This work was supported by funding from the March of Dimes FY12-133 (S.K.E.) and the National Institutes of Health R01HD037831 (S.K.E.). We would like to thank Dr. Deborah Frank for critical review of the manuscript.

NOTE: Toutes les procédures d&#39;animaux conformes aux lignes directrices pour les soins et l&#39;utilisation des animaux énoncées par les National Institutes of Health. Tous les protocoles ont été approuvés par le Comité des études animales de l&#39;Université Washington à St. Louis. REMARQUE: matériaux et équipements spécifiques pour ce protocole sont répertoriés Matériaux et table Équipement. 1. Elevage Timed de souris femelles <ol><li> Race femelles adultes entre deux et six mois dans une fenêtre de temps de deux heures avec les hommes. H de reproduction spécifiques ne sont pas nécessaires dans la mesure où ils sont maintenus uniforme pour la totalité de l&#39;expérience. </li><li> Confirmer la grossesse par la présence d&#39;un bouchon de copulation. Désigner la journée et h sur laquelle le bouchon est d&#39;abord considéré comme jour post-coït 0 (dpc0). Rappelez-vous l&#39;heure spécifique lors du démarrage de l&#39;enregistrement de pression. </li><li> Effectuer des chirurgies sur dpc8-13. Le DPC exact dépendra de la souche de souris. </li><li> Pour déterminer si une souris est enceinte avant la chirurgie, perform imagerie par ultrasons de l&#39;abdomen avec une sonde à réseau linéaire 40 MHz couplé à un système de formation d&#39;image avant d&#39;administrer l&#39;anesthésie. Cela permettra la visualisation de sacs gestationnel. Si un système à ultrasons ne est pas disponible, utiliser le poids de la souris. REMARQUE: Un gain de poids d&#39;au moins 2 g entre dpc0 et dpc8 et une distension de l&#39;abdomen est un bon indicateur de la grossesse. </li></ol> 2. télémétrie chirurgie Prep <ol><li> Utilisez un autoclave pour stériliser les instruments, de la gaze, des cotons-tiges, champs opératoires, et des embouts de pipette dans les 24 heures avant la chirurgie. </li><li> Surface de la chirurgie propre avec 70% d&#39;éthanol. </li><li> Allumez coussin chauffant (spécialisée pour les rongeurs) et stérilisateur à billes. </li></ol> 3. Chirurgie télémétrie <ol><li> Pour l&#39;anesthésie, 4-5% d&#39;isoflurane utiliser avec un débit d&#39;oxygène de 1 à 2 L / min. </li><li> Attendez jusqu&#39;à ce que la souris montre des signes d&#39;anesthésie puis injecter sous-cutanée avec la buprénorphine (analgésique: 0,1 ml par 20 g). </li><li> Raser l&#39;abdomen de la souris à partir du fond des nervures vers le bas de la vessie. </li><li> Apportez la souris à la table de chirurgie sur coussin chauffant préchauffé, et couvrir les yeux de la souris avec une pommade ophtalmique pour éviter le dessèchement. </li><li> Commencez technique stérile. Mettez des gants stériles et de garder l&#39;emballage comme une surface stérile sur lequel placer les iode et de l&#39;éthanol gommages. </li><li> Retirer le télémètre de l&#39;emballage ou de solution saline et d&#39;utiliser des pinces stériles pour le placer sur une gaze stérile. <ol><li> Utilisez la seringue (fourni par le fournisseur de télémètre) pour remplir l&#39;extrémité du cathéter avec du gel. Pressez doucement le cathéter créer assez de pression négative pour attirer le gel dans le cathéter. </li></ol></li><li> Placez une pointe stérile sur la pipette. Pipette 2 pi de colle chirurgicale et mettre la pipette sur une surface stérile. </li><li> Pour nettoyer le site chirurgical, nettoyer la surface avec de l&#39;iode, puis avec 70% d&#39;éthanol. </li><li> Découper un trou dans le drap chirurgical juste assez grandpour la zone nécessaire pour l&#39;incision et la placer sur la souris. </li><li> Effectuer une pincée de pied (réponse de la pédale) pour assurer la souris est complètement anesthésié avant de faire une incision. </li><li> Faire une petite incision verticale médiane. Ensuite, faire une incision similaires à travers le muscle de la paroi du corps sous-jacent. </li><li> Tirez doucement l&#39;utérus hors de la cavité du corps et de localiser la corne utérine contenant le plus de chiots qui sont viables. <ol><li> Facultatif - Pour plus de miARN, injecter vecteur viral dans la couche musculaire de l&#39;utérus avant l&#39;insertion de télémètre. </li></ol></li><li> Faire une petite incision à la pointe de la corne utérine avec 3 mm avant-gardistes ciseaux à ressort. </li><li> Enfiler le cathéter, sans serrer, entre la paroi utérine et sacs fœtales. Insérez le cathéter passé plusieurs sacs de réduire son retrait accidentel. Assurez-vous que les sacs fœtales ne sont pas