Este trabalho foi financiado pelo NIH concede CA163640, CA166590, e AG041250 a LC.

Os procedimentos descritos a seguir foram aprovados pelo cuidado e uso Comitê Institucional Animal (IACUC) da Universidade Estadual de Ohio. 1. Preparação de Enriched Meio Ambiente Antes de Habitação Ratos <ol><li> A limpeza e a manutenção dos instrumentos. <ol><li> Execute o grande enriquecimento bin (120 centímetros x 90 centímetros x 76 cm) através de uma lavagem gaiola. A Biotério protocolo de lavagem gaiola típica inclui 5 a 6 ciclos de lavagem, com o último ciclo de atingir 82 ºC. Toda a lavagem deve demorar cerca de 40 min. Ar seco do lixo. <ol><li> Se o grande bin enriquecimento, e quaisquer outros instrumentos de habitação, não podem ser enviados através de lavagem gaiola, em seguida, pulverizar e limpar o interior da bin com desinfectantes esporicidas seguintes instruções do fabricante. Limpe a caixa com um a água da torneira embebido toalha de papel ou etanol a 30% e seco com uma toalha de papel para se livrar de qualquer cheiro do desinfetante anterior. </li></ol></li><li> Use plastubulação tic, iglus com rodas tipo pires, e outros brinquedos hutch-como vários plásticos na EE. Lave esses brinquedos através de uma lavagem gaiola. Se você não tem acesso a uma lavagem gaiola acompanhamento passo 1.1.1.1. </li><li> Use rodas de metal em execução na EE. Lave as rodas através de uma lavagem gaiola. Se a pintura das rodas começa a desvanecer-se, de modo que a roda ficar barulhento quando os animais correm sobre ele, aplique uma pequena quantidade de vaselina para onde a roda e axel conectar. </li><li> Use toras de madeira na EE. Limpe os logs através da remoção de qualquer cama ou outros detritos com a mão. Em seguida esterilizar por autoclavagem os logs deles em um ciclo ou ciclo têxtil seco, o qual atinge uma temperatura de 121 ° C durante 15 min. </li><li> Use gaiolas entre as dimensões de 29 centímetros x 18 cm x 12,5 centímetros e 30,5 centímetros x 19 cm x 14 centímetros para segurar um fio de alimentação e beber rack.Cut um buraco de pelo menos 5 cm de diâmetro para fora do-bottom frente da gaiola para camundongos para entrar e sair de do EE. Limpe estas gaiolas de alimentação, através de lavagem gaiola. </li></ol></li><li> Configurando o ambiente <ol><li> Despeje ¼ polegadas espiga de milho de animais de laboratório roupas de cama para a grande enriquecimento bin. Cubra a superfície andar inteiro do bin a uma profundidade de 2-2,5 cm, com roupa de cama. </li><li> Coloque dois ou três registros em um canto da caixa. Toras Lugar no canto para sequestrar uma área de cerca de 1.225 centímetros 2. Na área seqüestrado pelos registros, colocar três iglus com rodas de pires na parte superior. Certifique-se de que as rodas não estão tocando as paredes da caixa, os logs, ou uns aos outros, para que não haja espaço suficiente para as rodas para girar livremente. </li><li> Juntar as peças do tubo de plástico para que ramo múltiplos braços para fora da peça de ligação centeral. Coloque essa tubulação no meio do lixo. </li><li> Em dois cantos da caixa, colocar uma gaiola de alimentação cada um cheio com a mesma cama como o compartimento, e o orifício na parte da frente da gaiola de alimentação deve ser virada para o centro do recipiente. Em cima dessas gaiolas que alimentam um fio alimentos e água potáveldeve ser colocado para segurar comida e água. Não coloque qualquer tampa na gaiola. Colocar comida e água nos fios gaiola. </li><li> Coloque três rodas de metal no lixo, embora não todos ao lado do outro. Os três tipos diferentes de rodas são uma roda de 11,5 centímetros, uma roda de 20,5 centímetros, e uma roda de 28 centímetros. Em seguida, coloque brinquedos ou túneis hutch-like mais 4-5 de plástico em todo o bin enriquecimento. </li><li> Cubra o bin com papel de filtro micro-isolador. Use grampos da pasta para o clipe de papel de filtro para o lixo. </li><li> A novidade é importante para EE. Utilizar esta configuração como a estrutura do EE e variar a colocação de gaiolas acima mencionados, objectos e brinquedos para criar um ambiente novo para os animais. </li></ol></li></ol> 2. Habitação dos Animais <ol><li> Criar animais para experiências em habitação laboratoriais regulares e não EE. Opcionalmente, colocar os animais em EE tão cedo quanto 21 dias de idade ao desmame. Genótipo e ouvido soco / tag animais antes da habitação EE. </li><li> Ao colocaranimais para o caixote do enriquecimento de uma gaiola standard, colocar a gaiola no bin em sua lateral, para que os animais possam circular livremente na gaiola padrão para a bandeja de enriquecimento. Não permita que os materiais de nidificação para ser transferido para o caixote do enriquecimento. </li><li> Casa 10-20 animais da mesma idade, sexo e linhagem genética na EE. </li></ol> 3. Manutenção do Meio Ambiente e Observando o Ratos Durante Estudos <ol><li> Diariamente <ol><li> Tranquilamente observar os animais para sinais de doença ou sofrimento. Se necessário, segurar delicadamente os animais para inspecionar ainda mais as condições de saúde. Observações anormais de registro e consulte um técnico de saúde ou pessoal veterinário se o animal apresenta condições que exigem a remoção do experimento. </li><li> Fornecer tratamento tópico com pomada anti-bióticos triplo para pequenas feridas ou escaras. Se um animal precisa de ser removido devido a uma doença ou lesão crónica, remover o animal da experiência para eutanásia. Se os animaiscumprir os critérios de remoção antecipada para o animal investigação comitê cuidado ou veterinário supervisionando, não retornam os animais de volta para EE. </li></ol></li><li> Duas vezes por semana <ol><li> Verifique os níveis de ração e água. Certifique-se de que os alimentos ea água vai durar para os próximos 3-4 dias. Endireitar-se rodas de execução e brinquedos de enriquecimento de modo que eles estão espalhados e pode ser usado por ratinhos. Substitua os que são demasiado sujo. </li></ol></li><li> Semanal <ol><li> Substituir garrafas de água com garrafas de água limpa. Reorganizar dispositivos de enriquecimento de uma forma que segue a configuração no ponto 1.2. Ainda não é diferente da configuração da semana anterior. NOTA: Se um experimento requer que os animais sejam retirados do ambiente enriquecido para uma atividade (gravação de peso corporal, coleta de sangue, teste de comportamento, etc.) é melhor para reorganizar o ambiente enquanto os animais estão longe da bin enriquecimento. </li><li> Limpe as gaiolas de alimentação na EE à mão ou enviá-la por lavagem gaiolacomo detalhado na Seção 1.1.5. Substitua as prateleiras de arame que seguram a comida e água com prateleiras de arame limpa também. </li><li> Siga as instruções na Seção 2.2. ao colocar os animais de volta no enriquecimento. Verificar no local o resto do grande bin enriquecimento e limpo, se necessário, por escavar para fora de areia suja e se espalhando para baixo nova roupa de cama limpa. </li></ol></li><li> Bi-semanal <ol><li> Durante a realização da criação semanal, limpar os brinquedos à mão ou enviar através de lavagem gaiola como detalhado na Seção 1.1.2. Se necessário, colocar os murganhos na gaiola de um micro-isolador padrão para o tempo requerido para limpar. </li></ol></li><li> Mensal <ol><li> Limpe a maioria da maca para fora, movendo brinquedos de enriquecimento e alimentando gaiolas e escavar para fora da maca. Substitua com cama fresca. Certifique-se de que não há uma polegada de cama em todas as áreas da gaiola. Se necessário, colocar os murganhos na gaiola de um micro-isolador padrão para o tempo requerido para limpar. </li></ol></li><li> De três em trêsMeses (ou No final do experimento) <ol><li> Remova todas as camas e brinquedos e limpe e desinfete o bin de enriquecimento, conforme descrito na Seção 1.1.1. Se o experimento está em curso, substitua com novas roupas, alimentação, gaiolas variedade de brinquedos e, em seguida, retornar os ratos para o lixo. </li></ol></li><li> Desinfectar todo o bin enriquecimento com mais frequência do que a cada três meses, se necessário pela instituição de pesquisa em que a EE está alojado. Se tal for necessário e um outro recipiente grande enriquecimento está disponível, configure o recipiente enriquecimento adicional, conforme detalhado na Seção 1.2. e transferir os animais para o novo recipiente, enquanto a anterior está a ser limpo. </li></ol> 4. Condições de Habitação de controle <ol><li> Casa animais do grupo controle em gaiolas micro-isoladoras de dimensões 30,5 centímetros x 19 cm x 14 cm. Incluir uma gradinha na gaiola para a realização de comida e uma garrafa de água, se a gaiola não está ligado a um sistema de rega automático. </li><li>Fornecer a mesma cama sabugo de milho na gaiola controle como é na EE. Fornecer um 4 centímetros x 4 centímetros nestlet para os ratos para fazer um ninho de fora. </li><li> Substitua e / ou limpar as gaiolas, alimentação fios, comida e água uma vez por semana. Limpe gaiolas e prateleiras de arame através de lavagem gaiola ou tão detalhado na Seção 1.1.1.1. Limpe as gaiolas mais frequentemente se animais urinar com mais frequência, ou se as fugas de água potável para a cama. </li><li> Monitorar a saúde dos animais em habitação controle diário. Assegurar os animais têm abundância de comida e água. </li><li> Casa 3 ~ 5 ratos do mesmo sexo na gaiola normal do mouse. Não forneça qualquer brinquedo, tubo, ou gaiola em gaiola. </li><li> Técnicos de saúde e de laboratório institucionais facilidade laboratório cuidados com os animais pode fornecer pecuária para estes ratinhos de controlo. </li><li> Manter os animais num ciclo claro / escuro de 12 horas de luz, como é para os ratos em EE. </li></ol>

