This work was supported by funding from the March of Dimes FY12-133 (S.K.E.) and the National Institutes of Health R01HD037831 (S.K.E.). We would like to thank Dr. Deborah Frank for critical review of the manuscript.

NOTA: Tutte le procedure sugli animali rispettato le linee guida per la cura e l&#39;uso di animali previsti dal National Institutes of Health. Tutti i protocolli sono stati approvati dal comitato di Animal Studies presso la Washington University di St. Louis. NOTA: i materiali specifici e attrezzature per questo protocollo sono elencati materiali e attrezzature tavola. 1. Allevamento temporizzata di topi di sesso femminile <ol><li> Razza femmine adulte tra due e sei mesi di età in una finestra di tempo di 2 ore con i maschi. Specific hr allevamento non sono necessari, purché siano tenuti coerente per l&#39;intero esperimento. </li><li> Confermare la gravidanza dalla presenza di un tappo di copula. Designare il giorno e ora in cui la spina è la prima volta come il giorno post-coito 0 (dpc0). Ricorda l&#39;ora specifica in cui iniziare la registrazione di pressione. </li><li> Eseguire interventi chirurgici su dpc8-13. L&#39;esatta DPC dipenderà dal ceppo di topi. </li><li> Per determinare se un mouse è incinta prima dell&#39;intervento chirurgico, perform ecografia dell&#39;addome con una sonda 40 MHz array lineare accoppiato ad un sistema di imaging prima di somministrare l&#39;anestesia. Questo permetterà la visualizzazione di sacche gestazionali. Se un sistema ad ultrasuoni non è disponibile, utilizzare il peso del mouse. NOTA: Un aumento di peso di almeno 2 g tra dpc0 e dpc8 e distensione dell&#39;addome è un buon indicatore di gravidanza. </li></ol> 2. telemetria Chirurgia Prep <ol><li> Utilizzare autoclave per sterilizzare gli strumenti, garze, tamponi di cotone, teli chirurgici, e punte per pipette entro 24 ore prima dell&#39;intervento chirurgico. </li><li> Superficie chirurgia Pulire con il 70% di etanolo. </li><li> Accendere rilievo di riscaldamento (specializzato per roditori) e tallone sterilizzatrice. </li></ol> 3. telemetria Chirurgia <ol><li> Per l&#39;anestesia, usare 4-5% isoflurano con un tasso di flusso di ossigeno di 1-2 l / min. </li><li> Attendere fino a quando il mouse mostra segni di anestesia e poi iniettare per via sottocutanea con buprenorfina (analgesico: 0,1 ml per 20 g). </li><li> Radere l&#39;addome del mouse dal fondo delle nervature alla vescica. </li><li> Portare il mouse sul tavolo operatorio in rilievo di riscaldamento pre-riscaldato, e coprire gli occhi del topo con pomata oftalmica per evitare l&#39;essiccazione. </li><li> Inizia tecnica sterile. Indossare guanti sterili e mantenere l&#39;involucro come una superficie sterile su cui collocare le iodio e etanolo scrub. </li><li> Rimuovere la telemetrica dalla confezione o soluzione salina e utilizzare pinze sterili per metterlo su garza sterile. <ol><li> Usare la siringa (fornita dal fornitore telemetro) per riempire la punta del catetere con il gel. Premere delicatamente il catetere creare abbastanza pressione negativa per attirare il gel nel catetere. </li></ol></li><li> Mettere una punta sterile sulla pipetta. Pipettare 2 ml di colla chirurgica e impostare la pipetta su una superficie sterile. </li><li> Per pulire il sito chirurgico, tamponare la zona con iodio e poi con etanolo al 70%. </li><li> Tagliare un foro nella pellicola chirurgica appena sufficienteper l&#39;area necessaria per l&#39;incisione e posizionare sopra il mouse. </li><li> Eseguire un pizzico piede (risposta del pedale) per assicurare il mouse è completamente anestetizzato prima di fare un&#39;incisione. </li><li> Fai una piccola incisione verticale mediana. Avanti, fare un&#39;incisione simile attraverso il muscolo parete del corpo di fondo. </li><li> Estrarre delicatamente l&#39;utero fuori della cavità del corpo e individuare il corno uterino che contiene la maggior parte dei cuccioli che sono vitali. <ol><li> Opzionale - Per l&#39;aggiunta di miRNA, iniettare vettore virale in strato muscolare dell&#39;utero prima dell&#39;inserimento del telemetro. </li></ol></li><li> Fai una piccola incisione sulla punta del corno uterino 3 mm taglio forbici primavera bordo. </li><li> Infilare il catetere, senza stringere, tra la parete uterina e sacche fetali. Inserire il catetere passato diverse sacche di ridurre la sua rimozione