perturbés par l&#39;insertion. </li><li> Pipeter la colle chirurgicale à l&#39;emplacement d&#39;insertion télémétrique pour faire adhérer le cathéter à l&#39;ucorne terine et empêcher le cathéter de glisser hors de la corne de l&#39;utérus. Attendez quelques secondes pour que la colle à devenir rigide, puis placer soigneusement l&#39;utérus à l&#39;intérieur de la cavité corporelle. </li><li> Placez le télémètre dans la cavité du corps de l&#39;autre côté du site d&#39;insertion du cathéter. </li><li> Suturer la cavité du corps fermée avec 6,0 sutures absorbables. Tout d&#39;abord, faire un point de la bourse, puis de trois à quatre points individuels. </li><li> Suturer la peau en utilisant la même technique, mais avec 6-0 suture non absorbable. </li><li> Swab dibucaïne (analgésique topique) pommade sur le site de l&#39;incision. </li><li> Injecter 0,3 à 0,4 ml de solution saline stérile voie sous-cutanée pour aider à réhydrater l&#39;animal. </li><li> Surveiller l&#39;animal après la chirurgie jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit complètement réveillé. Ne placez pas la souris dans sa cage jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit en mesure de tenir librement la tête hors de la table, comme certains types de litière peuvent suffoquer une souris lourdement anesthésié. Pour une souris qui a été anesthésiés pendant 30-45 min, on devrait se attendre ee souris pour être pleinement éveillé par 1 h et 15 min. </li><li> Si vous effectuez des interventions chirurgicales supplémentaires, essuyez instruments avec 70% d&#39;éthanol et perles stériliser avant de les réutiliser. </li></ol> 4. Publier chirurgie Recovery <ol><li> Surveiller les progrès quotidienne post-chirurgicale dans un journal. Catalogue gain de poids et la perte et de regarder pour la léthargie, des saignements ou une fermeture incomplète de l&#39;incision chirurgicale. <ol><li> Nourrir le chow de la souris adoucie de la souris (~ la consistance de compote de pommes) ou spécialisée régime alimentaire de récupération. </li><li> Examiner les sutures et se assurer qu&#39;ils ne sont pas retirés, mais essayez de ne pas manipuler la souris trop. </li></ol></li></ol> 5. télémétrie Enregistrement <ol><li> Le jour d&#39;intérêt (au moins deux à trois jours après que la souris a récupéré de la chirurgie), placez un aimant près de la souris pour tourner sur le télémètre. Mettez la cage de la souris sur le récepteur. La lumière sur le récepteur devrait se allumer si le télémètre est activée. </li><li> Calibrer Teleme nouvelle marque<html> TER avec étalonnages spécifiques du fabricant fournies. Réutilisés télémètre spécifications d&#39;étalonnage seront conservées dans le logiciel. </li><li> Dans le logiciel, démarrer l&#39;enregistrement en un clic droit sur &quot;animal&quot; et cliquez sur &quot;commencer l&#39;échantillonnage, continue», ce qui permet un échantillonnage à des débits allant jusqu&#39;à 500 Hz. Assurez-vous que le logiciel est réglé pour enregistrer et retracer. REMARQUE: Lorsque l&#39;icône de la souris d&#39;échantillonnage se allume en vert, les pressions sont enregistrées. Troubler la souris pendant l&#39;accouchement peut interrompre ou modifier le travail, afin d&#39;observer avec prudence. </li><li> Après l&#39;accouchement ou période de temps d&#39;intérêt, arrêtez l&#39;enregistrement en cliquant droit sur &quot;animal&quot; et en sélectionnant &quot;arrêter les enregistrements, tous&quot;. Utilisez un aimant pour éteindre télémètre pour sauver la vie de la batterie, que la batterie du télémètre sera généralement ne dure 1,5 mois d&#39;enregistrement continu. </li><li> Euthanasier la souris en CO 2 surdosage et de récupérer le télémètre. Les chiots sont euthanasiés par décapitation. </li></ol>TLE &quot;&gt; 6. Telemeter Stérilisation <ol><li> Placez le télémètre à une solution de 1% de détergent enzymatique dans de l&#39;eau désionisée pendant une nuit à température ambiante. </li><li> Rincer le télémètre dans de l&#39;eau déminéralisée et enlever tous les tissus et de la colle, en faisant attention de ne pas presser le cathéter. </li><li> Incuber le télémètre à 2% de glutaraldéhyde pendant 24 heures à la température ambiante à stériliser. </li><li> Rincer le télémètre avec une solution saline stérile et stocker dans une solution saline stérile jusqu&#39;à la prochaine implantation ou être renvoyé au fabricant à être rénové. Télémètres devraient être remis à neuf si le tissu est situé à l&#39;intérieur du cathéter après stérilisation. Typiquement télémètres peuvent être utilisés 4-5 fois avant de devoir être rénové. </li></ol>