<ol>
	<li>Cao, L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+brain-cancer+connection.">What is the brain-cancer connection.</a> Annu. Rev. Neurosci. 35, 331-345 (2012).</li><li>Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments,+experience-dependent+plasticity+and+disorders+of+the+nervous+system.">Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 697-709 (2006).</li><li>Milsum, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+the+eustress+system+for+health/illness.">A model of the eustress system for health/illness.</a> Behav. Sci. 30, 179-186 (1985).</li><li>Selye, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Stress Without Distress. , (1974).</li><li>Krech, D., Rosenzweig, M. R., Bennett, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+environmental+complexity+and+training+on+brain+chemistry.">Effects of environmental complexity and training on brain chemistry.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 53, 509-519 (1960).</li><li>Rosenzweig, M. R., Krech, D., Bennett, E. L., Diamond, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+environmental+complexity+and+training+on+brain+chemistry+and+anatomy:+A+replication+and+extension.">Effects of environmental complexity and training on brain chemistry and anatomy: A replication and extension.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 55, 429-437 (1962).</li><li>Frick, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Environmental+Enrichment+on+Spatial+Memory+and+Neurochemistry+in+Middle-Aged+Mice.">Effects of Environmental Enrichment on Spatial Memory and Neurochemistry in Middle-Aged Mice.</a> Learn. Mem. 10 (3), 187-198 (2003).</li><li>Dellen, A., Blakemore, C., Deacon, R., York, D., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delaying+the+onset+of+Huntington&#8217;s+in+mice.">Delaying the onset of Huntington&#8217;s in mice.</a> Nature. 404, 721-722 (2000).</li><li>Spires, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+rescues+protein+deficits+in+a+mouse+model+of+Huntington&#8217;s+disease,+indicating+a+possible+disease+mechanism.">Environmental enrichment rescues protein deficits in a mouse model of Huntington&#8217;s disease, indicating a possible disease mechanism.</a> J. Neurosci. 24 (9), 2270-2276 (2004).</li><li>Jankowsky, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+mitigates+cognitive+deficits+in+a+mouse+model+of+Alzheimer&#8217;s+disease.">Environmental enrichment mitigates cognitive deficits in a mouse model of Alzheimer&#8217;s disease.</a> J. Neurosci. 25 (21), 5217-5224 (2005).</li><li>Westood, J. A., Darcy, P. K., Kershaw, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+Enrichment+does+not+impact+on+tumor+growth+in+mice.">Environmental Enrichment does not impact on tumor growth in mice.</a> F1000Research. 2, 140 (2013).</li><li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF+links+hippocampal+activity+with+neurogenesis,+learning.">VEGF links hippocampal activity with neurogenesis, learning.</a> Nat. Genet. 36 (8), 827-835 (2004).</li><li>Young, D., Lawlor, P. A., Leone, P., Dragunow, M., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+inhibits+sponta-+neous+apoptosis,+prevents+seizures+and+is+neuroprotective.">Environmental enrichment inhibits sponta- neous apoptosis, prevents seizures and is neuroprotective.</a> Nat. Med. 5 (4), 448-453 (1999).</li><li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+and+genetic+activation+of+a+brain-adipocyte+BDNF/leptin+axis+causes+cancer+remission+and+inhibition.">Environmental and genetic activation of a brain-adipocyte BDNF/leptin axis causes cancer remission and inhibition.</a> Cell. 142 (1), 52-64 (2010).</li><li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+to+brown+fat+phenotypic+switch+induced+by+genetic+and+environmental+activation+of+a+hypothalamic-adipocyte+axis.">White to brown fat phenotypic switch induced by genetic and environmental activation of a hypothalamic-adipocyte axis.</a> Cell Metab. 14 (3), 324-338 (2011).</li></ol>

Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Os efeitos robustos de EE na expressão do gene no cérebro, diminuição da adiposidade e crescimento do câncer em ratos dependem fortemente da habilidade do pesquisador para manter o novo ambiente e lidar com os animais de uma forma que promove a atividade física, interação social e desafios cognitivos, ainda não aflição dos animais. Há duas etapas processuais mais importantes para se lembrar. Em primeiro lugar, lembre-se de alterar o posicionamento dos brinquedos, objetos e gaiolas cada semana. Embora os brinquedos e objectos podem ser o mesmo a partir da semana anterior, os ratinhos perceber o ambiente como novo. Alterar os brinquedos e os próprios objetos com diferentes pessoas a cada duas semanas. Em segundo lugar, lembre-se de manter o ambiente limpo. Se a cama suja não são removidos, o aumento dos níveis de azoto pode ser um stressor para os animais. Além disso, existem muitas técnicas a serem observados neste protocolo EE. O uso de brinquedos e diferente diferentes ou exclusivosdesenhos de labirintos de tubos de plástico é incentivada. O ambiente pode ser um desafio, mas não deve representar uma ameaça para a saúde dos animais. Além disso, cuidado com os brinquedos que são disfuncional, porque os brinquedos disfuncionais aumentar o risco de ser pego membros do mouse, ou pode ser tóxico para os animais se consumida pela mastigação sobre ele. Uma constante para o EE é a utilização de três rodas pires em cima de igloos, sequestradas para um canto ou lado do bin por 2-3 logs. Esta configuração de funcionamento de discos atrás dos registros está presente em todos os nossos estudos de enriquecimento. Em termos do uso e colocação de outros objetos, a descrição do esquema acima é uma cópia azul fundacional da configuração EE. Variação da configuração com este quadro fundamental de tubos de plástico, rodas de correr, correr pires, gaiolas e os logs devem proporcionar um novo ambiente suficiente para reproduzir os resultados relatados. Se estiver trabalhando com animais transgênicos que têm diabetes ou outra metabólicadoenças, preste muita atenção para o consumo de alimentos e água para garantir que os animais não ficar sem comida e água. Se os animais têm diabetes, que vai urinar mais, de modo a roupa de cama do alojamento EE pode precisar de ser local verificados e limpos com mais freqüência. Os lugares na habitação EE que precisam da cama removido na maioria das vezes são os cantos. Recorde para ajustar as rodas e outros brinquedos, de modo que possam ser usadas pelos animais. Os animais são capazes de executar rodas pires na cama e bater rodas correndo. Se os animais são jovens, de 3 a 5 semanas de idade, eles podem cavar sob as gaiolas no EE e esconder juntos sob lá, deixando o pesquisador menor idéia de onde os animais são. Ao remover cama suja, substituindo os brinquedos, ou limpar gaiolas, sugere-se a colocar os animais em uma gaiola padrão limpo para não salientar-los ao ajustar seu ambiente. É mais fácil obter todos os animais em uma gaiola, se eles têm menos lugares para se esconder no environment. Portanto, a remoção de brinquedos antes de sequestrar os animais em uma gaiola torna o processo mais fácil. Além disso, não coloque mais de 5-6 animais em uma única gaiola padrão enquanto se espera para a limpeza ou ajustar seu ambiente EE. Os animais do sexo masculino em EE pode ser agressivo particularmente quando EE é iniciada na idade adulta. Portanto, é importante observar o ambiente para quaisquer animais feridos ou mortos. Além disso, o número de animais que típico alojar em EE para esta grande tamanho do recipiente é de 10-20 ratinhos. O número de animais outros investigadores usam para EE variar, usando cerca de 10 ou menos ratinhos, e o tamanho da gaiola ou caixa deve ser tido em consideração quando se determina o número de animais para a casa em EE. Ter muitos animais em um ambiente de vida pode levar à agressão em ratos do sexo masculino. Os ratos que temos instalado em EE foram de C57BL / 6 fundos. Ratos de outras estirpes podem ser mais ou menos agressivo, ou mais propensas a problemas de saúde emesta configuração EE. Isto deve ser tomado em consideração na determinação do plano de criação para os ratos e o ambiente enriquecido. Quatro semanas EE habitação é suficiente para induzir a diminuição da adiposidade, queda do nível de leptina, e a inibição de crescimento do melanoma B16. Longer EE pode levar a efeitos mais fortes sobre o metabolismo e inibição câncer. Se os ratos submetidos a procedimentos cirúrgicos durante ou antes da exposição a EE, que pode ser alojado com suturas intactas. Quer ou não os animais respondem bem a esta configuração particular EE com grampos cirúrgicos ou cateteres intactas não foi estudado. Além disso, estamos neste momento a investigar como isto EE particular afeta a vida útil ou healthspan de animais idosos. Dados preliminares sugerem que C57BL feminino / 6 ratos, 10 meses de idade, responder à EE de forma semelhante a ratos jovens. Uma limitação do alojamento EE é que acomodam um grande bin tal no espaço facilidade animal, e preferencialmente em uma sala específica de gênero. Assim, estudos futuros sobre o FEPECTS de EE em menor escala, bem como brinquedos encontrando que são fáceis de limpar, suportar limpeza de alta temperatura e são seguros para a saúde animal, irá melhorar as aplicações da EE em metabólica e pesquisa do câncer.

