenêtre de temps de deux heures avec les hommes. H de reproduction spécifiques ne sont pas nécessaires dans la mesure où ils sont maintenus uniforme pour la totalité de l&#39;expérience. </li><li> Confirmer la grossesse par la présence d&#39;un bouchon de copulation. Désigner la journée et h sur laquelle le bouchon est d&#39;abord considéré comme jour post-coït 0 (dpc0). Rappelez-vous l&#39;heure spécifique lors du démarrage de l&#39;enregistrement de pression. </li><li> Effectuer des chirurgies sur dpc8-13. Le DPC exact dépendra de la souche de souris. </li><li> Pour déterminer si une souris est enceinte avant la chirurgie, perform imagerie par ultrasons de l&#39;abdomen avec une sonde à réseau linéaire 40 MHz couplé à un système de formation d&#39;image avant d&#39;administrer l&#39;anesthésie. Cela permettra la visualisation de sacs gestationnel. Si un système à ultrasons ne est pas disponible, utiliser le poids de la souris. REMARQUE: Un gain de poids d&#39;au moins 2 g entre dpc0 et dpc8 et une distension de l&#39;abdomen est un bon indicateur de la grossesse. </li></ol> 2. télémétrie chirurgie Prep <ol><li> Utilisez un autoclave pour stériliser les instruments, de la gaze, des cotons-tiges, champs opératoires, et des embouts de pipette dans les 24 heures avant la chirurgie. </li><li> Surface de la chirurgie propre avec 70% d&#39;éthanol. </li><li> Allumez coussin chauffant (spécialisée pour les rongeurs) et stérilisateur à billes. </li></ol> 3. Chirurgie télémétrie <ol><li> Pour l&#39;anesthésie, 4-5% d&#39;isoflurane utiliser avec un débit d&#39;oxygène de 1 à 2 L / min. </li><li> Attendez jusqu&#39;à ce que la souris montre des signes d&#39;anesthésie puis injecter sous-cutanée avec la buprénorphine (analgésique: 0,1 ml par 20 g). </li><li> Raser l&#39;abdomen de la souris à partir du fond des nervures vers le bas de la vessie. </li><li> Apportez la souris à la table de chirurgie sur coussin chauffant préchauffé, et couvrir les yeux de la souris avec une pommade ophtalmique pour éviter le dessèchement. </li><li> Commencez technique stérile. Mettez des gants stériles et de garder l&#39;emballage comme une surface stérile sur lequel placer les iode et de l&#39;éthanol gommages. </li><li> Retirer le télémètre de l&#39;emballage ou de solution saline et d&#39;utiliser des pinces stériles pour le placer sur une gaze stérile. <ol><li> Utilisez la seringue (fourni par le fournisseur de télémètre) pour remplir l&#39;extrémité du cathéter avec du gel. Pressez doucement le cathéter créer assez de pression négative pour attirer le gel dans le cathéter. </li></ol></li><li> Placez une pointe stérile sur la pipette. Pipette 2 pi de colle chirurgicale et mettre la pipette sur une surface stérile. </li><li> Pour nettoyer le site chirurgical, nettoyer la surface avec de l&#39;iode, puis avec 70% d&#39;éthanol. </li><li> Découper un trou dans le drap chirurgical juste assez grandpour la zone nécessaire pour l&#39;incision et la placer sur la souris. </li><li> Effectuer une pincée de pied (réponse de la pédale) pour assurer la souris est complètement anesthésié avant de faire une incision. </li><li> Faire une petite incision verticale médiane. Ensuite, faire une incision similaires à travers le muscle de la paroi du corps sous-jacent. </li><li> Tirez doucement l&#39;utérus hors de la cavité du corps et de localiser la corne utérine contenant le plus de chiots qui sont viables. <ol><li> Facultatif - Pour plus de miARN, injecter vecteur viral dans la couche musculaire de l&#39;utérus avant l&#39;insertion de télémètre. </li></ol></li><li> Faire une petite incision à la pointe de la corne utérine avec 3 mm avant-gardistes ciseaux à ressort. </li><li> Enfiler le cathéter, sans serrer, entre la paroi utérine et sacs fœtales. Insérez le cathéter passé plusieurs sacs de réduire son retrait accidentel. Assurez-vous que les sacs fœtales ne sont pas perturbés par l&#39;insertion. </li><li> Pipeter la colle chirurgicale à l&#39;emplacement d&#39;insertion télémétrique pour faire adhérer le cathéter à l&#39;ucorne terine et empêcher le cathéter de glisser hors de la corne de l&#39;utérus. Attendez quelques secondes pour que la colle à devenir rigide, puis placer soigneusement l&#39;utérus à l&#39;intérieur de la cavité corporelle. </li><li> Placez le télémètre dans la cavité du corps de l&#39;autre côté du site d&#39;insertion du cathéter. </li><li> Suturer la cavité du corps fermée avec 6,0 sutures absorbables. Tout d&#39;abord, faire un point de la bourse, puis de trois à quatre points individuels. </li><li> Suturer la peau en utilisant la même technique, mais avec 6-0 suture non absorbable. </li><li> Swab dibucaïne (analgésique topique) pommade sur le site de l&#39;incision. </li><li> Injecter 0,3 à 0,4 ml de solution saline stérile voie sous-cutanée pour aider à réhydrater l&#39;animal. </li><li> Surveiller l&#39;animal après la chirurgie jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit complètement réveillé. Ne