<ol>
	<li>Slattery, M. M., Morrison, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+delivery.">Preterm delivery.</a> Lancet. 360, 1489-1497 (2002).</li><li>Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+causes+of+preterm+birth.">Epidemiology and causes of preterm birth.</a> Lancet. 371, 75-84 (2008).</li><li>Keelan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+inhibition+of+inflammatory+pathways+for+the+prevention+of+preterm+birth.">Pharmacological inhibition of inflammatory pathways for the prevention of preterm birth.</a> Journal Of Reproductive Immunology. 88, 176-184 (2011).</li><li>Voltolini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+spontaneous+preterm+birth:+from+underlying+mechanisms+to+predictive+and+preventive+interventions.">Understanding spontaneous preterm birth: from underlying mechanisms to predictive and preventive interventions.</a> Reproductive Sciences. 20, 1274-1292 (2013).</li><li>Ratajczak, C. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+parturition+biology+from+genetically+altered+mice.">Insights into parturition biology from genetically altered mice.</a> Pediatric research. 64, 581-589 (2008).</li><li>Rajakumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+HIF-1+alpha,+HIF-2+alpha,+membrane+and+soluble+VEGF+receptor-1+proteins+are+not+increased+in+normotensive+pregnancies+complicated+by+late-onset+intrauterine+growth+restriction.">Placental HIF-1 alpha, HIF-2 alpha, membrane and soluble VEGF receptor-1 proteins are not increased in normotensive pregnancies complicated by late-onset intrauterine growth restriction.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 293, (2007).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.+American+journal+of+physiology.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American journal of physiology.</a> Heart And Circulatory Physiology. 286, H2408-H2415 (2004).</li><li>Mackay, L. B., Shi, L. B., Maul, H. .., Maner, W. L., Garfield, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+bilateral+pelvic+neurectomy+on+cervical+ripening+in+pregnant+rats.">The effect of bilateral pelvic neurectomy on cervical ripening in pregnant rats.</a> Journal Of Perinatal Medicine. 37, 263-269 (2009).</li><li>Pierce, S. L., Kutschke, W., Cabeza, R., England, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+intrauterine+pressure+by+telemetry:+a+new+approach+for+studying+parturition+in+mouse+models.">In vivo measurement of intrauterine pressure by telemetry: a new approach for studying parturition in mouse models.</a> Physiol Genomics. 42, 310-316 (2010).</li><li>Imamura, T., Luedke, C. E., Vogt, S. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+the+onset+of+murine+parturition+by+competing+ovarian+and+uterine+effects.">Oxytocin modulates the onset of murine parturition by competing ovarian and uterine effects.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 279, R1061-R1067 (2000).</li><li>McCloskey, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inwardly+rectifying+K++channel+KIR7.1+controls+uterine+excitability+throughout+pregnancy.">The inwardly rectifying K+ channel KIR7.1 controls uterine excitability throughout pregnancy.</a> EMBO Mol Med. 6 (9), 1161-1174 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Les enquêtes sur la contractilité du myomètre se sont appuyés sur des mesures ex vivo de la tension musculaire. Cette méthodologie peut être utile pour tester un stade précoce des utérotoniques nouvellement développés qui ne peuvent pas être administrés aux animaux vivants. Cependant, les approches in vivo sont nécessaires pour comprendre longitudinalement la progression du travail. Les mesures in vivo ont plusieurs buts. D&#39;abord, ils permettent la capture d&#39;une image comp...