accidentale. Assicurarsi che le sacche fetali non sono disturbati con l&#39;inserimento. </li><li> Pipettare la colla chirurgica al sito di inserimento telemetro per aderire il catetere alla ucorno terine e prevenire il catetere di scivolare fuori del corno uterino. Attendere qualche secondo per la colla a diventare rigido, e quindi posizionare con cura l&#39;utero indietro all&#39;interno della cavità del corpo. </li><li> Posizionare il telemetro nella cavità del corpo sul lato opposto del sito di inserimento del catetere. </li><li> Suturare la cavità del corpo chiuso con 6,0 punti di sutura riassorbibili. In primo luogo, fare un punto borsa e poi 3-4 singoli punti. </li><li> Suturare la pelle utilizzando la stessa tecnica, ma con 6-0 sutura non assorbibile. </li><li> Tampone dibucaina (analgesico topico) pomata sul sito di incisione. </li><li> Iniettare ,3-0,4 ml di soluzione fisiologica sterile per via sottocutanea per aiutare reidratare l&#39;animale. </li><li> Monitorare l&#39;animale dopo l&#39;intervento fino a quando non è completamente sveglio. Non posizionare il mouse di nuovo nella sua gabbia fino a quando è in grado di tenere libera la testa sopra il tavolo, come alcuni tipi di biancheria da letto possono soffocare un mouse molto anestetizzato. Per un mouse che è stato anestetizzato per 30-45 minuti, ci si dovrebbe aspettare the il mouse per essere completamente sveglio da 1 ora e 15 min. </li><li> Se si esegue ulteriori interventi chirurgici, pulire gli strumenti con il 70% di etanolo e tallone sterilizzare prima di riutilizzarli. </li></ol> 4. Post-chirurgia Recovery <ol><li> Monitorare quotidianamente i progressi post-chirurgico in un registro. Catalogo aumento di peso e la perdita e guardare per letargia, sanguinamento, o la chiusura incompleta della incisione chirurgica. <ol><li> Feed the Mouse ammorbidito del mouse chow (~ la consistenza di mele) o cibo specializzato dieta di recupero. </li><li> Esaminare le suture e assicurarsi che non sono tirati fuori, ma cercate di non gestire il mouse eccessivamente. </li></ol></li></ol> 5. telemetria Recording <ol><li> Il giorno di interesse (almeno due o tre giorni dopo il mouse ha recuperato da un intervento chirurgico), posizionare un magnete vicino al mouse per accendere il telemetro. Posizionare la gabbia del mouse sul ricevitore. La luce sul ricevitore dovrebbe accendersi se è attivata la telemetrica. </li><li> Calibrare nuovo di zecca Teleme<html> TERS con tarature specifiche produttore forniti. Specifiche calibrazione telemetro riutilizzati saranno tenuti in software. </li><li> All&#39;interno del software, avviare la registrazione facendo clic destro su &quot;animale&quot; e fare clic su &quot;avviare il campionamento, continua,&quot; che permette il campionamento a velocità fino a 500 Hz. Assicurarsi che il software sia impostato per salvare e risalire. NOTA: Quando l&#39;icona del mouse campionamento diventa verde, le pressioni vengono registrate. Inquietante il mouse durante la consegna può interrompere o alterare il lavoro, in modo da osservare con cautela. </li><li> Dopo la consegna o il tempo periodo di interesse, interrompere la registrazione facendo clic destro su &quot;animale&quot; e selezionando &quot;fermare le registrazioni, tutto&quot;. Utilizzare un magnete per disattivare telemetro per salvare la vita della batteria, in quanto la batteria telemetro in genere dura solo per 1,5 mesi di registrazione continua. </li><li> Euthanize il mouse da CO 2 overdose e recuperare telemetro. Pups sono sacrificati per decapitazione. </li></ol>tle &quot;&gt; 6. Telemeter Sterilizzazione <ol><li> Posizionare il telemetro in una soluzione di 1% di detergente enzimatico in una notte acqua deionizzata a temperatura ambiente. </li><li> Sciacquare il telemetro in acqua deionizzata e rimuovere il tessuto e colla, facendo attenzione a non comprimere il catetere. </li><li> Incubare telemetro a 2% glutaraldeide per 24 ore a temperatura ambiente per sterilizzare. </li><li> Sciacquare il telemetro con soluzione salina sterile e conservarla in soluzione fisiologica sterile fino al prossimo impianto o da inviare al costruttore di essere ristrutturato. Telemetri dovrebbero essere rinnovate, se il tessuto si trova all&#39;interno del catetere dopo la sterilizzazione. Tipicamente telemetri può essere utilizzato 4-5 volte prima di dover essere rinnovato. </li></ol>