O enriquecimento ambiental (EE) é um paradigma experimental usado para explorar os efeitos de um ambiente complexo e desafiador que não salientar os animais 1. EE é uma técnica de alojamento dos animais composto por aumento do espaço, atividade física, e interações sociais, que por sua vez aumenta sensorial, cognitivo, motor e estimulação social 2. Iglus, rodas de corrida, rodas pires, labirintos de tubos e outros objetos no ambiente de habitação promover esta cognitiva sensorial, social e estimulação motora através da promoção da exploração e interação. A disposição dos objetos nas mudanças de gabinete regularmente para apresentar um ambiente de romance, a que os ratos são forçados a se adaptar. Esta estratégia apresenta desafios leves e breves que induzem uma resposta adaptativa benéfico, benigno, e saudável, conhecido como eustress, em oposição a um ambiente mais aversivo, hostil ou mal adaptado angústia 3,4. Ao promover eustress e limitando aflição prejudicial, ratosmostram uma variedade de fenótipos favoráveis. EE é um modelo experimental de confiança com uma vasta gama de aplicações, sendo desprovido de elementos tradicionalmente pensados ​​como estressante 1. Os efeitos da EE sobre roedores têm sido estudados há mais de meio século. No início da década de 1960 os estudos mostraram que os níveis de colinesterase cortical diminuída e os níveis de colinesterase subcorticais aumentados em ratos que foram alojadas em ambientes com maior espaço de vida, aumento do número de ratos, e uma variedade de brinquedos de madeira, labirintos, e plataformas de 5,6. Além disso, EE está associada com muitas alterações adaptativas no cérebro, comportamento, e metabolismo em ratinhos de diferentes idades e origens genéticas. Portanto, EE é um paradigma útil para uma ampla gama de estudos experimentais sobre os efeitos do ambiente em ratinhos. Efeitos EE pode ser observado em ratos tão rapidamente como a exposição de uma semana, e pode ser observada em animais mais velho que 18 meses 7. EE é frequentemente used em experimentos de neurociência e neurocomportamentais para estudar a recuperação da função, aprendizagem e memória 2. Além disso, EE tem um impacto considerável sobre o fenótipo de uma variedade de toxina induzida e modelos animais transgénicos de doenças neurológicas humanas, incluindo a doença de Huntington, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, epilepsia, acidente vascular, e mais 2. No entanto, ao longo dos anos, houve inconsistência com o projeto de enriquecimento de fazer comparações entre estudos de diferentes laboratórios difíceis. Por exemplo, cada um dos estudos sobre os efeitos de EE em relação a doenças neurológicas humanas acima referidas tinham variando os parâmetros para o enriquecimento. O estudo sobre a doença de Huntington alojados 4-6 ratos em gaiolas (44 x 28 x 12.5 cm3) que contêm as caixas de cartão, túneis, e folhas, bem como objectos de madeira e plástico que foram alteradas a cada dois dias 8,9. Um dos estudos feitos sobre Alzheimer &amp;# 8217; s alojados 20 camundongos em uma gaiola maior (1 m 3) contendo 2 rodas de corrida, tubos de plástico, caixas de papelão e material de nidificação, que foram alteradas ou reorganizados semanal 10. Muitas configurações de EE têm temas semelhantes, como objetos para serem executados no ou esconder, mas o número de ratos por habitação EE, sala de estar, eo período de mudar o ambiente variam muito. Os projetos inconsistentes de EE levaram a replicação falhou de efeitos EE. Os nossos dados sobre o cancro e metabolismo em conjunto sugerem que a combinação de estímulos fornecidas no seguinte protocolo de ligação de habitação EE detalhada para anti-cancro significativa e efeitos anti-obesidade 14,15. No entanto, a diferença de configurações de EE adoptadas por diferentes laboratórios pode influenciar os resultados de EE, como é visto em uma tentativa falhada para reproduzir os efeitos de EE sobre o crescimento de tumores cancerosos específicos implantados em ratos 11. Os diferentes resultados poderiam ser devido a uma variedade de razões que variam from diferentes taxas de crescimento das culturas de células tumorais para o tipo de detergente utilizado para a limpeza de equipamento de alojamento 11. A fim de reproduzir os resultados observados em nossos experimentos, é necessário um projeto particular de enriquecimento e pecuária. O procedimento a seguir detalha a habitação EE que permitirá que outros pesquisadores para replicar com sucesso o nosso modelo de enriquecimento eficaz.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Large enrichment bin (120cm x 90cm x 76cm)</td>
			<td>Custom made.</td>
			<td>Custom made.</td>
			<td>Made of polypropylene. Edges of the bin are 1.5cm thick.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large enrichment bin alternative (120cm x 110cm x 76cm)</td>
			<td>Global Industrial</td>
			<td>155202</td>
			<td>If necessary, this bin works as an alternative to the one above.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Habitrail Mini tubes</td>
			<td>Habitrail</td>
			<td>62720; 62705; 62725; 62715; 62054</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic igloos with saucer wheels</td>
			<td>Bio Serv</td>
			<td>K3327; K3250</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal Running Wheels</td>
			<td>Super Pet</td>
			<td>61392; 61394; 61396</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manzanita Wood Gnawing Sticks, 3&#34;</td>
			<td>Bio Serv</td>
			<td>W0016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Tunnels</td>
			<td>Bio Serv</td>
			<td>K3322</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse cages that go in the large EE bin.</td>
			<td>Lab Products Inc</td>
			<td>10027 Mouse Cage</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cage Klenz 180 Alkaline Cage Wash Detergent, Cage Klenz 250 Acid Detergent</td>
			<td>Steris Life Sciences</td>
			<td>1K1802; 1K2502</td>
			<td>These detergents are used in the cage wash for the toys, large enrichment bins, and cages.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sporklenz</td>
			<td>Steris Life Sciences</td>
			<td>6526Q8</td>
			<td>Alternative sporicide/disinfectant to washing toys, bins, and cages in cage wash.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed-O-Cobs 1/4&#34; bedding</td>
			<td>The Andersons, Inc.</td>
			<td>4B</td>
			<td>Corn cob bedding is 1/4&#34; in diameter.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nestlets for control housed mice</td>
			<td>Ancare</td>
			<td></td>
			<td>Cotton squares</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a protocol for housing mice in an enriched environment