placez pas la souris dans sa cage jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit en mesure de tenir librement la tête hors de la table, comme certains types de litière peuvent suffoquer une souris lourdement anesthésié. Pour une souris qui a été anesthésiés pendant 30-45 min, on devrait se attendre ee souris pour être pleinement éveillé par 1 h et 15 min. </li><li> Si vous effectuez des interventions chirurgicales supplémentaires, essuyez instruments avec 70% d&#39;éthanol et perles stériliser avant de les réutiliser. </li></ol> 4. Publier chirurgie Recovery <ol><li> Surveiller les progrès quotidienne post-chirurgicale dans un journal. Catalogue gain de poids et la perte et de regarder pour la léthargie, des saignements ou une fermeture incomplète de l&#39;incision chirurgicale. <ol><li> Nourrir le chow de la souris adoucie de la souris (~ la consistance de compote de pommes) ou spécialisée régime alimentaire de récupération. </li><li> Examiner les sutures et se assurer qu&#39;ils ne sont pas retirés, mais essayez de ne pas manipuler la souris trop. </li></ol></li></ol> 5. télémétrie Enregistrement <ol><li> Le jour d&#39;intérêt (au moins deux à trois jours après que la souris a récupéré de la chirurgie), placez un aimant près de la souris pour tourner sur le télémètre. Mettez la cage de la souris sur le récepteur. La lumière sur le récepteur devrait se allumer si le télémètre est activée. </li><li> Calibrer Teleme nouvelle marque<html> TER avec étalonnages spécifiques du fabricant fournies. Réutilisés télémètre spécifications d&#39;étalonnage seront conservées dans le logiciel. </li><li> Dans le logiciel, démarrer l&#39;enregistrement en un clic droit sur &quot;animal&quot; et cliquez sur &quot;commencer l&#39;échantillonnage, continue», ce qui permet un échantillonnage à des débits allant jusqu&#39;à 500 Hz. Assurez-vous que le logiciel est réglé pour enregistrer et retracer. REMARQUE: Lorsque l&#39;icône de la souris d&#39;échantillonnage se allume en vert, les pressions sont enregistrées. Troubler la souris pendant l&#39;accouchement peut interrompre ou modifier le travail, afin d&#39;observer avec prudence. </li><li> Après l&#39;accouchement ou période de temps d&#39;intérêt, arrêtez l&#39;enregistrement en cliquant droit sur &quot;animal&quot; et en sélectionnant &quot;arrêter les enregistrements, tous&quot;. Utilisez un aimant pour éteindre télémètre pour sauver la vie de la batterie, que la batterie du télémètre sera généralement ne dure 1,5 mois d&#39;enregistrement continu. </li><li> Euthanasier la souris en CO 2 surdosage et de récupérer le télémètre. Les chiots sont euthanasiés par décapitation. </li></ol>TLE &quot;&gt; 6. Telemeter Stérilisation <ol><li> Placez le télémètre à une solution de 1% de détergent enzymatique dans de l&#39;eau désionisée pendant une nuit à température ambiante. </li><li> Rincer le télémètre dans de l&#39;eau déminéralisée et enlever tous les tissus et de la colle, en faisant attention de ne pas presser le cathéter. </li><li> Incuber le télémètre à 2% de glutaraldéhyde pendant 24 heures à la température ambiante à stériliser. </li><li> Rincer le télémètre avec une solution saline stérile et stocker dans une solution saline stérile jusqu&#39;à la prochaine implantation ou être renvoyé au fabricant à être rénové. Télémètres devraient être remis à neuf si le tissu est situé à l&#39;intérieur du cathéter après stérilisation. Typiquement télémètres peuvent être utilisés 4-5 fois avant de devoir être rénové. </li></ol>

<ol>
	<li>Slattery, M. M., Morrison, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+delivery.">Preterm delivery.</a> Lancet. 360, 1489-1497 (2002).</li><li>Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+causes+of+preterm+birth.">Epidemiology and causes of preterm birth.</a> Lancet. 371, 75-84 (2008).</li><li>Keelan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+inhibition+of+inflammatory+pathways+for+the+prevention+of+preterm+birth.">Pharmacological inhibition of inflammatory pathways for the prevention of preterm birth.</a> Journal Of Reproductive Immunology. 88, 176-184 (2011).</li><li>Voltolini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+spontaneous+preterm+birth:+from+underlying+mechanisms+to+predictive+and+preventive+interventions.">Understanding spontaneous preterm birth: from underlying mechanisms to predictive and preventive interventions.</a> Reproductive Sciences. 20, 1274-1292 (2013).</li><li>Ratajczak, C. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+parturition+biology+from+genetically+altered+mice.">Insights into parturition biology from genetically altered mice.</a> Pediatric research. 64, 581-589 (2008).</li><li>Rajakumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+HIF-1+alpha,+HIF-2+alpha,+membrane+and+soluble+VEGF+receptor-1+proteins+are+not+increased+in+normotensive+pregnancies+complicated+by+late-onset+intrauterine+growth+restriction.">Placental HIF-1 alpha, HIF-2 alpha, membrane and soluble VEGF receptor-1 proteins are not increased in normotensive pregnancies complicated by late-onset intrauterine growth restriction.