La prématurité est la principale cause de morbidité et de mortalité dans les pays développés périnatale; il est responsable de 50% de la morbidité périnatale et 75% des 1,2 de mortalité périnatale. Le travail prématuré est multiforme et peut être idiopathique. Bien que beaucoup de recherches ont vu le jour sur les voies moléculaires et électriques transformant le myomètre partir d&#39;un tissu de repos dans un contractile une, la physiopathologie exacte du travail prématuré reste insaisissable. Endocriniennes, inflammatoires, et la régulation des gènes ont tous été liés à travail prématuré 3,4. Toutefois, les préoccupations éthiques limitent la capacité de mener des recherches sur les mécanismes de travail prématuré chez les humains. Compte tenu de ces limitations, de nombreux chercheurs se sont tournés vers des souris en tant que système modèle pour l&#39;étude de la physiologie de la parturition. Les souris ont gestations courtes durée d&#39;environ trois semaines et peuvent être facilement manipulées génétiquement. En outre, des modèles de souris génétiques multiples ontété développé pour déterminer les voies de signalisation qui sont essentiels pour le travail 5. Malgré les différences clés entre la souris et la parturition humaine, les souris et les humains partagent bon nombre des mêmes mécanismes qui sont essentiels pour le travail, y compris l&#39;inflammation et l&#39;infection intra-utérine de six. Ainsi, les souris servent un outil précieux pour examiner l&#39;activité utérine. À ce jour, l&#39;étalon-or pour mesurer la contractilité utérine chez la souris a été ex vivo enregistrements de tension isométrique; cependant, ce est limité à un point de temps gestationnel par expérience et nécessite ablation de l&#39;utérus de son environnement physiologique. Un autre facteur important est le grand nombre d&#39;animaux requis pour ces enquêtes. Enfin, cette méthode ne permet pas d&#39;études longitudinales sur l&#39;induction du travail et physiopathologie prématuré. Les récents progrès réalisés dans les dispositifs de télémétrie radiométriques utilisées pour étudier la pression artérielle de modification se 7 chez la souris et intrauterine pression chez les rats 8 pria la question de savoir si la même technologie pourrait être utilisée pour étudier les changements dans la pression intra-utérine chez la souris pendant la grossesse. Après dépannage initial, une méthode a été développée avec succès pour mesurer l&#39;induction du travail et la progression dans une souris. Cette approche in vivo peut mesurer la transition de l&#39;état de l&#39;utérus à l&#39;état de repos indicative des contractions du travail énergiques haute pression basse pression. Cette méthode a également été en mesure de détecter des différences de pression significatives entre les souris transgéniques avec parturition compromise et souris de type sauvage, ce qui démontre l&#39;effet physiologique de l&#39;expression du gène 9. Ce protocole fournit en temps réel, dans la méthode in vivo pour étudier la pression de l&#39;utérus de la souris pendant la grossesse.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:105px;">Company</td>
			<td style="width:147px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:207px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Surgical Glue</td>
			<td style="width:105px;">3M Vetbond</td>
			<td style="width:147px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Adhesive--stored in Drierite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">J212H</td>
			<td>Vicryl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Non-absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">8706H</td>
			<td>Prolene</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water Jacket Blanket + Heating Pad</td>
			<td style="width:105px;">Gaymer</td>
			<td style="width:147px;">T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC</td>
			<td>Specialized for rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bead sterilizer</td>
			<td style="width:105px;">Keller</td>
			<td style="width:147px;">Z378577</td>
			<td>Steri 250 Sterilizer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Disecting Microscope</td>
			<td style="width:105px;">Nikon</td>
			<td style="width:147px;">SMZ754</td>
			<td>Fibre optic gooseneck external light source</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:245px;">Sterile Surgical Gloves--Latex&#160;</td>
			<td style="width:105px;">Cardinal Health Triflex</td>
			<td style="width:147px;">2D7253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">270-0135-001</td>
			<td style="width:207px;">TA11PA-C10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Telemeter Reciever</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">272-6001-001</td>
			<td style="width:207px;">RPC-1</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">271-0147-141</td>
			<td>Analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Diet Recovery Gel</td>
			<td style="width:105px;">Clear H2O</td>
			<td style="width:147px;">72-01-5022</td>
			<td>Purified Soft Diet for Rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tergazyme</td>
			<td style="width:105px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z273287</td>
			<td>Enzyme detergent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrauterine telemetry to measure mouse contractile pressure in vivo