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent studies demonstrate that environmental enrichment decreases adiposity, increases energy expenditure, resists diet induced obesity, and causes cancer remission and inhibition in mice. EE typically consists of larger living space, a variety of &#8216;toys&#8217; to interact with, running wheels, and can include a number of other novel environmental changes. All of this fosters a more complex social engagement, cognitive and physical stimulations. Importantly, the toy location and type of toy is changed regularly, which encourages the mice to adapt to a frequently changing and novel environment. Many variables can be manipulated in EE to promote health effects in mice. Thus these approaches are difficult to control and must be properly managed to successfully replicate the associated phenotypes. Therefore, the goal of this video is to demonstrate how EE is properly set up and maintained to assure a complex, challenging, and controlled environment so that other researchers can easily reproduce the protective effects of EE against obesity and cancer.

EE afecta a expressão do factor de crescimento, aumenta a neurogénese e sobrevivência das células dentro do sistema nervoso central (SNC) 12,13. Estudos mais recentes têm mostrado que esta técnica de EE conduz a uma notável supressão de crescimento do cancro em modelos de cancro incluindo três rato B16 melanoma, cancro do cólon e MC38 APC min / rato + que contém uma mutação de linha germinal e é altamente susceptível à formação espontânea de adenoma os intestinos 14. Os resultados na Figura 2 confirmam a supressão do crescimento do tumor de melanoma B16 implantados em ratinhos expostos à EE durante 5 semanas (~ diminuição de 80% da massa tumoral). Supressão do crescimento câncer foi ainda observada em camundongos quando EE foi iniciada após o tumor tinha sido estabelecido 14. EE resultou na maior inibição de crescimento do melanoma nos ratos induzidos por dieta de alta gordura obesidade (~ 70% de diminuição de massa tumoral) do que em ratinhos de peso normal (~ 50% de diminuição de massa tumoral) 14. EE ind<html> mudanças de assinatura uced nos biomarcadores séricos, incluindo gota robusta de leptina, diminuição de IGF-1, e um aumento dos níveis de adiponectina 14. Além disso, esta técnica de EE diminui a adiposidade, aumenta o gasto energético, leva à resistência contra a obesidade induzida por dieta e induz a um branco ao marrom interruptor fenotípica gordura, ativando o eixo hipotálamo-simpatoneurais-adipócitos eixo 15. A diminuição da adiposidade foi observada a partir de seis dias expostos a EE (Figura 3A, B) e novamente confirmada em animais expostos à EE durante quatro semanas (Figura 3C e D). É também importante notar que, uma, o anti-cancro e anti-obesidade associada com EE não pode ser explicada pela actividade física sozinho, e, dois, os efeitos de EE pode ser reproduzida por sobre-expressão do factor neurotrófico derivado do cérebro (BDNF ) no hipotálamo 14,15. <html> 2874fig1.jpg &quot;/&gt; Figura 1: Enriquecido ambiente bin configurar o ambiente enriquecido tem uma área de 120 cm x 90 cm e inclui duas gaiolas modificadas, rodas de corrida, iglus com rodas pires, tubos de plástico, toras de madeira, e outros brinquedos de enriquecimento de plástico.. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig2.jpg" /> Figura 2: ambiente enriquecido reduz o crescimento de tumores em camundongos C57BL / 6 machos Três semanas de idade ratos machos eram casa em EE ou gaiolas de controlo durante 5 semanas antes da inoculação do tumor.. Os pesos dos tumores de melanoma B16 em 17 dias após a inoculação de 10 5 células por via subcutânea animais acima do flanco direito (n = 10 por grupo. Teste t de Student, * p &lt;0,05). <img alt="Figura 3a" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3a.jpg" /> <img alt="Figura 3b" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3b.jpg" /> s / ftp_upload / 52874 / 52874fig3c.jpg &quot;/&gt; <img alt="Figura 3d" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3d.jpg" /> Figura 3: enriquecida ambiente diminui a adiposidade em ratinhos C57BL / 6 do sexo masculino Três semanas ratos velhos foram submetidos a ee;. um grupo de 6 dias, durante quatro semanas mais. (A) Seis dias em EE diminuição do peso do coxim gorduroso (n = 5 por grupo. Teste t de Student, * p &lt;0,05). (B) Seis dias em EE diminuição do peso da almofada de gordura em relação ao peso corporal (n = 5 por grupo. Teste t de Student, * p &lt;0,05). (C) Quatro semanas na EE diminuição do peso do coxim gorduroso (n = 5 por grupo. Teste t de Student, * p &lt;0,05). (D) com quatro semanas de EE diminuição do peso da almofada de gordura em relação ao peso corporal (n = 5 por grupo. Teste t de Student, * p &lt;0,05). BAT: tecido adiposo marrom, IWAT: inguinal branco tecido adiposo, EWAT: tecido adiposo branco epidídimo,RWAT: tecido adiposo branco retroperitoneal.