<ol>
	<li>Slattery, M. M., Morrison, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+delivery.">Preterm delivery.</a> Lancet. 360, 1489-1497 (2002).</li><li>Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+causes+of+preterm+birth.">Epidemiology and causes of preterm birth.</a> Lancet. 371, 75-84 (2008).</li><li>Keelan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+inhibition+of+inflammatory+pathways+for+the+prevention+of+preterm+birth.">Pharmacological inhibition of inflammatory pathways for the prevention of preterm birth.</a> Journal Of Reproductive Immunology. 88, 176-184 (2011).</li><li>Voltolini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+spontaneous+preterm+birth:+from+underlying+mechanisms+to+predictive+and+preventive+interventions.">Understanding spontaneous preterm birth: from underlying mechanisms to predictive and preventive interventions.</a> Reproductive Sciences. 20, 1274-1292 (2013).</li><li>Ratajczak, C. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+parturition+biology+from+genetically+altered+mice.">Insights into parturition biology from genetically altered mice.</a> Pediatric research. 64, 581-589 (2008).</li><li>Rajakumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+HIF-1+alpha,+HIF-2+alpha,+membrane+and+soluble+VEGF+receptor-1+proteins+are+not+increased+in+normotensive+pregnancies+complicated+by+late-onset+intrauterine+growth+restriction.">Placental HIF-1 alpha, HIF-2 alpha, membrane and soluble VEGF receptor-1 proteins are not increased in normotensive pregnancies complicated by late-onset intrauterine growth restriction.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 293, (2007).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.+American+journal+of+physiology.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American journal of physiology.</a> Heart And Circulatory Physiology. 286, H2408-H2415 (2004).</li><li>Mackay, L. B., Shi, L. B., Maul, H. .., Maner, W. L., Garfield, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+bilateral+pelvic+neurectomy+on+cervical+ripening+in+pregnant+rats.">The effect of bilateral pelvic neurectomy on cervical ripening in pregnant rats.</a> Journal Of Perinatal Medicine. 37, 263-269 (2009).</li><li>Pierce, S. L., Kutschke, W., Cabeza, R., England, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+intrauterine+pressure+by+telemetry:+a+new+approach+for+studying+parturition+in+mouse+models.">In vivo measurement of intrauterine pressure by telemetry: a new approach for studying parturition in mouse models.</a> Physiol Genomics. 42, 310-316 (2010).</li><li>Imamura, T., Luedke, C. E., Vogt, S. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+the+onset+of+murine+parturition+by+competing+ovarian+and+uterine+effects.">Oxytocin modulates the onset of murine parturition by competing ovarian and uterine effects.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 279, R1061-R1067 (2000).</li><li>McCloskey, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inwardly+rectifying+K++channel+KIR7.1+controls+uterine+excitability+throughout+pregnancy.">The inwardly rectifying K+ channel KIR7.1 controls uterine excitability throughout pregnancy.</a> EMBO Mol Med. 6 (9), 1161-1174 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Le indagini della contrattilità miometriale hanno invocato ex vivo misurazioni di tensione muscolare. Questa metodologia può essere utile per i test in fase precoce di farmaci uterotonico nuovo sviluppo che non possono essere somministrati agli animali vivi. Tuttavia, gli approcci in vivo sono necessari per comprendere longitudinalmente la progressione del lavoro. Le misurazioni in vivo servono diversi scopi. In primo luogo, essi consentono cattura di un quadro completo delle variazioni uter...