Une intégration complexe des signaux moléculaires et électriques est nécessaire pour transformer une matrice de repos dans un organe contractile à la fin de la grossesse. Malgré la découverte de régulateurs clés de la contractilité utérine, ce processus ne est pas encore entièrement compris. Les souris transgéniques offrent un modèle idéal pour étudier la parturition. Auparavant, la seule méthode pour étudier la contractilité utérine chez la souris était ex vivo des enregistrements de tension isométrique, qui sont sous-optimaux pour plusieurs raisons. L&#39;utérus doit être retiré de son environnement physiologique, un cours d&#39;une durée limitée de l&#39;enquête est possible, et les souris doit être sacrifié. Le développement récent de la télémétrie radiométrique a permis longitudinales, mesures en temps réel de la pression intra-utérin in vivo chez la souris. Ici, l&#39;implantation intra-utérine d&#39;un télémètre pour mesurer les changements de pression dans l&#39;utérus de la souris à partir de la mi-gestation jusqu&#39;à la livraison est décrite. En comparant les différences dans la pressemesu- entre le type sauvage et des souris transgéniques, l&#39;impact physiologique d&#39;un gène d&#39;intérêt peuvent être élucidés. Cette technique devrait accélérer le développement de produits thérapeutiques utilisés pour traiter les troubles myométriales pendant la grossesse, y compris le travail prématuré.

En temps réel des pressions intra-utérins vivo peut être enregistrée en utilisant un système d&#39;acquisition télémétrique. échantillonnage de pression associé à l&#39;enregistrement simultané de la vidéo de la souris a été utilisé pour capturer l&#39;heure exacte de la prestation de chaque chiot et corréler délai de livraison à la pression intra-utérine de la mère. Tous les points de données peuvent ensuite être tracées tout au long de l&#39;enregistrement afin de générer un...