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment at JoVE.com

A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

Environmental enrichment for mice requires a complex and challenging setup, as well as comprehensive husbandry and handling techniques to assure robust metabolic and anti-cancer effects in the mice. This protocol provides detailed procedures to reproduce the above mentioned effects in mice.

Um protocolo para alojar ratos em um ambiente enriquecido

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent ...

a-protocol-for-housing-mice-in-an-enriched-environment

Research

JoVE Journal

Behavior

18.1K visualizações.  The Ohio State University. Environmental enrichment for mice requires a complex and challenging setup, as well as comprehensive husbandry and handling techniques to assure robust metabolic and anti-cancer effects in the mice. This protocol provides detailed procedures to reproduce the above mentioned effects in mice.

Vídeo: A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

Two-photon Calcium Imaging in Mice Navigating a Virtual Reality Environment

In recent years, two-photon imaging has become an invaluable tool in neuroscience, as it allows for chronic measurement of the activity of genetically identified cells during behavior1-6. Here we describe methods to perform two-photon imaging in mouse cortex while the animal navigates a virtual reality environment. We focus on the aspects of the experimental procedures that are key to imaging in a behaving animal in a brightly lit virtual environment. The key problems that arise in this experimental setup that we here address are: minimizing brain motion related artifacts, minimizing light leak from the virtual reality projection system, and minimizing laser induced tissue damage. We also provide sample software to control the virtual reality environment and to do pupil tracking. With these procedures and resources it should be possible to convert a conventional two-photon microscope for use in behaving mice.

Here we describe the experimental procedures involved in two-photon imaging of mouse cortex during behavior in a virtual reality environment.

Dois fótons de imagem de cálcio em camundongos Navegando um ambiente da realidade virtual

In recent years, two-photon imaging has become an invaluable tool in neuroscience, as it allows for chronic measurement of the activity of genetically ...

Comportamento

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure multiple dimensions of unconditioned behavior in small laboratory mammals (e.g., mice, rats, tree shrews and small primates). This paradigm is a valuable alternative for the use of a behavioral test battery, since a broad behavioral spectrum of an animal&#8217;s behavioral profile can be investigated in one single test.
The apparatus consists of a box, representing the &#8216;protected&#8217; area, separated from a group compartment. A board, on which small cylinders are staggered in three lines, is placed in the center of the box, representing the &#8216;unprotected&#8217; area of the set-up. The cognitive abilities of the animals can be measured by baiting some cylinders on the board and measuring the working and reference memory. Other unconditioned behavior, such as activity-related-, anxiety-related- and social behavior, can be observed using this paradigm. Behavioral flexibility and the ability to habituate to a novel environment can additionally be observed by subjecting the animals to multiple trials in the mHB, revealing insight into the animals&#8217; adaptive capacities.
Due to testing order effects in a behavioral test battery, na&#239;ve animals should be used for each individual experiment. By testing multiple behavioral dimensions in a single paradigm and thereby circumventing this issue, the number of experimental animals used is reduced. Furthermore, by avoiding social isolation during testing and without the need to food deprive the animals, the mHB represents a behavioral test system, inducing if any, very low amount of stress.

This protocol describes the modified hole board, which is a behavioral test set-up that comprises the characteristics of an open field and a traditional hole board. This set-up enables the differential analysis of unconditioned behavior of small laboratory mammals as well as the analysis of cognitive abilities.

The Hole Board Modificado - Medir Comportamento, Cognição e Interação Social em camundongos e ratos

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment

The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, including neurocognitive disorders such as Alzheimer&#8217;s disease. However, the background strain of the mouse model used can have a substantial effect on the observed behavioral phenotype, with some strains exhibiting superior learning ability relative to others. To ensure differences between transgene negative and transgene positive mice can be detected, identification of a training procedure sensitive to the background strain is essential. Failure to tailor the MWM protocol to the background strain of the mouse model may lead to under- or over- training, thereby masking group differences in probe trials. Here, a MWM protocol tailored for use with the F1 FVB/N x 129S6 background is described. This is a frequently used background strain to study the age-dependent effects of mutant P301L tau (rTg(TauP301L)4510 mice) on the memory deficits associated with Alzheimer&#8217;s disease. Also described is a strategy to re-optimize, as dictated by the particular testing environment utilized.