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 293, (2007).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.+American+journal+of+physiology.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American journal of physiology.</a> Heart And Circulatory Physiology. 286, H2408-H2415 (2004).</li><li>Mackay, L. B., Shi, L. B., Maul, H. .., Maner, W. L., Garfield, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+bilateral+pelvic+neurectomy+on+cervical+ripening+in+pregnant+rats.">The effect of bilateral pelvic neurectomy on cervical ripening in pregnant rats.</a> Journal Of Perinatal Medicine. 37, 263-269 (2009).</li><li>Pierce, S. L., Kutschke, W., Cabeza, R., England, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+intrauterine+pressure+by+telemetry:+a+new+approach+for+studying+parturition+in+mouse+models.">In vivo measurement of intrauterine pressure by telemetry: a new approach for studying parturition in mouse models.</a> Physiol Genomics. 42, 310-316 (2010).</li><li>Imamura, T., Luedke, C. E., Vogt, S. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+the+onset+of+murine+parturition+by+competing+ovarian+and+uterine+effects.">Oxytocin modulates the onset of murine parturition by competing ovarian and uterine effects.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 279, R1061-R1067 (2000).</li><li>McCloskey, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inwardly+rectifying+K++channel+KIR7.1+controls+uterine+excitability+throughout+pregnancy.">The inwardly rectifying K+ channel KIR7.1 controls uterine excitability throughout pregnancy.</a> EMBO Mol Med. 6 (9), 1161-1174 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Les enquêtes sur la contractilité du myomètre se sont appuyés sur des mesures ex vivo de la tension musculaire. Cette méthodologie peut être utile pour tester un stade précoce des utérotoniques nouvellement développés qui ne peuvent pas être administrés aux animaux vivants. Cependant, les approches in vivo sont nécessaires pour comprendre longitudinalement la progression du travail. Les mesures in vivo ont plusieurs buts. D&#39;abord, ils permettent la capture d&#39;une image comp...

La prématurité est la principale cause de morbidité et de mortalité dans les pays développés périnatale; il est responsable de 50% de la morbidité périnatale et 75% des 1,2 de mortalité périnatale. Le travail prématuré est multiforme et peut être idiopathique. Bien que beaucoup de recherches ont vu le jour sur les voies moléculaires et électriques transformant le myomètre partir d&#39;un tissu de repos dans un contractile une, la physiopathologie exacte du travail prématuré reste insaisissable. Endocriniennes, inflammatoires, et la régulation des gènes ont tous été liés à travail prématuré 3,4. Toutefois, les préoccupations éthiques limitent la capacité de mener des recherches sur les mécanismes de travail prématuré chez les humains. Compte tenu de ces limitations, de nombreux chercheurs se sont tournés vers des souris en tant que système modèle pour l&#39;étude de la physiologie de la parturition. Les souris ont gestations courtes durée d&#39;environ trois semaines et peuvent être facilement manipulées génétiquement. En outre, des modèles de souris génétiques multiples ontété développé pour déterminer les voies de signalisation qui sont essentiels pour le travail 5. Malgré les différences clés entre la souris et la parturition humaine, les souris et les humains partagent bon nombre des mêmes mécanismes qui sont essentiels pour le travail, y compris l&#39;inflammation et l&#39;infection intra-utérine de six. Ainsi, les souris servent un outil précieux pour examiner l&#39;activité utérine. À ce jour, l&#39;étalon-or pour mesurer la contractilité utérine chez la souris a été ex vivo enregistrements de tension isométrique; cependant, ce est limité à un point de temps gestationnel par expérience et nécessite ablation de l&#39;utérus de son environnement physiologique. Un autre facteur important est le grand nombre d&#39;animaux requis pour ces enquêtes. Enfin, cette méthode ne permet pas d&#39;études longitudinales sur l&#39;induction du travail et physiopathologie prématuré. Les récents progrès réalisés dans les dispositifs de télémétrie radiométriques utilisées pour étudier la pression artérielle de modification se 7 chez la souris et intrauterine pression chez les rats 8 pria la question de savoir si la même technologie pourrait être utilisée pour étudier les changements dans la pression intra-utérine chez la souris pendant la grossesse. Après dépannage initial, une méthode a été développée avec succès pour mesurer l&#39;induction du travail et la progression dans une souris. Cette approche in vivo peut mesurer la transition de l&#39;état de l&#39;utérus à l&#39;état de repos indicative des contractions du travail énergiques haute pression basse pression. Cette méthode a également été en mesure de détecter des différences de pression significatives entre les souris transgéniques avec parturition compromise et souris de type sauvage, ce qui démontre l&#39;effet physiologique de l&#39;expression du gène 9. Ce protocole fournit en temps réel, dans la méthode in vivo pour étudier la pression de l&#39;utérus de la souris pendant la grossesse.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:105px;">Company</td>