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Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Télémétrie intra-utérine mesurer souris contractile pression<em&gt; In Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

intrauterine-telemetry-to-measure-mouse-contractile-pressure-in-vivo

Research

JoVE Journal

Medicine

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

9.6K vues.  Washington University in St. Louis. This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy. 

Vidéo: Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

La ventilation à pression contrôlée pour induire lésion pulmonaire aiguë chez la souris

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

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Médecine

Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ultrasound and fetal echocardiography. Increasingly, these imaging modalities are being employed clinically to examine cardiac function and assess wellbeing in utero, thereby guiding timing of birth decisions. Here, we used a rabbit model of IUGR that allows analysis of cardiac function in a clinically relevant way. Using isoflurane induced anesthesia, IUGR is surgically created at gestational age day 25 by performing a laparotomy, exposing the bicornuate uterus and then ligating 40-50% of uteroplacental vessels supplying each gestational sac in a single uterine horn. The other horn in the rabbit bicornuate uterus serves as internal control fetuses. Then, after recovery at gestational age day 30 (full term), the same rabbit undergoes examination of fetal cardiac function. Anesthesia is induced with ketamine and xylazine intramuscularly, then maintained by a continuous intravenous infusion of ketamine and xylazine to minimize iatrogenic effects on fetal cardiac function. A repeat laparotomy is performed to expose each gestational sac and a microultrasound examination (VisualSonics VEVO 2100) of fetal cardiac function is performed. Placental insufficiency is evident by a raised pulsatility index or an absent or reversed end diastolic flow of the umbilical artery Doppler waveform. The ductus venosus and middle cerebral artery Doppler is then examined. Fetal echocardiography is performed by recording B mode, M mode and flow velocity waveforms in lateral and apical views. Offline calculations determine standard M-mode cardiac variables, tricuspid and mitral annular plane systolic excursion, speckle tracking and strain analysis, modified myocardial performance index and vascular flow velocity waveforms of interest. This small animal model of IUGR therefore affords examination of in utero cardiac function that is consistent with current clinical practice and is therefore useful in a translational research setting.

We describe examination of fetal cardiac function with contemporary functional fetal echocardiography and fetoplacental Doppler ultrasound using the VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in a surgically induced model of intrauterine fetal growth restriction in a rabbit.

L&#39;échocardiographie fœtale et Pulsed-ondes ultrasons Doppler dans un modèle de lapin de la restriction de croissance intra-utérine

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

In vivo 19 F IRM pour le suivi cellulaire

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Accuracy in Dental Medicine, A New Way to Measure Trueness and Precision

Reference scanners are used in dental medicine to verify a lot of procedures. The main interest is to verify impression methods as they serve as a base for dental restorations. The current limitation of many reference scanners is the lack of accuracy scanning large objects like full dental arches, or the limited possibility to assess detailed tooth surfaces. A new reference scanner, based on focus variation scanning technique, was evaluated with regards to highest local and general accuracy. A specific scanning protocol was tested to scan original tooth surface from dental impressions. Also, different model materials were verified. The results showed a high scanning accuracy of the reference scanner with a mean deviation of 5.3 &#177; 1.1 &#181;m for trueness and 1.6 &#177; 0.6 &#181;m for precision in case of full arch scans. Current dental impression methods showed much higher deviations (trueness: 20.4 &#177; 2.2 &#181;m, precision: 12.5 &#177; 2.5 &#181;m) than the internal scanning accuracy of the reference scanner. Smaller objects like single tooth surface can be scanned with an even higher accuracy, enabling the system to assess erosive and abrasive tooth surface loss. The reference scanner can be used to measure differences for a lot of dental research fields. The different magnification levels combined with a high local and general accuracy can be used to assess changes of single teeth or restorations up to full arch changes.

Accuracy is a major demand in dental medicine. To verify accuracy, reference scanners are needed. This article presents a new reference scanner with an adjusted scanning method to acquire a broad variety of dental morphologies with high trueness and precision.