This manuscript describes a Morris water maze (MWM) protocol tailored for use with a commonly used mouse model of Alzheimer's disease. The MWM is widely used in transgenic mouse models. Implementation of a procedure sensitive to the background strain of the mouse model is essential for detecting group differences.

Morris Water Maze Teste: Otimização para Mouse e Strain Testing Ambiente

 The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, ...

Evaluation of a Smartphone-based Human Activity Recognition System in a Daily Living Environment

An evaluation method that includes continuous activities in a daily-living environment was developed for Wearable Mobility Monitoring Systems (WMMS) that attempt to recognize user activities. Participants performed a pre-determined set of daily living actions within a continuous test circuit that included mobility activities (walking, standing, sitting, lying, ascending/descending stairs), daily living tasks (combing hair, brushing teeth, preparing food, eating, washing dishes), and subtle environment changes (opening doors, using an elevator, walking on inclines, traversing staircase landings, walking outdoors). 
To evaluate WMMS performance on this circuit, fifteen able-bodied participants completed the tasks while wearing a smartphone at their right front pelvis. The WMMS application used smartphone accelerometer and gyroscope signals to classify activity states. A gold standard comparison data set was created by video-recording each trial and manually logging activity onset times. Gold standard and WMMS data were analyzed offline. Three classification sets were calculated for each circuit: (i) mobility or immobility, ii) sit, stand, lie, or walking, and (iii) sit, stand, lie, walking, climbing stairs, or small standing movement. Sensitivities, specificities, and F-Scores for activity categorization and changes-of-state were calculated.
The mobile versus immobile classification set had a sensitivity of 86.30% &#177; 7.2% and specificity of 98.96% &#177; 0.6%, while the second prediction set had a sensitivity of 88.35% &#177; 7.80% and specificity of 98.51% &#177; 0.62%. For the third classification set, sensitivity was 84.92% &#177; 6.38% and specificity was 98.17 &#177; 0.62. F1 scores for the first, second and third classification sets were 86.17 &#177; 6.3, 80.19 &#177; 6.36, and 78.42 &#177; 5.96, respectively. This demonstrates that WMMS performance depends on the evaluation protocol in addition to the algorithms. The demonstrated protocol can be used and tailored for evaluating human activity recognition systems in rehabilitation medicine where mobility monitoring may be beneficial in clinical decision-making.

A standardized evaluation method was developed for Wearable Mobility Monitoring Systems (WMMS) that includes continuous activities in a realistic daily living environment. Testing with a series of daily living activities can decrease activity recognition sensitivity; therefore, realistic testing circuits are encouraged for valid evaluation of WMMS performance.

Avaliação de um Sistema de Reconhecimento de Atividade Humana baseado em Smartphone em uma Vida Diária Ambiente

An evaluation method that includes continuous activities in a daily-living environment was developed for Wearable Mobility Monitoring Systems (WMMS) that ...

A Method to Study Adaptation to Left-Right Reversed Audition

An unusual sensory space is one of the effective tools to uncover the mechanism of adaptability of humans to a novel environment. Although most of the previous studies have used special spectacles with prisms to achieve unusual spaces in the visual domain, a methodology for studying the adaptation to unusual auditory spaces has yet to be fully established. This study proposes a new protocol to set-up, validate, and use a left-right reversed stereophonic system using only wearable devices, and to study the adaptation to left-right reversed audition with the help of neuroimaging. Although individual acoustic characteristics are not yet implemented, and slight spillover of unreversed sounds is relatively uncontrollable, the constructed apparatus shows high performance in a 360&#176; sound source localization coupled with hearing characteristics with little delay. Moreover, it looks like a mobile music player and enables a participant to focus on daily life without arousing curiosity or drawing attention of other individuals. Since the effects of adaptation were successfully detected at the perceptual, behavioral, and neural levels, it is concluded that this protocol provides a promising methodology for studying adaptation to left-right reversed audition, and is an effective tool for uncovering the adaptability of humans to a novel environments in the auditory domain.

The present study proposes a protocol to investigate the adaptation to left-right reversed audition achieved only by wearable devices, using neuroimaging, which can be an effective tool for uncovering the adaptability of humans to a novel environment in the auditory domain.

Um método para estudar a adaptação para a esquerda-direita invertida audição

An unusual sensory space is one of the effective tools to uncover the mechanism of adaptability of humans to a novel environment. Although most of the ...

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by many patients prompts the need to develop new therapeutic alternatives and to better understand the etiology of the disorder. Pre-clinical models with translational merits are rudimentary for this task. Here we present a protocol for the unpredictable chronic mild stress (UCMS) method in mice. In this protocol, adolescent mice are chronically exposed to interchanging unpredictable mild stressors. Resembling the pathogenesis of depression in humans, stress exposure during the sensitive period of mice adolescence instigates a depressive-like phenotype evident in adulthood. UCMS can be used for screenings of antidepressants on the variety of depressive-like behaviors and neuromolecular indices. Among the more prominent tests to assess depressive-like behavior in rodents is the sucrose preference test (SPT), which reflects anhedonia (core symptom of depression). The SPT will also be presented in this protocol. The ability of UCMS to induce anhedonia, instigate long-term behavioral deficits and enable reversal of these deficits via chronic (but not acute) treatment with antidepressants strengthens the protocol&#39;s validity compared to other animal protocols for inducing depressive-like behaviors.

Here we present the unpredictable chronic mild stress protocol in mice. This protocol induces a long-term depressive-like phenotype and enables to assess the efficacy of putative antidepressants in reversing the behavioral and neuromolecular depressive-like deficits.