			<td style="width:147px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:207px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Surgical Glue</td>
			<td style="width:105px;">3M Vetbond</td>
			<td style="width:147px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Adhesive--stored in Drierite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">J212H</td>
			<td>Vicryl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Non-absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">8706H</td>
			<td>Prolene</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water Jacket Blanket + Heating Pad</td>
			<td style="width:105px;">Gaymer</td>
			<td style="width:147px;">T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC</td>
			<td>Specialized for rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bead sterilizer</td>
			<td style="width:105px;">Keller</td>
			<td style="width:147px;">Z378577</td>
			<td>Steri 250 Sterilizer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Disecting Microscope</td>
			<td style="width:105px;">Nikon</td>
			<td style="width:147px;">SMZ754</td>
			<td>Fibre optic gooseneck external light source</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:245px;">Sterile Surgical Gloves--Latex&#160;</td>
			<td style="width:105px;">Cardinal Health Triflex</td>
			<td style="width:147px;">2D7253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">270-0135-001</td>
			<td style="width:207px;">TA11PA-C10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Telemeter Reciever</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">272-6001-001</td>
			<td style="width:207px;">RPC-1</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">271-0147-141</td>
			<td>Analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Diet Recovery Gel</td>
			<td style="width:105px;">Clear H2O</td>
			<td style="width:147px;">72-01-5022</td>
			<td>Purified Soft Diet for Rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tergazyme</td>
			<td style="width:105px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z273287</td>
			<td>Enzyme detergent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrauterine telemetry to measure mouse contractile pressure in vivo

Une intégration complexe des signaux moléculaires et électriques est nécessaire pour transformer une matrice de repos dans un organe contractile à la fin de la grossesse. Malgré la découverte de régulateurs clés de la contractilité utérine, ce processus ne est pas encore entièrement compris. Les souris transgéniques offrent un modèle idéal pour étudier la parturition. Auparavant, la seule méthode pour étudier la contractilité utérine chez la souris était ex vivo des enregistrements de tension isométrique, qui sont sous-optimaux pour plusieurs raisons. L&#39;utérus doit être retiré de son environnement physiologique, un cours d&#39;une durée limitée de l&#39;enquête est possible, et les souris doit être sacrifié. Le développement récent de la télémétrie radiométrique a permis longitudinales, mesures en temps réel de la pression intra-utérin in vivo chez la souris. Ici, l&#39;implantation intra-utérine d&#39;un télémètre pour mesurer les changements de pression dans l&#39;utérus de la souris à partir de la mi-gestation jusqu&#39;à la livraison est décrite. En comparant les différences dans la pressemesu- entre le type sauvage et des souris transgéniques, l&#39;impact physiologique d&#39;un gène d&#39;intérêt peuvent être élucidés. Cette technique devrait accélérer le développement de produits thérapeutiques utilisés pour traiter les troubles myométriales pendant la grossesse, y compris le travail prématuré.

En temps réel des pressions intra-utérins vivo peut être enregistrée en utilisant un système d&#39;acquisition télémétrique. échantillonnage de pression associé à l&#39;enregistrement simultané de la vidéo de la souris a été utilisé pour capturer l&#39;heure exacte de la prestation de chaque chiot et corréler délai de livraison à la pression intra-utérine de la mère. Tous les points de données peuvent ensuite être tracées tout au long de l&#39;enregistrement afin de générer un...

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Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Télémétrie intra-utérine mesurer souris contractile pression<em&gt; In Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

9.5K vues.  Washington University in St. Louis. This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy. 