Précision en médecine dentaire, une nouvelle façon de mesurer la justesse et fidélité

Reference scanners are used in dental medicine to verify a lot of procedures. The main interest is to verify impression methods as they serve as a base ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential phenotypic changes are best assessed by measurement of the changes in lung elasticity. To best understand specific mechanisms underlying such pathologies in mice, it is essential to make functional measurements that can reflect the developing pathology. Although there are many ways to measure elasticity, the classical method is that of the total lung pressure-volume (PV) curve done over the whole range of lung volumes. This measurement has been made on adult lungs from nearly all mammalian species dating back almost 100 years, and such PV curves also played a major role in the discovery and understanding of the function of pulmonary surfactant in fetal lung development. Unfortunately, such total PV curves have not been widely reported in the mouse, despite the fact that they can provide useful information on the macroscopic effects of structural changes in the lung. Although partial PV curves measuring just the changes in lung volume are sometimes reported, without a measure of absolute volume, the nonlinear nature of the total PV curve makes these partial ones very difficult to interpret. In the present study, we describe a standardized way to measure the total PV curve. We have then tested the ability of these curves to detect changes in mouse lung structure in two common lung pathologies, emphysema and fibrosis. Results showed significant changes in several variables consistent with expected structural changes with these pathologies. This measurement of the lung PV curve in mice thus provides a straightforward means to monitor the progression of the pathophysiologic changes over time and the potential effect of therapeutic procedures.

Here we present a protocol to simply and reliably measure the lung pressure-volume curve in mice, showing that it is sufficiently sensitive to detect phenotypic parenchymal changes in two common lung pathologies, pulmonary fibrosis and emphysema. This metric provides a means to quantify the lung&#8217;s structural changes with developing pathology.

La mesure de la courbe pression-volume dans les poumons de souris

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale behind this technique is the direct observation of the mechanical response of the TM to acute IOP elevation. Prior to scanning, IOP is measured at baseline and during IOP elevation. The limbus is scanned by spectral-domain optical coherence tomography at baseline and during IOP elevation (ophthalmodynamometer (ODM) applied at 30 g force). Scans are processed to enhance visualization of the aqueous humor outflow pathway using ImageJ. Vascular landmarks are used to identify corresponding locations in baseline and IOP elevation scan volumes. Schlemm canal (SC) cross-sectional area (SC-CSA) and SC length from anterior to posterior along its long axis are measured manually at 10 locations within a 1 mm segment of SC. Mean inner to outer wall distance (short axis length) is calculated as the area of SC divided by its long axis length. To examine the contribution of adjacent tissues to the effect IOP elevations, measurements are repeated without and with smooth muscle relaxation with instillation of tropicamide. TM migration into SC is resisted by TM stiffness, but is enhanced by the support of its attachment to adjacent smooth muscle within the ciliary body. This technique is the first to measure the living human TM response to pressure elevation in situ under physiological conditions within the human eye.

Trabecular meshwork (TM) migration into Schlemm&#8217;s canal space can be induced by acute pressure elevation by ophthalmodynamometer, and observed by spectral domain optical coherence tomography. The goal of this method is to quantify the morphometric response of the living outflow tract to acute pressure elevation in living tissues in situ.