O protocolo de estresse suave crônico imprevisível para induzir Anhedonia em ratos

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

An Electrophysiology Protocol to Measure Reward Anticipation and Processing in Children

We present a protocol designed to measure the neural correlates of reward in children. The protocol allows researchers to measure both reward anticipation and processing. Its purpose is to create a reward task that is appropriate for young children with and without autism while controlling reward properties between two conditions: social and nonsocial. The current protocol allows for comparisons of brain activity between social and nonsocial reward conditions while keeping the reward itself identical between conditions. Using this protocol, we found evidence that neurotypical children demonstrate enhanced anticipatory brain activity during the social condition. Furthermore, we found that neurotypical children anticipate social reward more robustly than children with autism diagnoses. As the task uses snacks as a reward, it is most appropriate for young children. However, the protocol may be adapted for use with adolescent or adult populations if snacks are replaced by monetary incentives. The protocol is designed to measure electrophysiological events (event-related potentials), but it may be customized for use with eye-tracking or fMRI.

This protocol is designed to measure reward anticipation and processing in young children with and without autism. Specifically, the protocol is designed to study the neural correlates of reward during social and nonsocial conditions while controlling for reward between conditions.

Um protocolo de eletrofisiologia para medida antecipação de recompensa e processamento em crianças

We present a protocol designed to measure the neural correlates of reward in children. The protocol allows researchers to measure both reward anticipation ...

In Vivo Protocol of Controlled Subconcussive Head Impacts for the Validation of Field Study Data

Subconcussive hits pose a threat to neuronal health as they have shown to induce neuronal structural damage and functional impairment without causing outward symptomology and appear to be a key contributor to an irreversible neurodegenerative disease, chronic traumatic encephalopathy (CTE). In addition, athletes can incur more than 1,000 of these hits per season. The subconcussive soccer heading model (SSHM) is a relevant, reproducible, and leading method of isolating and examining the effects of these subconcussive head impacts. By controlling variables such as ball traveling speed, the frequency of impacts, interval, ball placement to the head, as well as by measuring head impact magnitude, the SSHM provides the scientific community with a superior avenue of investigating the acute subconcussive effects on neuronal health. In this paper, we demonstrate the utility of SSHM in studying a time-course expression of neurofilament-light polypeptide (NF-L) in plasma in a repeated measures fashion. NF-L is an axonal injury marker that has previously been shown to be elevated in boxers and football players following subconcussive head trauma. Thirty-four adult aged soccer players were recruited and randomly assigned to either a soccer heading (n = 18) or kicking (n = 16) group. The heading group executed 10 headers with soccer balls projected at a velocity of 25 mph over 10 min. The kicking group followed the same protocol with 10 kicks. Plasma samples were obtained before and at 0 h, 2 h, and 24 h after heading/kicking and assessed for NF-L expressions. The heading group showed a gradual increase in plasma NF-L expression and peaked at 24 h after the heading protocol, whereas the kicking group remained consistent across the time points. These results confirmed the NF-L data from clinical field studies, encouraging the use of SSHM to validate clinical subconcussion data.

The subconcussive soccer heading model is a safe and concise methodological approach to isolate and measure the effects of subconcussive head impacts.

No protocolo Vivo dos impactos de cabeça Subconcussive controlado para a validação dos dados do estudo de campo

Subconcussive hits pose a threat to neuronal health as they have shown to induce neuronal structural damage and functional impairment without causing ...

A Chronic Immobilization Stress Protocol for Inducing Depression-Like Behavior in Mice

Depression is not yet fully understood, but various causative factors have been reported. Recently, the prevalence of depression has increased. However, therapeutic treatments for depression or research on depression is scarce. Thus, in the present paper, we propose a mouse model of depression induced by movement restriction. Chronic mild stress (CMS) is a well-known technique to induce depressive-like behavior. However, it necessitates a complex procedure consisting of a combination of various mild stresses. In contrast, chronic immobilization stress (CIS) is a readily accessible chronic stress model, modified from a restraint model that induces depressive behavior by restricting movement using a restrainer for a certain period. To evaluate the depressive-like behaviors, the sucrose preference test (SPT), the tail suspension test (TST), and the ELISA assay to measure stress marker corticosterone levels are combined in the present experiment. The described protocols illustrate the induction of CIS and evaluation of the changes in behavior and physiological factors for the validation of depression.

This article provides a simplified and standardized protocol for induction of depressive-like behavior in chronically immobilized mice by using a restrainer. In addition, behavior and physiological techniques to verify induction of depression are explained.

Um protocolo de estresse de imobilização crônica para induzir o comportamento semelhante à depressão em camundongos

Depression is not yet fully understood, but various causative factors have been reported. Recently, the prevalence of depression has increased. However, ...

Nest Building Behavior as an Early Indicator of Behavioral Deficits in Mice

Nest building is an innate behavior in male and female rodents, even when raised in laboratory settings. As such, many researchers provide rodents synthetic and/or natural materials (such as twine, tissue, cotton, paper, and hay) as a gauge of their overall well-being and as an ancillary assessment to predict the possible decline in cognition. Typically, changes in nesting behaviors, such as failure to create a nest, indicate a change in health or welfare. In addition, nesting behavior is sensitive to many environmental and physiological challenges, as well as many genetic mutations underlying pathological disease states. The following protocol describes a nesting behavior paradigm that explores the usage of four types of nesting material. In addition, the protocol utilizes intraclass correlations to demonstrate that inter-rater reliability is higher when nests are constructed out of shredded paper compared to other common nesting materials such as cotton squares, paper twists, and soft cob bedding. The chosen methodology and statistical considerations (i.e., intraclass correlation) for this assay may be of interest for those conducting experiments assessing the quality of living of mice.&#160;

Here, we present a protocol to quantify nest building behavior in mice, which is known to be impaired in several neurological disorders and diseases. This protocol examines the utility of four materials and offers the opportunity to quantify the rater agreement in scoring, improving the validity and reliability of the assay.