Nascita pretermine è la principale causa di morbilità e mortalità nei paesi sviluppati perinatale; è responsabile del 50% di morbilità perinatale e il 75% di 1,2 mortalità perinatale. Parto pretermine è multiforme e può essere idiopatica. Anche se gran parte della ricerca è emerso sui percorsi molecolari ed elettrici trasformando miometrio da un tessuto quiescente in un contrattile una, la fisiopatologia esatto di parto pretermine rimane elusiva. Endocrine, infiammatorie, e regolazione genica sono stati collegati al parto pretermine 3,4. Tuttavia, le preoccupazioni etiche limitano la capacità di condurre una ricerca sui meccanismi di parto pretermine negli esseri umani. Date queste limitazioni, molti ricercatori si sono rivolti a topi come sistema modello con cui studiare la fisiologia del parto. I topi hanno brevi gestazioni durata circa tre settimane e può essere facilmente manipolato geneticamente. Inoltre, più modelli genetici di topo hannostato sviluppato per determinare le vie di segnalazione che sono essenziali per il lavoro 5. Nonostante le differenze principali tra il mouse e il parto umano, i topi e gli esseri umani condividono molti degli stessi meccanismi che sono essenziali per il lavoro, tra cui l&#39;infiammazione e infezione intrauterina 6. Così, i topi servire come uno strumento prezioso per l&#39;esame dell&#39;attività uterina. Ad oggi, il gold standard per misurare la contrattilità uterina nei topi è stato ex vivo registrazioni tensione isometrica; Tuttavia, questo è limitato ad un punto di tempo gestazionale per esperimento e richiede la rimozione dell&#39;utero dal suo ambiente fisiologico. Un altro fattore importante è il numero di animali necessari per queste indagini. Infine, questa metodologia non consente studi longitudinali che esaminano l&#39;induzione del travaglio pretermine e fisiopatologia. I recenti progressi compiuti in dispositivi di telemetria radiometriche utilizzate per studiare la pressione arteriosa modifiche 7 nei topi e intpressione rauterine in ratti 8 pregò la questione se la stessa tecnologia potrebbe essere utilizzata per studiare variazioni della pressione intrauterina nei topi durante la gravidanza. Dopo la risoluzione dei problemi iniziali, un metodo è stato sviluppato con successo per misurare l&#39;induzione del lavoro e la progressione in un mouse. Questo approccio in vivo può misurare la transizione dallo stato di bassa pressione dell&#39;utero riposo allo stato di alta pressione indicativo di contrazioni del lavoro forti. Questo metodo è stato anche in grado di rilevare le differenze di pressione significative tra topi transgenici con il parto compromessa e topi wild type, dimostrando l&#39;impatto fisiologico dell&#39;espressione genica 9. Questo protocollo fornisce in tempo reale, in modo vivo per studiare pressione topo uterina durante la gravidanza.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:105px;">Company</td>
			<td style="width:147px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:207px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Surgical Glue</td>
			<td style="width:105px;">3M Vetbond</td>
			<td style="width:147px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Adhesive--stored in Drierite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">J212H</td>
			<td>Vicryl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Non-absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">8706H</td>
			<td>Prolene</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water Jacket Blanket + Heating Pad</td>
			<td style="width:105px;">Gaymer</td>
			<td style="width:147px;">T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC</td>
			<td>Specialized for rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bead sterilizer</td>
			<td style="width:105px;">Keller</td>
			<td style="width:147px;">Z378577</td>
			<td>Steri 250 Sterilizer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Disecting Microscope</td>
			<td style="width:105px;">Nikon</td>
			<td style="width:147px;">SMZ754</td>
			<td>Fibre optic gooseneck external light source</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:245px;">Sterile Surgical Gloves--Latex&#160;</td>
			<td style="width:105px;">Cardinal Health Triflex</td>
			<td style="width:147px;">2D7253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">270-0135-001</td>
			<td style="width:207px;">TA11PA-C10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Telemeter Reciever</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">272-6001-001</td>
			<td style="width:207px;">RPC-1</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">271-0147-141</td>
			<td>Analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Diet Recovery Gel</td>
			<td style="width:105px;">Clear H2O</td>
			<td style="width:147px;">72-01-5022</td>
			<td>Purified Soft Diet for Rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tergazyme</td>
			<td style="width:105px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z273287</td>
			<td>Enzyme detergent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrauterine telemetry to measure mouse contractile pressure in vivo

È necessaria una complessa integrazione dei segnali molecolari ed elettriche per trasformare un utero quiescente in un organo contrattile alla fine della gravidanza. Nonostante la scoperta dei regolatori chiave della contrattilità uterina, questo processo non è ancora pienamente compreso. Topi transgenici forniscono un modello ideale in cui studiare il parto. In precedenza, l&#39;unico metodo per studiare contrattilità uterina nel topo era ex vivo registrazioni tensione isometrica, che sono non ottimale per diverse ragioni. L&#39;utero deve essere rimossa dal suo ambiente fisiologico, un corso di tempo limitato di indagine è possibile, e topi deve essere sacrificato. Il recente sviluppo di telemetria radiometrica ha permesso longitudinali, misure in tempo reale di in vivo pressione intrauterina nei topi. Qui, l&#39;impianto di un telemetro intrauterina per misurare le variazioni di pressione in utero del mouse da metà della gravidanza fino al parto è descritto. Con differenze confronto a stampaUres tra wild type e topi transgenici, l&#39;impatto fisiologico di un gene di interesse possono essere chiarite. Questa tecnica dovrebbe accelerare lo sviluppo di terapie usati per trattare disturbi miometriale durante la gravidanza, tra cui parto pretermine.

Tempo reale pressioni intrauterini vivo può essere registrato utilizzando un sistema di acquisizione telemetrico. Campionamento di pressione in coppia con registrazione video simultanea del mouse è stato usato per catturare il tempo della consegna esatto di ogni cucciolo e correlare i tempi di consegna per la pressione intrauterina della madre. Tutti i punti di dati possono essere tracciati durante la registrazione per generare una pressione-versus-plot tempo (Figura 1A). Questo graf...

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Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Telemetria intrauterina misurare mouse contrattile Pressione<em&gt; In Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

9.5K Views.  Washington University in St. Louis. This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy. 