Trabéculum Réponse à élévation de la pression dans la vie Oeil humain

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these strategies is to examine their effects on heart function. There are several techniques to measure in vivo cardiac mechanics (e.g., echocardiography, pressure/volume relations, etc.). Compared to echocardiography, real-time left ventricular (LV) pressure/volume analysis via catheterization is more precise and insightful in assessing LV function. Additionally, LV pressure/volume analysis provides the ability to instantaneously record changes during manipulations of contractility (e.g., &#946;-adrenergic stimulation) and pathological insults (e.g., ischemia/reperfusion injury). In addition to the maximum (+dP/dt) and minimum (-dP/dt) rate of pressure change in the LV, an accurate assessment of LV function via several load-independent indexes (e.g., end systolic pressure volume relationship and preload recruitable stroke work) can be attained. Heart rate has a significant effect on LV contractility such that an increase in the heart rate is the primary mechanism to increase cardiac output (i.e., Bowditch effect). Thus, when comparing hemodynamics between experimental groups, it is necessary to have similar heart rates. Furthermore, a hallmark of many cardiomyopathy models is a decrease in contractile reserve (i.e., decreased Bowditch effect). Consequently, vital information can be obtained by determining the effects of increasing heart rate on contractility. Our and others data has demonstrated that the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) knockout mouse has decreased contractility. Here we describe the procedure of measuring LV pressure/volume with increasing heart rates using the NOS1 knockout mouse model.

This article describes the measurement of murine left ventricular function via pressure/volume analysis at different heart rates.

Cathétérisme cardiaque chez la souris pour mesurer le volume de pression Relation: Étudier les effets Bowditch

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Development of an Algorithm to Perform a Comprehensive Study of Autonomic Dysreflexia in Animals with High Spinal Cord Injury Using a Telemetry Device

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating neurological condition characterized by somatic and autonomic dysfunctions. In particular, SCI above the mid-thoracic level can lead to a potentially life-threatening hypertensive condition called autonomic dysreflexia (AD) that is often triggered by noxious or non-noxious somatic or visceral stimuli below the level of injury. One of the most common triggers of AD is the distension of pelvic viscera, such as during bladder and bowel distension or evacuation. This protocol presents a novel pattern recognition algorithm developed for a JAVA platform software to study the fluctuations of cardiovascular parameters as well as the number, severity and duration of spontaneously occurring AD events. The software is able to apply a pattern recognition algorithm on hemodynamic data such as systolic blood pressure (SBP) and heart rate (HR) extracted from telemetry recordings of conscious and unrestrained animals before and after thoracic (T3) complete transection. With this software, hemodynamic parameters and episodes of AD are able to be detected and analyzed with minimal experimenter bias.

The catheter of a telemetry device is implanted into the abdominal aorta in order to continuously collect beat-by-beat hemodynamic data from animals pre and post-high thoracic spinal cord transection. A novel JAVA software was employed to analyze hemodynamic parameters as well as frequency and intensity of spontaneous episodes of autonomic dysreflexia.

Développement d&#39;un algorithme d&#39;exécution d&#39;une étude approfondie des Autonomic Dysréflexie chez les animaux avec High Spinal Cord Injury utilisation d&#39;un périphérique Télémétrie

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating neurological condition characterized by somatic and autonomic dysfunctions. In particular, SCI above the ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. Indeed, research focusing on the discovery of new potential therapeutic targets using genetically altered mice requires a reliable, long-term assessment of the systemic arterial pressure variation. Currently, the gold standard for obtaining long-term measurements of blood pressure in ambulatory mice uses implantable radio-transmitters, which require&#160;artery cannulation. This technique eliminates the need for tethering, restraining, or anesthetizing the animals which introduce stress and artifacts during data sampling. However, arterial blood pressure monitoring in mice via catheterization can be rather challenging due to the small size of the arteries. Here we present a step-by-step guide to illustrate the crucial key passages for a successful subcutaneous implantation of radio-transmitters and carotid artery cannulation in mice. We also include examples of long-term blood pressure activity taken from freely moving mice after a period of post-surgery recovery. Following this procedure will allow reliable direct blood pressure recordings from multiple animals simultaneously.

The goal of this protocol is to assess systemic blood pressure in conscious freely moving mice using implantable radio-telemetry devices.

Mesure la pression artérielle à long terme chez la souris Librement mobile à l&#39;aide de télémesure

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

Appauvrissement des cellules de souris de xénogreffes de tumeurs humaines améliore de manière significative l&#39;analyse en aval des cellules cibles

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...